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記事ID : 13291
研究用

RNAscope® Duplex(二重染色)発色アッセイ

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RNAscope® Duplex発色アッセイは、緑と赤で2種類のターゲットを同時に検出可能です。

特長

  • 2種類のターゲットの二重染色が可能 (緑と赤)
  • ヒト、マウス、ラット等多数の生物種の遺伝子に特異的なプローブを提供可能
乳がん組織RNAscope二重染色

乳がん組織(ホルマリン固定パラフィン包埋)切片のEPCAM1(赤)および EGFR(緑)のRNAscope® 二重染色。

feature-regulatory-t-cell_02.jpg

乳がん組織FFPE切片でのCD4とFOXP3のRNAscope® 二重染色。
緑色:CD4、赤色:FOXP3、黒矢印:CD4+/FOXP3+ 制御性T細胞。
S:間質領域 T:腫瘍領域

プロトコル

キット\使用サンプル FFPE※2 固定凍結※1 新鮮凍結※1 培養細胞(接着細胞)※1
Duplex (Green&Red) PDF PDF PDF PDF

※1 FFPE以外のマニュアルはサンプルの前処理方法のみが記載されております。染色の手順に関しましてはFFPEのマニュアルに書かれている手順を併せてご参照ください。
※2 プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)

必要な試薬と機器

  1. ターゲットプローブ
  2. 試薬キット
    :赤色(Fast Red)と緑色(HRP-Green)の検出になります。
  3. ポジティブコントロールプローブ
    :ターゲットの動物種(human,mouse,rat)ごとに用意がございます。
  4. ネガティブコントロールプローブ
    :各動物種共通です。
  5. コントロールスライド
    :ターゲットと同一の動物種(humanまたはmouse)をご選択下さい。
  6. 疎水性撥水ペン
  7. 必要機器
  8. その他関連試薬

1.ターゲットプローブ

* RNAscope® で多重染色を行う場合、異なるチャネル(C1、C2)のプローブが必要となります。

既存プローブ(メーカーデザイン済みの場合)

:Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

品名メーカー品番包装希望販売価格
ターゲットプローブ(C1) ADC XXXXXX*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000
ターゲットプローブ(C2) ADC XXXXXX-C2*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000

*1XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。
:既存ブローブが無い場合、プローブのカスタム作製も承ります。カスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名
メーカー
品番
包装
希望販売価格
Setup fee for RNAscope new target ADC 320269 1 serv. ¥65,000
C2プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時に C1プローブで希釈します。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合(C2プローブのみのアッセイ)は、希釈液として品番:300041 の C1 Blank Probe Diluent を使用する必要がございます。
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Blank Probe Diluent- C1 ADC 300041 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

2.試薬キット/赤色(Fast Red) and 緑色(HRP-Green)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) 2.5 HD Duplex Reagent Kit詳細データ ADC 322430 1 KIT
[for 20 slides]
¥300,000

赤色(Fast Red)と緑色(HRP-Green)の検出になります。

プローブチャネル
酵素
C1
HRP
Green
C2
AP
Red

【ご注意:内在性アルカリホスファターゼによるバックグラウンドについて】

発色 Duplexキットは発色反応にアルカリホスファターゼ(以下AP)も使用しております。そのため、 腎臓、肝臓、胎盤などの内在性APが多く存在する組織サンプルを用いる場合では、 内在性APと反応してバックグラウンドが広範囲に出てしまうことがあります。 ご購入する前に、ご自身で組織サンプル中のアルカリホスファターゼ量をご確認いただき、 バックグラウンドが出る恐れがある場合には蛍光キットのご利用をご検討ください。

3.ポジティブコントロールプローブ(ヒト用、マウス用)

ターゲットの動物種ごとにご用意がございます。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R)2.5 Duplex Positive Control Probe PPIB-C1/POLR2A-C2 - Hs, Human ADC 321641 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R)2.5 Duplex Positive Control Probe PPIB-C1/POLR2A-C2 - Mm, Mouse ADC 321651 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R)2.5 Duplex Positive Control Probe PPIB-C1/POLR2A-C2 - Rn, Rat ADC 320821 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

4.ネガティブコントロールプローブ(各種共通)

ネガティブコントロールプローブは各種共通です。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) 2-plex Negative Control Probe詳細データ ADC 320751 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

5.コントロールスライド

ターゲットと同一の動物種(humanまたはmouse)をご選択ください。

ポジティブコントロールの発現が確認されている細胞ペレットのFFPE 切片です。
サンプルがヒト、マウスの FFPE 切片の時に使用します。凍結切片等の他のサンプルの場合や、ヒト、マウス以外の動物種の場合はご自身でポジティブコントロールの発現が確認されているスライドをご用意ください。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Control Slides - Human Hela Cell Pellet, Human ADC 310045 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000
RNAscope(R) Control Slides - Mouse 3T3 Cell Pellet, Mouse ADC 310023 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000

6.疎水性撥水ペン

Barrier Pen

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen ADC 310018 1 PC
¥14,000

7.必要機器(ハイブリダイゼーションシステム)

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope® アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope® in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。

名称 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
品番 321710
本体写真 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
電力定格 155W
加熱率 20分以内に常温〜40℃まで加熱可
寸法(WxDxH) 28(W)×40(D)×21(H)cm
重量(kg) 9.5

オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

付属品
  321710
オーブン本体
電源コード
ユーザーマニュアル
HybEZ™ Humidity トレイ
EZ-Batch™ スライドホルダー
EZ-Batch™ 洗浄トレイ
浸潤ペーパー2枚(品番310015の一部)
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
HybEZTM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System詳細データ ADC 321710 1 SYSTEM
¥720,000
HybEZTM 湿潤紙
HybEZTM Humidifying Paper詳細データ
ADC 310015 1 SET
[15pack]
¥15,000

8.その他関連試薬

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) 2.5 HD Duplex Detection Reagents (Kit Components)詳細データ ADC 322500 1 KIT
[for 20 slides]
¥250,000
RNAscope(R) H202 & Protease Plus Reagents詳細データ ADC 322330 1 KIT
[for 20 slides]
¥30,000
RNAscope(R) Target Retrieval Reagents詳細データ ADC 322000 4*70 ML
¥19,000
RNAscope(R) Protease III & Protease IV Reagents詳細データ ADC 322340 1 KIT
[for 20 slides]
¥25,000
RNAscope(R) H202 and Protease Reagents詳細データ ADC 322381 1 KIT
[for 20 slides]
¥30,000
RNAscope(R) Blank Probe Diluent- C1 ADC 300041 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Protease III ADC 322337 1 BOTTLE
[4.5ml]
¥15,000
RNAscope(R) Protease IV Reagent ADC 322336 1 BOTTLE
[4.5ml]
¥19,000
BioCare EcoMount ADC 320409 100 ML
¥27,000
Vector Labs Vectamount ADC 321584 60 ML
¥27,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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