3. レトロウイルスの力価測定

● QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit（品番：VPK-120）

【構成内容】
1．QuickTiter™ Solution A
2．QuickTiter™ Retrovirus Solution B1
3．QuickTiter™ Retrovirus Solution B2
4．QuickTiter™ Solution C (2X)
5．CyQuant® GR Dye (400X)
6．QuickTiter™ Retrovirus RNA Standard

I：スタンダードカーブの作成

1．200μg/mL, 100μg/mL, 50μg/mL, 25μg/mL, 0μg/mL (1:2 serial dilution) でRNAのスタンダードを用意します。
遠心チューブに＃1〜＃9の番号を書きます。

2．20μL の1X QuickTiter™ Solution C をチューブ＃2〜＃9 に入れます。20μL の200μg/mL のRNAスタンダードを＃1と＃2 に 加えます。
チューブ＃2 をよく混合し，20μL の混合液(100μg/mL)を次のチューブに入れます。同じステップを＃8 まで繰り返します。＃9 はブランクとして使用します。

3．それぞれの希釈液から5μL をとり，フルオロメーターに適したプレートに入れます。
95μL の1X CyQuant® GR Dye をそれぞれのサンプルに入ったウェルに加え，480/520nm フィルターセットで読みます。

II：アッセイ方法

1．適切な方法でパッケージングセルラインを用いてレトロウイルスを生産します。

2．ウイルスサンプル（最大2mL）を遠心チューブに入れ，10％ FBSが入ったDMEM などの培地を使って，2mL にあわせます。
※ネガティブコントロールは，必ず使用してください。同量のトランスフェクトしていないパッケージング細胞またはモックのパッケージング細胞培地の上清を使用してください。

3．10μl のQuickTiter™ Solution A をアッセイチューブに入れ，数回緩やかに混合します。37℃で30分間インキュベートします。

4．20μL のQuickTiter™ Retrovirus Solution B1 を加え，緩やかに混合し，すぐに20μl のQuickTiter™ Retrovirus Solution B2 を加え， ゆっくりと混合します。37℃で30分間インキュベートします。

5．12,000 x g で10分間遠心し，注意深く上清を取り除きます。残りの少量の液体は再度，12,000ｇで30秒遠心して，ペレットを吸わないように，少量サイズ用のピペットで取り除きます。

6．20μL の 1X QuickTiter™ Solution C を加え，ペレットを懸濁し，10秒間ボルテックスにかけて，よく混合します。

7．12,000 x g で5分間遠心し，5μL の上清をフルオロメーターに適したプレートに写し，新しく準備した95μL の1X CyQuant® GR Dye を加えます。480/520nm フィルターセットで読みます。

8．スタンダードカーブを用いて，レトロウイルスのタイターを測定します。