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研究用

ビーズが見やすい!活性型 GTPase をプルダウンで測定するキット低分子量 GTPase 活性化アッセイ

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低分子量 GTPase 活性化アッセイキットは、色がついて見やすいアガロースビーズを用いて、活性型の低分子量 GTPase を選択的にプルダウンするアッセイキットです。沈殿した GTPase は、キットに含まれる抗体を用いてウェスタンブロッティングで検出します。

 

背景

低分子量 GTPase(GTP アーゼ)

低分子量 GTPase(GTP アーゼ) にはRas、Rho、Rab、Arf ファミリーなどがあり、シグナル伝達経路において分子調節因子として働きます。分子量約100kDaのヘテロ三量体Gタンパク質とは異なり、低分子量 GTPase の分子量は約20-30kDa で、GDP結合型(不活性型)あるいはGTP結合型(活性型)として単量体で存在しています。GDP 結合型とGTP 結合型との間を行き来するための因子が細胞内に存在し、GDP型からGTP型に変換させて低分子量GTPaseを活性化させるタンパク質をグアニンヌクレオチド交換因子(GEF;Guanine nucleotide exchange factor)と呼びます。反対に、GTP 型をGDP 型に加水分解することで低分子量 GTPase を不活性化させるタンパク質を GTPase 活性化タンパク質(GAP;GTPase activating protein)と呼びます。すなわち、低分子量GTPaseはGEFとGAPにより “ON”、“OFF” の状態を制御されています。

Rho の活性化・不活性化サイクル

特長

  • 短時間でアッセイ終了:インキュベーション(1時間)、電気泳動、ウェスタンブロッティングで実験終了。
  • 安全:放射性同位体は使用しません。
  • 目視によるチェック:アガロースビーズは目に見えるので、確認しながら操作ができます。
  • コントロール付き:ウェスタンブロッティングのコントロールつきです。

構成内容

  • アフィニティーアガロースビーズ*
  • 抗体*
  • TPγS(100X)
  • Assay/Lysis Buffer(5X)
  • GDP(100X)
  • GTPase WBポジティブコントロール

*キットにより内容物が異なります

アッセイ原理

低分子量 GTPase 活性化アッセイ原理
Fig.2 アッセイ原理
PBD:p21-binding domain

使用例

Rac Activation Assay (品番STA-401)を用いたWB
Fig.3 Rac Activation Assay (品番STA-401)を用いたウェスタンブロッティング
レーン1:GTPase WBポジティブコントロール
レーン2:293細胞ライセートをGDPと一緒に流し、PAK1 PBDアガロースビーズとインキュベーション
レーン3:293細胞ライセートをGTPγSと一緒に流し、PAK1 PBDアガロースビーズとインキュベーション

 

Arf1 Activation Assay(品番:STA-407-1)を用いたウェスタンブロッティング
Fig.4 Arf1 Activation Assay(品番:STA-407-1)を用いたウェスタンブロッティング
(左)GTPaseウェスタンブロッティング用ポジティブコントロール
(右)
レーン1:HeLa細胞ライセートをGDPと一緒に流し、GGA3 PBDアガロースビーズとインキュベー ション
レーン2:HeLa細胞ライセートをGTPγSと一緒に流し、GGA3 PBDアガロースビーズとインキュ ベーション

商品ラインアップ

参考文献

1. Moss J., Vaughan M. J. Biol. Chem. 273, 21431-21434(1998).
2. Moss J., Vaughan M. J. Biol. Chem. 270, 12327-12330(1995).
3. Kahn R. A., Gilman A.G. J. Biol. Chem. 261, 7906-7911(1986).
4. Rothman J. E. Nature 372, 55-63(1994).
5. Donaldson J. G., Jackson C. L. Curr. Opin. Cell Biol. 12, 475-482(2000).
6. Donaldson J. G., Klausner R. D. Curr. Opin. Cell Biol. 6, 527-532(1994).
7. Dell'Angelica EC, Puertollano R, Mullins C, et al., J Cell Biol. 149, 81-94(2000).
8. Takatsu H, Yoshino K, Toda K, Nakayama K. Biochem J. 365, 369-378(2002)

低分子量 GTPase 活性化アッセイ

Arf Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Arf1 Activation Assay詳細データ CBL STA-407-1 20 ASSAY
¥119,000
Arf1 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-407-1-T 5 ASSAY
¥59,000
Arf6 Activation Assay詳細データ CBL STA-407-6 20 ASSAY
¥119,000
Arf6 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-407-6-T 5 ASSAY
¥59,000

Cdc42 Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cdc42 Activation Assay詳細データ CBL STA-402 1 KIT
[20 assays]
¥119,000
Cdc42 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-402-T 5 ASSAY
¥59,000
Rac1/Cdc42 Activation Assay Combo Kit詳細データ CBL STA-404 1 KIT
[2 x 20 assays]
¥175,000
RhoA/Rac1/CDC42 Activation Assay Combo Kit詳細データ CBL STA-405 1 KIT
[3 x 10 assays]
¥175,000

Rac Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Rac1 Activation Assay詳細データ CBL STA-401-1 1 KIT
[20 assays]
¥119,000
Rac1 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-401-1-T 5 ASSAY
¥59,000
Rac1/Cdc42 Activation Assay Combo Kit詳細データ CBL STA-404 1 KIT
[2 x 20 assays]
¥175,000
Rac2 Activation Assay詳細データ CBL STA-401-2 20 ASSAY
¥119,000
Rac2 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-401-2-T 5 ASSAY
¥59,000
RhoA/Rac1/CDC42 Activation Assay Combo Kit詳細データ CBL STA-405 1 KIT
[3 x 10 assays]
¥175,000

Ral Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Ral Activation Assay詳細データ CBL STA-408 20 ASSAY
¥119,000
Ral Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-408-T 5 ASSAY
¥59,000

Ran Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Ran Activation Assay詳細データ CBL STA-409 20 ASSAY
¥119,000
Ran Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-409-T 5 ASSAY
¥59,000

Rap Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Rap1 Activation Assay Kit詳細データ CBL STA-406-1 20 ASSAY
¥119,000
Rap1 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-406-1-T 5 ASSAY
¥59,000
Rap2 Activation Assay Kit詳細データ CBL STA-406-2 20 ASSAY
¥119,000
Rap2 Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-406-2-T 5 ASSAY
¥59,000

Ras Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
H-Ras Activation Assay詳細データ CBL STA-400-H 20 ASSAY
¥119,000
H-Ras Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-400-H-T 5 ASSAY
¥59,000
K-Ras Activation Assay詳細データ CBL STA-400-K 20 ASSAY
¥119,000
K-Ras Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-400-K-T 5 ASSAY
¥59,000
N-Ras Activation Assay詳細データ CBL STA-400-N 20 ASSAY
¥119,000
N-Ras Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-400-N-T 5 ASSAY
¥59,000
Pan-Ras Activation Assay詳細データ CBL STA-400 1 KIT
[20 assays]
¥119,000
Pan-Ras Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-400-T 5 ASSAY
¥59,000

Rho Activation Assays

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RhoA/Rac1/CDC42 Activation Assay Combo Kit詳細データ CBL STA-405 1 KIT
[3 x 10 assays]
¥175,000
RhoA Activation Assay詳細データ CBL STA-403-A 1 KIT
[20 assays]
¥119,000
RhoA Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-403-A-T 5 ASSAY
¥59,000
RhoB Activation Assay詳細データ CBL STA-403-B 20 ASSAY
¥119,000
RhoB Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-403-B-T 5 ASSAY
¥59,000
RhoC Activation Assay詳細データ CBL STA-403-C 20 ASSAY
¥119,000
RhoC Activation Assay Kit, Trial Size詳細データ CBL STA-403-C-T 5 ASSAY
¥59,000

アフィニティアガロースビーズ 単品販売

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cdc42 G15A Agarose Beads (Active Cdc42-GEF)詳細データ CBL STA-433 800 UG
¥109,000
GGA3 PBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-419 400 UG
¥88,000
PAK1 PBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-411 400 UG
¥88,000
Rac1 G15A Agarose Beads (Active Rac-GEF)詳細データ CBL STA-432 800 UG
¥109,000
Raf-1 RBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-410 400 UG
¥88,000
RalBP1 PBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-420 400 UG
¥88,000
RalGDS RBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-418 400 UG
¥88,000
RanBP1 Agarose Beads詳細データ CBL STA-421 400 UG
¥88,000
RhoA G17A Agarose Beads (Active Rho-GEF)詳細データ CBL STA-431 400 UG
¥109,000
Rhotekin RBD Agarose Beads詳細データ CBL STA-412 400 UG
¥88,000

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