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レンチウイルスベースの All-in-One ベクターで効率的なノックアウト/ノックインを実現！レンチウイルス CRISPR コンストラクト作製受託サービス（Cellecta社）

メーカー名：Cellecta, Inc.

サービス概要

CRISPR-Cas9 は sgRNA と Cas9 を組み合わせることで遺伝子発現をノックアウト・ノックインできるシステムです。Cellecta 社のレンチウイルスベース CRISPR シングルベクターコンストラクトは sgRNA と Cas9 を共発現することが可能であり、ご希望の分裂・非分裂細胞で完全な遺伝子ノックアウト・ノックインを実現できます。ホスト細胞に導入されたレンチウイルスベクターはゲノム DNA に組み込まれ、娘細胞に受け継がれます。

ご希望の標的遺伝子について Cellecta社でsgRNA 設計を行い、ご指定頂いたベクターにsgRNA を組み込んだsgRNAコンストラクトをご提供致します。ご希望によりパッケージング済みウイルス粒子をご提供することも可能です。また、ご希望の標的遺伝子に対する本システムを用いたノックアウト・ノックイン細胞作製受託も承ります。

サービスの特徴

1 ベクターで sgRNA と Cas9 を共発現できる All-in-One ベクター採用
Cas9 プロモーターは CMV と UbiC から選択可能
宿主ゲノムに組み込まれることで長期安定発現を実現
パッケージ済みレンチウイルス粒子での納品も可能

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データ例

copGFP を標的とする数種の sgRNA をデザインし、copGFP 安定発現 HEK293 細胞に形質導入した。9 日後に GFP 蛍光発現を観察したところ、少なくとも 70% の細胞で GFP 発現が消失していた。

形質導入の 9 日及び 14 日後に FACS で細胞を解析したところ、9 日後には少なくとも 70%、14 日後には少なくとも 90% の細胞で GFP 発現の消失が確認できた。

CRISPR によるノックアウト・ノックイン細胞株の作製

標的となる遺伝子情報及び細胞株名称をご連絡頂ければ、レンチウイルス CRISPR コンストラクトをデザインして標的遺伝子をノックアウトまたはノックインした細胞株を納品致します。標的遺伝子の両アレルを PCR で解析し、ノックアウトまたはノックインを確認します。

●ご注意

ホ乳類以外の細胞及び初代培養細胞はサービス対象外です。

●細胞株サンプルのご送付方法

1 x 10⁶ の凍結細胞を含むバイアル 2本を発泡スチロール製の保冷ボックスに入れて頂き、5kg以上のドライアイスを入れて冷凍便で下記までご送付下さい。

サンプル送付先：
〒136-0075
東京都江東区新砂1丁目12-39
日本通運（株）新砂3号倉庫　B棟3階
TEL:03-5632-9610
コスモ・バイオ株式会社　新砂物流センター　創薬・受託サービス部

＊細胞サンプルに FBS等のウシ由来の物質が含まれている場合、感染性の病原体に感染していないウシ由来の物質であることを証明する原産国発行の英文健康証明書 (Certificate) が必要になります。この健康証明書は FBS等の輸入業者に依頼することで入手可能ですので、サンプルご送付前にメールで jutaku_gr@cosmobio.co.jp 宛にご送付下さい。

＊ FBS を含まない細胞凍結保存液をご使用いただければ上記の健康証明書は不要になります。弊社でも細胞凍結保存液 Cos Banker を販売しておりますのでご利用下さい。細胞凍結保存液をご利用の際は凍結保管し、融解後の細胞生存率を必ずご確認下さい。