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プロベネシドも洗浄操作も必要ありません！ Screen Quest™ Calbryte-520/590 Probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

AAT Bioquest (ABD) 社で製造・販売するカルシウムインジケーター：Calbryteシリーズから、簡単に細胞内カルシウム動態を検出できるアッセイキットが販売されました。カルシウムフラックスアッセイは、GPCR の薬物探索スクリーニングでよく用いられる方法です。 ABD社の「ScreenQuest™ Calbryte-520/590 Probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット」は、細胞内カルシウム動態を検出するためのロバストな均一系蛍光ベースのアッセイです。

【関連ページ】
カルシウム指示薬 Calbryte™ シリーズ

よくある質問（FAQ）あります！

チラシあります
PDF (72MB)

使用目的

■Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free
カルシウムアッセイキット

Calbryte™-520AM は、HTSスクリーニングに利用できる最も明るいカルシウムインジケーターです。細胞内に入ると、Calbryte™-520AM の親油性ブロック基が、非特異的な細胞エステラーゼによって切断され、マイナスにチャージした蛍光色素となり、カルシウムと結合するとその蛍光は大きく増強されます。

スクリーニング化合物で細胞を刺激すると、受容体は細胞内カルシウムの放出誘導し Calbryte™-520AM の蛍光が増強します。Calbryte™-520AM は、その優れた細胞保持力、高い感受性、そしてカルシウム結合時には100～250倍にまで増強するという特長から、細胞内カルシウム測定の理想的なインジケーターと言えるでしょう。

■Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free
カルシウムアッセイキット

Calbryte™ -590 は、Rhod-2 よりも長波長側にシフトした波長範囲を持つカルシウムインジケーターです。細胞内に入ると、Calbryte™-590AM の親油性ブロック基が、非特異的な細胞エステラーゼによって切断され、マイナスにチャージした蛍光色素となります。Calbryte™-590 は細胞内カルシウムに結合し、緑色蛍光波長（FITCチャンネル）と重ならない明るい赤色蛍光を生成します。

特長

細胞保持力が優れているためプロべネシドを必要としない唯一のカルシウム色素
GPCRや壊れやすいカルシウムチャンネルや難しい細胞株をモニターするための最適なアッセイ
96ウェル/384ウェルマイクロタイタープレートフォーマットのアッセイが可能で、自動化にも適合

構成内容

構成品	品番36317 もしくは品番36200(1プレート)	品番36318もしくは品番36201 (10プレート)	品番36318もしくは品番36201 (100プレート)
Calbryte™ 520AM もしくは 590AM	1 本	1 本	10 本
10X Pluronic F127 Plus	1 ボトル (1 mL)	1 ボトル (10 mL)	10 ボトル (10 mL/1ボトル)
HHBS (Hanks' buffer with 20 mM Heps)	1 ボトル (9 mL)	1 ボトル (100 mL)	なし

アッセイ概要

培養培地に細胞を用意
Calbryte-520AM または Calbryte-590AM 色素溶液 (100μL/ウェル/96ウェルプレート or 25 μL/ウェル/384ウェルプレート) を添加
室温 or 37℃インキュベーション
観察 (Calbryte-520の場合：Ex/Em=490/525 nm、Calbryte-590の場合：Ex/Em=540/590 nm)

製品データ

図1. Calbryte™ 520 probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット vs 他カルシウムアッセイキット
CHO-K細胞における内因性 P2Y レセプターの ATP 応答。CHO-K1 細胞を一晩培養し、50,000 細胞/100 µL/ウェルになるよう 96 ウェルプレートに播種した。カルシウム流動は Screen Quest™ Calbryte-520™ Probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット (赤)、他社A (青)、他社B (緑)で測定した。ATP (50 µL/ウェル) を FlexStaion 3 で表記濃度になるまで添加した。

図2. Calbryte 590 Probenecid-FreeおよびWash-Free Calcium Assay Kitを用いたCHO-K1細胞でのATP用量応答
Screen Quest™ CHO-K1細胞を、96ウェル黒色壁/透明底コスタープレートに50,000 細胞/100 µL/ウェルで一晩播種した。 100 µLの色素添加溶液を添加し、37℃で45分間、室温で15分間インキュベートした。 FlexStation 3によりATP（50 µL/ウェル）を添加した。

Screen Quest™ Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Screen Quest^TM Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36317	1 PLATE	￥48,000
Screen Quest^TM Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36318	10 PLATE	￥168,000
Screen Quest^TM Calbryte-520 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36319	1 KIT [100 Plates]	お問い合わせ

Screen Quest™ Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free カルシウムアッセイキット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Screen Quest^TM Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36200	1 PLATE	￥72,000
Screen Quest^TM Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36201	10 PLATE	￥229,000
Screen Quest^TM Calbryte-590 Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	ABD	36202	100 PLATE	お問い合わせ