記事ID ： 9469

既存製品よりもさらに高感度な測定が可能カルシウム指示薬 Cal-520

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Cal-520™ AMは既存の緑色カルシウム指示薬（Fluo-3 AMやFluo-4 AM）と比較し、シグナルノイズ比と細胞内保持が著しく改善された新規のカルシウム測定感受性蛍光色素です。

技術情報：AAT bioquest (ABD)社　カルシウムインジケーター (Cal-520®AM / Calbryte™ 520 AM) の開発

よくある質問（FAQ）あります！

使用目的

GPCRやカルシウムチャネルを発現したカルシウムシグナルを測定したい細胞に、細胞膜透過性のCal-520™ AMを前負荷します。細胞内に取り込まれるとCal-520™ AMの脂溶性保護基がエステラーゼにより加水分解され、細胞内に残留する負電荷の蛍光色素となります。この蛍光はカルシウムと結合することで極度に増強されます。細胞がアゴニストで刺激されると、受容体は細胞内へカルシウムを放出するようシグナルを発し、Cal-520™の蛍光が著しく上昇します。長波長、高感度、蛍光増感が100倍以上という特徴を有するため、Cal-520™は細胞内カルシウムの測定に理想的な指示薬です。

特長

有機アニオントランスポーター耐性：プロベネシドに干渉されるGPCR, Ca²⁺チャネルのアッセイが可能
ロバスト：Fluo-4 AM等の指示薬と比べ、著しくS/N比が向上
簡便：Fluo-3, Fluo-4, Fluo-8™等と同一の波長で測定可能（最大Ex/Em = 492 nm/514 nm）
様々な規格から自分に合ったサイズを：1 mg, 10x50 µg, ハイスループット用

使用例

プロベネシド非存在下でのCHO-M1細胞における内因性P2Y受容体のATPに対する応答

図1. プロベネシド非存在下でのCHO-M1細胞における内因性P2Y受容体のATPに対する応答。
40,000細胞/100 µL/wellの濃度でCHO-M1細胞を播種して一晩培養した。HBSSに溶解した4 µMのFluo-4 AM（左）、Cal-520™ AM（右）を100 µL添加し、37℃で2時間インキュベートした。色素負荷培地を100 µLのHBSSと置換し、50 µLの300 µM ATPを添加した。細胞はFITCチャンネルを用いて蛍光顕微鏡（オリンパスIX71）で観察した。

図2. プロベネシド有無の条件でCal-520™ AMまたはFluo-4 AMを添加したCHO-K1細胞の内因性P2Y受容体をATPで刺激した際のカルシウム動態

Cal-520 の蛍光/励起スペクトル
図3. Cal-520™ の蛍光/励起スペクトル

カルシウム指示薬 Cal-520™

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cal-520^(R), AM	ABD	21130	10*50 UG	￥48,000
Cal-520^(R), AM	ABD	21131	1 MG	￥72,000
Cal-520^(R), sodium salt	ABD	21135	10*50 UG	￥72,000
Cal-520^(R), sodium salt	ABD	21136	1 MG	￥96,000
Cal-520^(R), potassium salt	ABD	21140	10*50 UG	￥72,000
Cal-520^(R), potassium salt	ABD	21141	1 MG	￥96,000
Cal-520FF^TM, AM	ABD	21143	10*50 UG	￥84,000
Cal-520FF^TM, potassium salt	ABD	21144	10*50 UG	￥84,000
Cal-520^TM PBX Calcium Assay Kit Optimized for Probenecid-Sensitive Cell Lines	ABD	36401	100 PLATE	販売終了
Biocytin, Label Cal-520^(R)	ABD	20606	5*50 UG	￥72,000
Biotin, Label Cal-520^(R)	ABD	20605	5*50 UG	￥72,000
Dextran MW 3,000, Label Cal-520^(R)	ABD	20600	1 MG	￥48,000
Dextran MW 10,000, Label Cal-520^(R)	ABD	20601	5 MG	￥72,000
Cal-520^(R) maleimide	ABD	20610	100 UG	￥96,000
Cal-520^(R) NHS Ester	ABD	20609	100 UG	￥96,000
Cal-520FF^TM, AM	ABD	21142	1 MG	￥120,000
Cal-520N^TM, AM	ABD	21146	10*50 UG	￥84,000
Cal-520N^TM, potassium salt	ABD	21147	500 UG [10x50 ug]	￥84,000

FAQ

Cal 520、Cal 520FF、Cal 520Nの違いは何ですか？

解離定数（Kd）が異なります。
Cal520®AMのKdは 320nM (0.32µM)、
Cal520FF™AMのKdは 9.8µM、
Cal520N™AMのKdは 90µMです。

Kd値が低いカルシウムインジケーターは、高親和性キレーターであり、
Kd値が高い場合は低親和性キレーターです。

Cal520®AMなどの高親和性のインジケーターは、細胞質ゾルのCa2+レベルを定量できるようデザインされています。
一方、低親和性のインジケーターは、Ca2+濃度が高い細胞内コンパートメント（ERなど）のCa2+の測定に使用できます。

［関連商品］Pluronic® F-127

非イオン性界面活性剤である Pluronic® F-127 は、カルシウム指示薬 AM ester の水溶性を高める働きがあります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Pluronic^(R) F-127 10% solution in water	ABD	20053	10 ML	￥18,000
Pluronic^(R) F-127 20% solution in DMSO	ABD	20052	10 ML	￥18,000
Pluronic^(R) F-127 Cell culture tested	ABD	20050	10 G	￥18,000