記事ID ： 9469

既存製品よりもさらに高感度な測定が可能カルシウム指示薬 Cal-520

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Cal-520^® は、優れた輝度、向上したS/N比、および優れた細胞保持性を実現するように設計された、次世代の蛍光カルシウムインジケーターです。
本商品は、細胞透過性のAMエステル型、膜非透過性の塩型、デキストラン結合体、さらにカスタム生体分子結合のための反応性誘導体など、さまざまな形態で提供されます。

技術情報：AAT bioquest (ABD)社　カルシウムインジケーター (Cal-520^®AM / Calbryte™ 520 AM) の開発
シリーズ情報：カルシウム指示薬 Cal シリーズ

よくある質問（FAQ）あります！

＼お客様に使用感を伺いました！／

お客様の声

プレートリーダーを用いた測定では、蛍光試薬の検出感度が重要です。
Cal-520™ AM は色素の細胞外への漏出が少なく、蛍光の検出感度が良好である点が使いやすいです。

★★★★

使用目的

長波長、高感度、そして 100 倍以上の蛍光増強という特性により、Cal-520^® は細胞内カルシウム測定に理想的なインジケーターです。高い S/N 比と優れた細胞内保持性により、Cal-520^® カルシウムアッセイは、GPCR やカルシウムチャネルの評価、ならびにそれらのアゴニストおよびアンタゴニストのスクリーニングにおいて有用なツールです。

特長

波長励起/発光波長（492/515 nm）：FITC と互換性あり
優れた輝度：カルシウム結合時、Fluo-4 AM と比べて 2～3 倍明るい蛍光強度
細胞内保持性の向上：細胞質への局在が改善され、オルガネラへの偏在が低減
優れた S/N 比：カルシウム非存在下でのバックグラウンド蛍光が低く、ダイナミックレンジを最大化
二光子励起対応：多光子顕微鏡アプリケーション向けに検証済み
複数の親和性オプション：異なるカルシウム濃度範囲に対応

使用例

CHO-K細胞における内因性P2Y受容体のATPに対する反応。 — 図1. CHO-K 細胞における内因性 P2Y 受容体の ATP に対する反応。
CHO-K 細胞を、Costar 社 96 ウェルブラック/クリアボトムプレートに、1 ウェルあたり 100 µL あたり 40,000 細胞の密度で播種し、一晩培養した。1 mM プロベネシドを含む HHBS で調整した 4 µM Cal 520™ AM を 100 µL ずつ各ウェルに添加し、37 °Cで 1 時間インキュベートした。染色液を除去し、1 mM プロベネシドを含む HHBS 100 µL に置換した後、50 µL の 300 µM ATP を添加する前後で、FITC チャンネルを用いて蛍光顕微鏡（Olympus IX71）により観察した。

同一条件下で、Cal-520? AM（赤線）またはFluo-4 AM（青線）を添加し、プロベネシドを添加した場合（左）および添加しない場合（右）における、CHO-K1細胞の内在性P2Y受容体のATP刺激によるカルシウム応答 — 図２. 同一条件下で、Cal-520™ AM（赤線）または Fluo-4 AM（青線）を添加し、プロベネシドを添加した場合（左）および添加しない場合（右）における、CHO-K1 細胞の内在性 P2Y 受容体の ATP 刺激によるカルシウム応答
CHO-K1 細胞を、Costar 社 96 ウェルブラック/クリアボトムプレートに、1 ウェルあたり 100 µL あたり 50,000 細胞の密度で播種し、一晩培養した。HHBS（プロベネシド添加または非添加）に溶解した 5 µM Fluo-4 AM または Cal 520™ AM を 100 µL ずつ細胞に加え、37 °C で 1 時間インキュベートした。FlexSation を用いて、所定の最終濃度に達するように ATP（50 µL/ウェル）を添加した。

Cal-520シリーズ

インジケーター	励起/蛍光波長 (nm)	Ca²⁺ 親和性 [Kd]	主な用途	提供形態
Cal-520^®	492/515	標準 [約320 nM]	一般的なカルシウムイメージング	AM、塩類、デキストラン結合体、反応性誘導体
Cal-520FF™	492/515	低 [約9.8 µM]	高濃度 Ca²⁺ 変動、シナプス前終末	AM、Ｋ⁺塩
Cal-520N™	492/515	高 [約70 nM]	高濃度 Ca²⁺ 変動、静止時カルシウム	AM、Ｋ⁺塩
Cal-520ER™	492/515	非常に低（ER 最適化）	小胞体（ER）内カルシウム測定	AM、Ｋ⁺塩

カルシウムイオン指示薬（Cal 520、Cal 520FF、Cal 520N）の違いは何ですか？

これら 3 種類の Ca²⁺ 指示薬の主な違いは、解離定数（Kd）です：
細胞内 Ca²⁺ は非常に広い濃度範囲（例：50 nM 未満 ~50 µM 以上）で変動するため、それに対応するさまざまなイオン指示薬が用意されています。

Kd値が非常に低い Ca²⁺ 指示薬は高親和性キレート剤であり、Ca²⁺ と結合する傾向が強くあります。
一方で、 Kd 値が高い場合は、低親和性キレート剤となります。

ABD 社では、細胞内 Ca²⁺ を広い濃度範囲（例：50 nM 未満から 50 µM 以上）で検出できるよう、さまざまなイオン指示薬をご用意しています。
高親和性指示薬（例：Cal 520^® AM）は細胞質中の Ca²⁺ 濃度の定量に適しており、一方で低親和性指示薬は、Ca²⁺ 濃度が高い細胞内小器官（例：小胞体）での測定に最適化することが可能です。

カルシウム指示薬 Cal-520™

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cal-520^(R), AM	ABD	21130	10*50 UG	￥48,000
Cal-520^(R), AM	ABD	21131	1 MG	￥72,000
Cal-520^(R), sodium salt	ABD	21135	10*50 UG	￥72,000
Cal-520^(R), sodium salt	ABD	21136	1 MG	￥96,000
Cal-520^(R), potassium salt	ABD	21140	10*50 UG	￥72,000
Cal-520^(R), potassium salt	ABD	21141	1 MG	￥96,000
Cal-520FF^TM, AM	ABD	21143	10*50 UG	￥84,000
Cal-520FF^TM, potassium salt	ABD	21144	10*50 UG	￥84,000
Cal-520^TM PBX Calcium Assay Kit Optimized for Probenecid-Sensitive Cell Lines	ABD	36401	100 PLATE	販売終了
Biocytin, Label Cal-520^(R)	ABD	20606	5*50 UG	￥72,000
Biotin, Label Cal-520^(R)	ABD	20605	5*50 UG	￥72,000
Dextran MW 3,000, Label Cal-520^(R)	ABD	20600	1 MG	￥48,000
Dextran MW 10,000, Label Cal-520^(R)	ABD	20601	5 MG	￥72,000
Cal-520^(R) maleimide	ABD	20610	100 UG	￥96,000
Cal-520^(R) NHS Ester	ABD	20609	100 UG	￥96,000
Cal-520FF^TM, AM	ABD	21142	1 MG	￥120,000
Cal-520N^TM, AM	ABD	21146	10*50 UG	￥84,000
Cal-520N^TM, potassium salt	ABD	21147	500 UG [10x50 ug]	￥84,000

［関連商品］Pluronic^® F-127

非イオン性界面活性剤である Pluronic^® F-127 は、カルシウム指示薬 AM ester の水溶性を高める働きがあります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Pluronic^(R) F-127 10% solution in water	ABD	20053	10 ML	￥18,000
Pluronic^(R) F-127 20% solution in DMSO	ABD	20052	10 ML	￥18,000
Pluronic^(R) F-127 Cell culture tested	ABD	20050	10 G	￥18,000