記事ID ： 11648

細胞培養上清または血清／血漿サンプルから高純度・高収率・迅速に回収 PureExo® エクソソーム単離キット

メーカー名：101 Bio, LLC

PureExo® エクソソーム（エキソソーム）単離キットは、細胞培養上清（品番：P100）血清／血漿（品番：P101）または幹細胞培養上清（品番：P107）から完全なエクソソームを、迅速かつ効果的に回収することができます。

トライアルサイズあります！

研究者が使ってみました！
アプリケーションノート

PureExo®キット
FAQ

PureExo®キット(品番：P101）
プロトコル & トラブルシューティング

背景

エクソソームは、細胞由来の直径20-200nmの細胞外小胞で、広範囲の生体液（血液、尿、羊水、細胞培養培地など）に存在しています。エクソソームは、細胞内情報伝達に重要な役割を果たし、ある種のヒトの疾病に対する予後、治療、バイオマーカーとして使用できる可能性を持っています。

特長

超遠心、煩雑な単離操作は不要
操作時間：約2時間
超遠心よりも高い回収率（約10倍）
抗体ベースの手法より低コスト
高純度のエクソソームを回収可能（純度 >95%）
少量のサンプル（細胞培養上清：2～4 mL、血清／血漿：100～500 µL、幹細胞培養上清：20 mL）から高収率で回収
回収したエクソソームは各種アプリケーションに適用可能
（EM研究、エクソソームラベル、エクソソームサブポピュレーション、エクソソームmiRNAのqRT-PCRプロファイリング、エクソソームタンパク質のゲル分析など）

構成内容

細胞培養上清用（品番： P100）

溶液A、B、C
PureExo® カラム

血清／血漿用（品番： P101）

溶液A、B、C
サンプルバッファー
PureExo® カラム

幹細胞培養上清用（品番： P107）

溶液A、B、C
PureExo® カラム

製品データ

エクソソームの透過型電子顕微鏡画像

図1　NIH3T3細胞培地から101bio社品番：P100および競合他社品を用いて回収したエクソソームの透過型電子顕微鏡画像
101bio社品番：P100を使用して得られたエクソソームは、膜に包まれた球状の粒子（直径20-200nm）として観察された。一方競合他社品を用いて回収したエクソソームは、粒子の形状およびサイズが不均一であり、ダメージを受けた、あるいは小胞の破片であることが考えられる。

エクソソームの粒度分布分析

図2　粒度分布分析
NIH3T3細胞（1×10⁶細胞）の培地から、101bio社品番：P100および競合他社品を用いて、トータルエクソソームを単離し、BI 200SM Research Goniometer System（632.8nmレーザー）を用いて動的光散乱（DLS；dynamic light scattering）を測定した。101bio社品番：P100を用いて単離したエクソソーム群のDLS分布は、単一ピークを示し、96.3%がエクソソームの粒径として考えられる直径30～150nmの範囲であった。一方競合他社品を用いて回収したエクソソームのうち、30～150nmの範囲としてカウントされたものはそれぞれ37.7%、および26.1%であった。

エクソソーマルタンパク質マーカー分析

図3　エクソソーマルタンパク質マーカー分析
NIH3T3細胞の培地2mLおよび血清0.1mLから101bio社品番：P100および競合他社品を用いて、それぞれエクソソームを単離した。回収したエクソソームを溶解し、得られたエクソソームタンパク質を、Bio-Rad 4–20％グラジエントポリアクリルアミドゲルにロードして分離した。エクソソームのマーカーCD9および脂質ラフトマーカーフロチリンを、それぞれ抗CD9抗体（Life span Biosciences社品番LS-B7794）で認識させ、イムノブロット分析した。101bio社品番：P100は、競合他社品と比べて、高純度、高収率のエクソソームを単離した。

エクソソーム由来RNAの定量分析

図4　エクソソーム由来RNAの定量分析
左）101bio社品番：P100および競合他社品を用いてエクソソームを単離した。トータルエクソソームRNAをNanoDrop 8000分光光度計で計測した。101bio社品番：P100で単離したエクソソームは、競合他社品よりも、エクソソーム由来RNA量が多かった。
右）101bio社品番：P101および競合他社品を用いてエクソソームを単離した。トータルエクソソームRNAをNanoDrop 8000分光光度計で計測した。101bio社品番：P100で単離したエクソソームは、競合他社品よりも、エクソソーム由来RNA量が多かった。

PureExo® エクソソーム単離キット

■ 細胞培養上清用

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for cell culture media), Trial size	OBL	P100S	1 KIT [2 RXN]	販売終了
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for cell culture media)	OBL	P100	1 KIT [10 RXN]	販売終了
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for cell culture media), Large	OBL	P100L	40 RXN	販売終了

■ 血清／血漿用

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for serum & plasma), Trial size	OBL	P101S	1 KIT [2 RXN]	販売終了
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for serum & plasma)	OBL	P101	1 KIT [10 RXN]	販売終了
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for serum & plasma), Large	OBL	P101L	40 RXN	販売終了

■ 幹細胞培養上清用

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for stem cell culture media)	OBL	P107S	2 RXN	販売終了
PureExo^(R) Exosome Isolation kit (for stem cell culture media)	OBL	P107	10 RXN	販売終了

製品使用文献

【PureExo® エクソソーム単離キット（細胞培養上清用#P100）】

Osteikoetxea X, Németh A, Sódar BW, Vukman KV, Buzás EI. Extracellular vesicles in cardiovascular diseases, are they Jedi or Sith? J Physiol. 2016 Feb 13. doi: 10.1113/JP271336
Korbelik M, Banáth J, Zhang W, Wong F, Bielawski J, Separovic D. Ceramide and Sphingosine-1-Phosphate/Sphingosine act as Photodynamic Therapy-Elicited Damage-Associated Molecular Patterns: Release from Cells and Impact on Tumor-Associated Macrophages. J Anal Bioanal Tech. S1:009. doi: 10.4172/2155-9872.S1-009 (2014)
Salama A, Fichou N, Allard M, Dubreil L, De Beaurepaire L, Viel A, Jégou D, Bösch S, Bach JM. MicroRNA-29b modulates innate and antigen-specific immune responses in mouse models of autoimmunity. PLoS One. 2014 Sep 9;9(9):e106153. doi: 10.1371/journal.pone.0106153.
Mar?dziak M, Marycz K, Lewandowski D, Siudzi?ska A, ?mieszek A. Static magnetic field enhances synthesis and secretion of membrane-derived microvesicles (MVs) rich in VEGF and BMP-2 in equine adipose-derived stromal cells (EqASCs)-a new approach in veterinary regenerative medicine. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2015 Mar;51(3):230-40. doi: 10.1007/s11626-014-9828-0.
Tomoyo Kawakubo-Yasukochi, Masahiko Morioka, Yoshikazu Hayashi, Takuya Nishinakagawa, Mai Hazekawa, Shintaro Kawano, Seiji Nakamura, Manabu Nakashima The SQUU-B cell line spreads its metastatic properties to nonmetastatic clone SQUU-A from the same patient through exosomes. J of Oral Biosciences 2015/09
PureExo® citation from Japan distributor Cosmo indicates interesting exosome function: "exosome derived from highly metastatic SQUU-B cells conferred metastatic ability to nonmetastatic SQUU-A cells."
William G. Whitford Exosomes: A Major Phenomenon Flying Under the Radar cellculturedish.com 2015/09
Bonafede R, Scambi I, Peroni D, Potrich V, Boschi F, Benati D, Bonetti B, Mariotti R. Exosome derived from murine adipose-derived stromal cells: Neuroprotective effect on in vitro model of amyotrophic lateral sclerosis. Exp Cell Res. 2016 Jan 1;340(1):150-8. doi: 10.1016/j.yexcr.2015.12.009. Epub 2015 Dec 18.
Zhou Y, Fang L, Yu Y, Niu J, Jiang L, Cao H, Sun Q, Zen K, Dai C, Yang J. Erythropoietin protects the tubular basement membrane by promoting the bone marrow to release extracellular vesicles containing tPA-targeting miR-144. Am J Physiol Renal Physiol. 2016 Jan 1;310(1):F27-40. doi: 10.1152/ajprenal.00303.2015. Epub 2015 Oct 14.
Campbell CR, Berman AE, Weintraub NL, Tang YL. Electrical stimulation to optimize cardioprotective exosomes from cardiac stem cells. Med Hypotheses. 2016 Mar;88:6-9. doi: 10.1016/j.mehy.2015.12.022. Epub 2016 Jan 11.
Zhu D, Liu Z, Wang F. Effect of exosome extracted from 3T3 on proliferation of mouse colorectal cancer cells CT26. Chin J of Exp Surg. 2015 July;32(7):1634-36
Rager T, Olson J, Zhou Y, Wang Y, Besner G. Exosomes Secreted from Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells Protect the Intestines from Experimental Necrotizing Enterocolitis. J Pediatr Surg. 2016 March;S0022-3468(16)00149-4
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Masahiko Morioka, Tomoyo Kawakubo-Yasukochi, Yoshikazu Hayashi, Mai Hazekawa, Takuya Nishinakagawa, Kazuhiko Ono, Shintaro Kawano, Seiji Nakamura, Manabu Nakashima. Exosomes from oral squamous carcinoma cell lines, SQUU-A and SQUU-B, define the tropism of lymphatic dissemination. J of Oral Biosciences. 2016, http://dx.doi.org/10.1016/j.job.2016.05.001i

【PureExo® エクソソーム単離キット（血清／血漿用#P101）】

Chen L, Chen R, Kemper S, Charrier A, Brigstock DR. Suppression of fibrogenic signaling in hepatic stellate cells by Twist1-dependent microRNA-214 expression: Role of exosomes in horizontal transfer of Twist1. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2015 Sep 15;309(6):G491-9. doi: 10.1152/ajpgi.00140.2015. Epub 2015 Jul 30.
This paper is awarded TOP 10 best original research papers published by the American Physiological Society (APS Select).
(APSselect is a collection of the very best original research papers published by the American Physiological Society. Each month, the most outstanding recently published papers from our ten research journals are selected and made available through this multi-journal website.)
Osteikoetxea X, Németh A, Sódar BW, Vukman KV, Buzás EI. Extracellular vesicles in cardiovascular diseases, are they Jedi or Sith? J Physiol. 2016 Feb 13. doi: 10.1113/JP271336
William G. Whitford Exosomes: A Major Phenomenon Flying Under the Radar cellculturedish.com 2015/09
Chen L., Chen R., Brigstock D. MicroRNA profiling of circulating exosomes during experimental liver fibrosis. Hepatology. AASLD abstract, 2014 Oct. (Presidential Honored Distinct Abstract).