記事ID ： 36196

ミトコンドリアまたは酸性オルガネラ（リソソームなど）の染色による生細胞評価に細胞染色用　電位差測定色素 & Acidiotropicプローブ

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

生細胞の膜電位差やイオン勾配の維持を利用して、生細胞を測定します。

背景

生細胞には莫大な量のイオンポンプやチャネルが含まれています。これらの膜貫通型タンパク質は、多くの生命維持に関する細胞プロセスに非常に重要な細胞内イオン濃度や膜電位差の維持において責任を担っています。細胞が死滅するとその膜電位差やイオン勾配の維持が止まります。電位差やイオン勾配の変化は、電位差測定色素、Acidotropic Stain、イオン指示薬およびpHプローブを用いてモニターし細胞生存率を表すことができます。

特長

生細胞の膜電位差やイオン勾配の維持を利用
多様な波長でマルチプレックス解析に

商品ラインアップ

膜電位測定色素：
ローダミン123やテトラメチルローダミン（TMRM/TMRE）、JC-10™をはじめとする膜電位差勾配モニター用の電位差測定色素
Acidrtopic Stain：
リソソームのpH勾配を利用して生細胞のリソソームに選択的に蓄積される蛍光性プローブ「LysoBrite™」

各色素のEx/Em(nm)と特性

品名	Ex/Em (nm)	特性
TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester]	励起波長 : 549 蛍光波長 : 574 橙色蛍光	正電荷、ミトコンドリアに蓄積ミトコンドリアの局在検出にミトコンドリアの膜電位が高いほど、蛍光強度が増加 TMREはTMRMよりもわずかに疎水性ローダミン123は、FITCのスペクトル特性に類似しており、様々な蛍光機器で対応の可能性があります。
TMRM [Tetramethylrhodamine methyl ester]	励起波長 : 549 蛍光波長 : 573 橙色蛍光
Rhodamine 123	励起波長 : 507 蛍光波長 : 529 緑色蛍光
JC-1	励起波長 : 515 蛍光波長 : 529	ミトコンドリアに蓄積ミトコンドリア膜電位差の検出にミトコンドリアの膜電位が低いと緑色蛍光、膜電位が高いとオレンジ色蛍光に JC-10は、JC-1より感度が高く、水への溶解度も改善されているアポトーシス等の評価に
JC-10	励起波長 : 510 蛍光波長 : 525
LysoBrite™ NIR	励起波長 : 636 蛍光波長 : 650 近赤外	リソソームに蓄積リソソームの標識に増殖細胞と非増殖細胞に適しており、浮遊細胞と接着細胞の両方に使用できます。細胞毒性が低く、長い期間細胞内に留まることができます。LysoBrite™色素は、他社の色素よりもはるかに光安定性が高いです。
LysoBrite™ Blue	励起波長 : 433 蛍光波長 : 480
LysoBrite™ Green	励起波長 : 445 蛍光波長 : 503
LysoBrite™ Orange	励起波長 : 542 蛍光波長 : 556
LysoBrite™ Red	励起波長 : 575 蛍光波長 : 597
LysoBrite™ Deep Red	励起波長 : 596 蛍光波長 : 619

商品データ

図1. TMRM (品番：22221) の励起と発光スペクトル。TMRMは543nm緑色ヘリウムネオンレーザーで効率よく励起され、Cy3/TRITCフィルターセットで画像化できる。

図2. Excitation and emission spectrum of Rhodamine 123 (品番：22210, 緑色) とヨウ化プロピジウム (品番：17517, 赤色) の励起と発光スペクトルは明瞭に分離され、フローサイトメトリーによる2色細胞生存率評価に使用できることが示された。ローダミンとヨウ化プロピジウムの何れも、488nmアルゴンイオンレーザーで効率よく励起された。ローダミン123はFITCフィルターセットで画像化できる。ヨウ化プロピジウムはTexas Redフィルターセットで画像化できる。

図3. JC-10™とJC-1を用いて、カンプトテシンにより誘導されたJurkat細胞のミトコンドリア膜電位変化を測定した。Jurkat細胞を10μMカンプトテシンで4時間処理後、JC-1とJC-10™色素導入溶液をウェルに添加して30分間インキュベートした。JC-1とJC-10™のJ凝集体と単量体形態の両方に対して、NOVOstartマイクロプレートリーダー (BMG Labtech) を使用してEx/Em = 490/525 nmと490/590 nmにおいて蛍光強度を測定した。

膜電位測定色素

AAT Bioquest(ABD)社では、ローダミン123やテトラメチルローダミンのメチルとエチルエステル（TMRMとTMRE）をはじめとする膜電位差勾配モニター用の電位差測定色素を取り揃えております。これらの正電荷をもつローダミン色素は生細胞のミトコンドリアに選択的に蓄積され、その量は膜電位に比例します。ローダミン123はヨウ化プロピジウムと組み合わせて、フローサイトメトリーによる2色生存率評価に使うことができます。JC-10™といった蛍光指示薬は、ミトコンドリア膜電位のモニターに使用できます。JC-10™はJC-1に比べて感度が高く水への溶解度が改善されている点で優れており、より簡便です。膜電位が低いとJC-10™のミトコンドリア蓄積は低く、単量体として存在します。488nmアルゴンレーザーで励起すると、単量体JC-10™は緑色蛍光を発します。高い膜電位をもつ生細胞では、JC-10™の蓄積が増大してオレンジ色蛍光のJ-凝集体が形成されます。JC-10™を用いることで比率計測が可能となることから、細胞の健全性をモニターするのにJC-10™が実用的であるといえます。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester]	ABD	22220	25 MG	￥23,000
TMRM [Tetramethylrhodamine methyl ester]	ABD	22221	25 MG	￥23,000
Rhodamine 123	ABD	22210	25 MG	￥18,000
JC-1 [5,5,6,6-Tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide]	ABD	22200	5 MG	￥24,000
JC-1 [5,5,6,6-Tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide]	ABD	22201	50 MG	￥181,000
JC-10 Superior alternative to JC-1	ABD	22204	5*100 UL	￥24,000

Acidotropic Stain

リソソームなどの酸性オルガネラには膜結合型プロトンポンプがあります。生細胞において、これらのポンプは水素イオン（H+イオン）を細胞基質からリソソームへと汲み出すことでオルガネラの比較的低いpHを維持しています。LysoBrite™試薬は、リソソームのpH勾配を利用して生細胞のリソソームに選択的に蓄積される蛍光性プローブです。LysoBrite™試薬は、リソソームに入ると蛍光シグナルが大幅に強化されます。そこで得られた蛍光を利用して細胞集団における生細胞の割合を評価します。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
LysoBrite^TM NIR	ABD	22641	500 TEST	￥36,000
LysoBrite^TM Blue	ABD	22642	500 TEST	￥36,000
LysoBrite^TM Green	ABD	22643	500 TEST	￥36,000
LysoBrite^TM Orange	ABD	22644	500 TEST	￥36,000
LysoBrite^TM Red	ABD	22645	500 TEST	￥36,000
LysoBrite^TM Red DND-99	ABD	22647	1 KIT [500 Tests]	￥36,000
LysoBrite^TM Deep Red	ABD	22646	500 TEST	￥36,000