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生細胞の膜電位差やイオン勾配の維持を利用して、生細胞を測定します。
背景
生細胞には莫大な量のイオンポンプやチャネルが含まれています。これらの膜貫通型タンパク質は、多くの生命維持に関する細胞プロセスに非常に重要な細胞内イオン濃度や膜電位差の維持において責任を担っています。細胞が死滅するとその膜電位差やイオン勾配の維持が止まります。電位差やイオン勾配の変化は、電位差測定色素、Acidotropic Stain、イオン指示薬およびpHプローブを用いてモニターし細胞生存率を表すことができます。
特長
- 生細胞の膜電位差やイオン勾配の維持を利用
- 多様な波長でマルチプレックス解析に
商品ラインアップ
- 膜電位測定色素：
ローダミン123やテトラメチルローダミン（TMRM/TMRE）、JC-10™をはじめとする膜電位差勾配モニター用の電位差測定色素 - Acidrtopic Stain：
リソソームのpH勾配を利用して生細胞のリソソームに選択的に蓄積される蛍光性プローブ「LysoBrite™」
各色素のEx/Em(nm)と特性
| 品名 | Ex/Em (nm) | 特性 | |
|---|---|---|---|
| TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester] |
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| TMRM [Tetramethylrhodamine methyl ester] |
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| Rhodamine 123 |
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| JC-1 |
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| JC-10 |
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| LysoBrite™ NIR |
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| LysoBrite™ Blue |
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| LysoBrite™ Green |
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| LysoBrite™ Orange |
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| LysoBrite™ Red |
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| LysoBrite™ Deep Red |
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商品データ
図1. TMRM (品番：22221) の励起と発光スペクトル。TMRMは543nm緑色ヘリウムネオンレーザーで効率よく励起され、Cy3/TRITCフィルターセットで画像化できる。
図2. Excitation and emission spectrum of Rhodamine 123 (品番：22210, 緑色) とヨウ化プロピジウム (品番：17517, 赤色) の励起と発光スペクトルは明瞭に分離され、フローサイトメトリーによる2色細胞生存率評価に使用できることが示された。ローダミンとヨウ化プロピジウムの何れも、488nmアルゴンイオンレーザーで効率よく励起された。ローダミン123はFITCフィルターセットで画像化できる。ヨウ化プロピジウムはTexas Redフィルターセットで画像化できる。
図3. JC-10™とJC-1を用いて、カンプトテシンにより誘導されたJurkat細胞のミトコンドリア膜電位変化を測定した。Jurkat細胞を10μMカンプトテシンで4時間処理後、JC-1とJC-10™色素導入溶液をウェルに添加して30分間インキュベートした。JC-1とJC-10™のJ凝集体と単量体形態の両方に対して、NOVOstartマイクロプレートリーダー (BMG Labtech) を使用してEx/Em = 490/525 nmと490/590 nmにおいて蛍光強度を測定した。
AAT Bioquest(ABD)社では、ローダミン123やテトラメチルローダミンのメチルとエチルエステル（TMRMとTMRE）をはじめとする膜電位差勾配モニター用の電位差測定色素を取り揃えております。これらの正電荷をもつローダミン色素は生細胞のミトコンドリアに選択的に蓄積され、その量は膜電位に比例します。ローダミン123はヨウ化プロピジウムと組み合わせて、フローサイトメトリーによる2色生存率評価に使うことができます。JC-10™といった蛍光指示薬は、ミトコンドリア膜電位のモニターに使用できます。JC-10™はJC-1に比べて感度が高く水への溶解度が改善されている点で優れており、より簡便です。膜電位が低いとJC-10™のミトコンドリア蓄積は低く、単量体として存在します。488nmアルゴンレーザーで励起すると、単量体JC-10™は緑色蛍光を発します。高い膜電位をもつ生細胞では、JC-10™の蓄積が増大してオレンジ色蛍光のJ-凝集体が形成されます。JC-10™を用いることで比率計測が可能となることから、細胞の健全性をモニターするのにJC-10™が実用的であるといえます。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
TMRE [Tetramethylrhodamine ethyl ester] |
ABD | 22220 | 25 MG |
￥23,000 |
| TMRM [Tetramethylrhodamine methyl ester] |
ABD | 22221 | 25 MG |
￥23,000 |
| Rhodamine 123 |
ABD | 22210 | 25 MG |
￥18,000 |
| JC-1 [5,5,6,6-Tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide] |
ABD | 22200 | 5 MG |
￥24,000 |
| JC-1 [5,5,6,6-Tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide] |
ABD | 22201 | 50 MG |
￥181,000 |
| JC-10 *Superior alternative to JC-1* |
ABD | 22204 | 5*100 UL |
￥24,000 |
リソソームなどの酸性オルガネラには膜結合型プロトンポンプがあります。生細胞において、これらのポンプは水素イオン（H+イオン）を細胞基質からリソソームへと汲み出すことでオルガネラの比較的低いpHを維持しています。LysoBrite™試薬は、リソソームのpH勾配を利用して生細胞のリソソームに選択的に蓄積される蛍光性プローブです。LysoBrite™試薬は、リソソームに入ると蛍光シグナルが大幅に強化されます。そこで得られた蛍光を利用して細胞集団における生細胞の割合を評価します。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| LysoBriteTM NIR |
ABD | 22641 | 500 TEST |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Blue |
ABD | 22642 | 500 TEST |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Green |
ABD | 22643 | 500 TEST |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Orange |
ABD | 22644 | 500 TEST |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Red |
ABD | 22645 | 500 TEST |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Red DND-99 |
ABD | 22647 | 1 KIT [500 Tests] |
￥36,000 |
| LysoBriteTM Deep Red |
ABD | 22646 | 500 TEST |
￥36,000 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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