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記事ID : 13290
研究用

RNAscope® 2.5 シングルプレックス発色アッセイ

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RNAscope® シングルプレックス染色は、茶色(DAB)赤色(Fast Red)のいずれかをお選びいただけます。

特長

RNAscope® の染色シグナルは一般的な倒立顕微鏡や蛍光顕微鏡にて観察できます。1分子 の RNA がドット状のシグナルとして検出され、ドットの大きさはプローブの結合量を示しています。

BROWN RED
Mouse Eye - Wnt4
Mouse Eye - Wnt4
Mouse Pancreas - Wnt4
Mouse Pancreas - Wnt4
Mouse Skin - Axin2
Mouse Skin - Axin2
MMP9 Human lung cancer FFPE tissue
Mouse Pancreas - Wnt4

BROWN:シャープなドット状のシグナルです。
RED: BROWNと比較して若干大きめのシグナル(低発現量ターゲットの場合に有用)で、蛍光観察も可能です。
※REDは発色反応にアルカリホスファターゼ(以下AP)を使用しているため、腎臓、肝臓、胎盤などの内在性APが多く存在する組織サンプルを用いる場合では、内在性APと反応してバックグラウンドが広範囲に出てしまうことがございます。このような場合はBROWNや蛍光キットの使用を推奨いたします。
※BROWNとREDを併用して2色で染色することはできません。発色で2色で検出するにはDuplex(二重染色)発色アッセイをご使用ください(緑と赤での検出となります)。

プロトコル

キット\使用サンプル FFPE※2 固定凍結※1 新鮮凍結※1 培養細胞(接着細胞)※1
BROWN PDF PDF PDF PDF
RED PDF PDF PDF PDF

※1 FFPE以外のマニュアルはサンプルの前処理方法のみが記載されております。
  染色の手順に関しましてはFFPEのマニュアルに書かれている手順を併せてご参照ください。
※2 プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)

必要な試薬と機器

1.ターゲットプローブ

既存プローブ(メーカーデザイン済みの場合)

:Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

品名メーカー品番包装希望販売価格
ターゲットプローブ ADC XXXXXX*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000

*1XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。
:既存ブローブが無い場合、プローブのカスタム作製も承ります。カスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名メーカー品番包装希望販売価格
Setup fee for RNAscope new target ADC 320269 1 serv.
¥65,000

2.試薬キット/茶色(DAB) or 赤色(Fast Red)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) 2.5 HD Reagent Kit- BROWN詳細データ ADC 322300 1 KIT
[for 20 slides]
¥200,000
RNAscope(R) 2.5 HD Reagent Kit- RED詳細データ ADC 322350 1 KIT
[for 20 slides]
¥200,000

茶色(DAB)または赤色(Fast Red)からご選択下さい。

【ご注意:内在性アルカリホスファターゼによるバックグラウンドについて】
発色REDキット(品番:322350)は発色反応にアルカリホスファターゼ(以下AP)を使用しているため、 腎臓、肝臓、胎盤などの内在性APが多く存在する組織サンプルを用いる場合では、 内在性APと反応してバックグラウンドが広範囲に出てしまうことがあります。 REDキットをご購入する前には、ご自身で組織サンプル中のアルカリホスファターゼ量をご確認いただき、 バックグラウンドが出る恐れがある場合には発色BROWNキット(品番:322300)や蛍光キットをご検討ください。

3.ポジティブコントロールプローブ(ヒト用、マウス用、ラット用)

通常は PPIB を推奨していますが、リンパ組織などは POLAR2A を推奨しています。

  • PPIB(Cyclophilin B): 中程度に発現しているコントロール遺伝子で、様々な組織のコントロールとして推奨しています(10〜30 コピー/細胞)。
  • Polr2a(DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB1): 低発現の遺伝子で、網膜組織やリンパ組織を使用する際のコントロールとして推奨しています(3〜15 コピー/細胞)。
  • UBC(ubiquitin C): 高発現のコントロール遺伝子です。高発現のターゲットのとき以外は推奨していません(20 コピー以上/細胞)。
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Positive Control Probe - Hs-PPIB, Human ADC 313901 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Hs-POLR2A, Human ADC 310451 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Hs-UBC, Human ADC 310041 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Mm-Ppib, Mouse ADC 313911 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Mm-Polr2a, Mouse ADC 312471 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Mm-UBC, Mouse ADC 310771 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Rn-Ppib, Rat ADC 313921 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Rn-Polr2a, Rat ADC 312481 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Rn-UBC, Rat ADC 312011 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

4.ネガティブコントロールプローブ(各種共通)

ネガティブコントロールプローブは各動物種共通です。

DapB (Dihydrodipicolinate reductase): バクテリア(Bacillus subtilis strain SMY)由来の酵素遺伝子でヒトやマウス等には交差しないため、動物種を問わずネガティブコントロールとしてご使用になれます。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Negative Control Probe-DapB ADC 310043 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

5.コントロールスライド

ターゲットと同一の動物種(humanまたはmouse)をご選択ください。

ポジティブコントロールの発現が確認されている細胞ペレットのFFPE 切片です。
サンプルがヒト、マウスの FFPE 切片の時に使用します。凍結切片等の他のサンプルの場合や、ヒト、マウス以外の動物種の場合はご自身でポジティブコントロールの発現が確認されているスライドをご用意ください。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Control Slides - Human Hela Cell Pellet, Human ADC 310045 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000
RNAscope(R) Control Slides - Mouse 3T3 Cell Pellet, Mouse ADC 310023 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000

6.疎水性撥水ペン ※必須

Barrier Pen

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen ADC 310018 1 PC
¥14,000

7.必要機器(ハイブリダイゼーションシステム)

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope® アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope® in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。

名称 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
品番 321710
本体写真 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
電力定格 155W
加熱率 20分以内に常温〜40℃まで加熱可
寸法(WxDxH) 28(W)×40(D)×21(H)cm
重量(kg) 9.5

オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

付属品
  321710
オーブン本体
電源コード
ユーザーマニュアル
HybEZ™ Humidity トレイ
EZ-Batch™ スライドホルダー
EZ-Batch™ 洗浄トレイ
浸潤ペーパー2枚(品番310015の一部)
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
HybEZTM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System詳細データ ADC 321710 1 SYSTEM
¥720,000
HybEZTM 湿潤紙
HybEZTM Humidifying Paper詳細データ
ADC 310015 1 SET
[15pack]
¥15,000

8.その他関連試薬

  • ProteaseV:培養細胞(接着細胞)を使用する際、試薬キットとは別に購入する必要がございます。※
  • ProteaseW:新鮮凍結切片を使用する際、試薬キットとは別に購入する必要がございます。※
  • 封入剤:EcoMountまたはVectaMountが推奨となります。その他の封入剤はメーカーではテストしておりません。
  • ※サンプルの前処理方法につきましては本ページ上部にございますマニュアルも併せてご覧ください。
    品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
    RNAscope(R) Protease III ADC 322337 1 BOTTLE
    [4.5ml]
    ¥15,000
    RNAscope(R) Protease IV Reagent ADC 322336 1 BOTTLE
    [4.5ml]
    ¥19,000
    BioCare EcoMount ADC 320409 100 ML
    ¥27,000
    Vector Labs Vectamount ADC 321584 60 ML
    ¥27,000

    商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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    「RNAscope® 2.5 シングルプレックス発色アッセイ」は、下記のカテゴリーに属しています。

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