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細胞骨格（アクチン・チューブリン）やDNAを超解像度で蛍光観察 Spirochrome プローブ（SiR-Actin／SiR-Tubulin／SiR-DNA）

メーカー名：Cytoskeleton, Inc.

Spirochrome社が開発した生細胞イメージングプローブは、生細胞内の微小管（SiR-Tubulin）とF-アクチン（SiR-Actin）、DNA（SiR-DNA）を染色する細胞透過性化合物です。

本プローブは Nature Methods で紹介され、Journal of Biological Chemistry では表紙を飾りました。

※SiRシリーズとSiR700シリーズは、蛍光波長が異なります。

研究者が使ってみました！
アプリケーションノート

背景

Spirochrome プローブとは？

シリコンローダミン（SiR）プローブ

Spirochrome 技術は、独自の蛍光色素分子であるシリコンローダミン（SiR：silicon rhodamine）を基盤としています。

シリコンローダミン（SiR）は、ローダミンに類似した明るく光安定な色素で、細胞透過性、蛍光性、超解像顕微鏡との相性の良さが特長です。SiR蛍光の励起/蛍光は、遠赤色光であるため生細胞イメージング実験での毒性を低く抑えます。SiRは、標準的なCy5 設定で使用することができるため、多くの蛍光顕微鏡で使用できます。SiR-ベースプローブは、上記のように他の蛍光プローブとは大きく異なる特長を持つ画期的な生細胞イメージングプローブです。SiRの詳細な特性については、Nature Chemistry 誌掲載の文献をご覧ください。
細胞骨格の生細胞イメージングに最適な蛍光性プローブ

SiR-actin およびSiR-tubulin は、Nature Methods 誌で紹介されました。これらのプローブは、アクチンとチューブリンの蛍光イメージングのための優れた輝度を持ち、かつ細胞傷害性が非常に低い、といった特長を備えています。SiR-actin およびSiR-tubulinは、超解像顕微鏡と組み合わせることで、前例のない高解像度で、細胞骨格の生細胞イメージングを可能にします。

SiR-Actin および SiR-Tubulinは、トランスフェクションや洗浄ステップなしで使用することができます。これらの機能を強調する実験として、全血にSiR-Actinを添加するだけで赤血球のアクチン繊維を染色した例があります。遠赤色光の励起/発光スペクトルは、遺伝的にコードされたレポーターとも同時に利用可能です。

FAQ あります！

特長

細胞透過性
光安定的
超解像度
遠赤フルオロフォア
蛍光性
非細胞傷害性

各プローブの特性

**SiR-Actin（アクチン染色プローブ：CY-SC001）**
λ_abs	652 nm
λ_Em	674 nm
ε_{652 nm}	1.0·10⁵ mol^-1·cm^-1
MW	1241.6 g/mol
MF	C₇₁H₈₈N₈O₁₀Si

**SiR-Tubulin（チューブリン染色プローブ：CY-SC002）**
λ_abs	652 nm
λ_Em	674 nm
ε_{652 nm}	1.0·10⁵ mol^-1·cm^-1
MW	1303.6 g/mol
MF	C₇₃H₈₆N₄O₁₆Si

**SiR-DNA（DNA染色プローブ：CY-SC007）**
λ_abs	652 nm
λ_Em	674 nm
ε_{652 nm}	1.0·10⁵ mol^-1·cm^-1
MW	950.2 g/mol
MF	C₅₆H₅₉N₉O₄Si

使用例

Videos of cells labeled with SiR-probes

心筋細胞（Cardiac myocytes）
SiR-Actin で染色した新生仔マウスの初代心筋細胞。高速（50fps）、共焦点イメージング。
（Courtesy of Adam Kwiatkowski and Simon Watkins, department of cell biology and center for biologic imaging, University of Pittsburgh.）

マウス卵母細胞（Mouse oocyte）
SiR-Tubulinで染色したCAG::H2B-EGFPトランスジェニックマウスの卵母細胞。
染色体（H2B）が赤、微小管が緑に疑似カラーされています。
（Courtesy of Petr Solc, Institute of Animal Physiology and Genetics at Academy of Sciences of the Czech Republic, Brno.）

HeLa 細胞
mCherry-H2B（赤色）を発現するHeLa細胞をSiR-Tubulin （緑色）で染色。共焦点イメージング。
（Courtesy of Daniel Gerlich and Claudia Blaukopf, Institute of Molecular Biotechnology, Vienna.）

Images of cells labeled with SiR-probes

HUVEC Cells
SiR-Actinで染色したHUVEC細胞の共焦点イメージ。（Courtesy of Urim Retkoceri and Steffen Dietzel, Ludwig-Maximilians Universitat, Munchen.）

ラット海馬ニューロン（Rat hippocampal neurons）
SiR-Actinで染色した培養ラット海馬ニューロンのSTED画像。180 nm 間隔で明瞭なアクチンリング（縞模様）を観察できる。（Courtesy Of Elisa D'Este, MPI Biophysical Chemistry, Göttingen.）

MCF10A 細胞（三次元培養）
マトリゲル上で培養したSiR-Tubulin染色（赤色）H2B-GFP（青色）発現MCF10A 細胞。LSM 倒立顕微鏡でイメージング。（Courtesy of Christian Conrad and Katharina Jechow, Heidelberg）

MCF10A 細胞（三次元培養）
マトリゲル上で培養したSiR-Actin染色（赤色）H2B-GFP（青色）発現MCF10A 細胞。LSM 倒立顕微鏡でイメージング。（Courtesy of Christian Conrad and Katharina Jechow, Heidelberg）

Spirochrome プローブ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
SiR-Actin Kit	CYT	CY-SC001	1 KIT [50-300 slides]	￥170,000
SiR-Tubulin Kit	CYT	CY-SC002	1 KIT [50-300 slides]	￥170,000
SiR-DNA Kit	CYT	CY-SC007	1 KIT [50-300 slides]	￥110,000
SiR-Lysosome Kit	CYT	CY-SC012	1 KIT [50-300 slides]	￥123,000

セット品：Cytoskeleton Kit（SiR-Actin／SiR-Tubulin）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cytoskeleton Kit (SiR-Actin + SiR-Tubulin)	CYT	CY-SC006	1 KIT [50-300 slides]	販売終了

参考文献

“Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton”; G. Lukinavicius, L.Reymond, E. D’Este, A. Masharina, F. Göttfert, H. Ta, A. Güther, M. Fournier, S. Rizzo, H. Waldmann, C. Blaukopf, C. Sommer, D. W. Gerlich, H.-D. Arndt, S. W. Hell & K. Johnsson; Nature Methods 11, 731–733, 2014.
“STED Nanoscopy Reveals the Ubiquity of Subcortical Cytoskeleton Periodicity in Living Neurons”; E. D’Este, D. Kamin, F. Göttfert, A. El-Hady, S. W. Hell; Cell Reports , Volume 10 , Issue 8 , 1246 – 1251, 2015.
“A near-infrared fluorophore for live-cell super-resolution microscopy of cellular proteins”; G. Lukinavicius, K. Umezawa, N. Olivier, A. Honigmann, G. Yang, T. Plass, V. Mueller, L. Reymond, I. R. Corrêa Jr, Z. Luo, C. Schultz, E. A. Lemke, P. Heppenstall, C. Eggeling, S. Manley & K. Johnsson; Nature Chemistry 5, 132–139, 2013.
“Dynamic actin filaments control the mechanical behavior of the human red blood cell membrane”; D. S. Gokhin, R. B. Nowak, J. A. Khoory, A. de la Piedra, I. C. Ghiran and V. M. Fowler; Mol. Biol. Cell; February 25, 2015.
“A cleavable cytolysin-neuropeptide Y bioconjugate enables specific drug delivery and demonstrates intracellular mode of action”; V. M. Ahrens, K. B. Kostelnik, R. Rennert, D. Böhme, S. Kalkhof, D. Kosel, L. Weber, M. von Bergen and A. G. Beck-Sickinger; J. Control. Release; 209:170-178, 2015.
“Red Si–rhodamine drug conjugates enable imaging in GFP cells”; E. Kim, K. S. Yang, R. J. Giedt and R. Weissleder; Chem. Commun., 50, 4504-4507, 2014.