セルバイオラボ社 アデノウイルスによる遺伝子デリバリー プロトコール内で使用した商品
技術情報
セルバイオラボ社 アデノウイルスによる遺伝子デリバリー
使用するキットおよび試薬
● QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit（品番：VPK-109）
【構成内容】
1．Anti-Hexon Antibody
2．Secondary Antibody, HRP Conjugate
3．DAB Substrate
4．Diluent (10X)
5．Ad-β gal Positive Control
<< キットに含まれないもの>>
1．Recombinant adenovirus of interest
2．HEK 293 cells and cell culture growth medium
3．Methanol
4．1% BSA/PBS
5．H2O2
6．Light Microscope
7．(optional) β-Galactosidase Staining Kit (Cat.# AKR-100)
プロトコール
ご希望のウイルスを準備します。
免疫染色
1． プレートを傾け，プレートの縁から培地をアスピレートします。
0.5mLの冷メタノールをゆっくりと加え，感染させた293細胞を固定します。
-20℃で20分インキュベートします。
2． 固定した細胞を3回1xPBS，5分間洗浄します。
3． 1％ BSA in PBS で室温で1時間ブロックします。（orbital shaker をご使用ください）
4． 0.25 mL のHexon 抗体をそれぞれのウェルに加え，室温で1時間インキュベートします（orbital shaker をご使用ください）。
5． 固定した細胞を3回1xPBS，5分間洗浄します。
6． 0.25 mL の希釈したHRP標識した二次抗体をそれぞれのウェルに加え，室温で1時間インキュベートします（orbital shaker をご使用ください）。
7． 固定した細胞を3回1xPBS，5分間洗浄します。
8． 0.25mLの1X DAB working solution をそれぞれのウェルに加え，室温で10分間インキュベートしますorbital shaker をご使用ください）。
※インキュベーション後5分以内にアデノウイルス感染細胞は濃茶色に染色されます。
9． DABをアスピレートし，1xPBSで二回洗浄します。
10．染色された細胞をカウントします。
※ 1ウェルあたり少なくとも5つのフィールドに分けてカウントしてください。
11．染色された細胞の平均をとり，ウイルスのタイターを計算します。(infectious units/mL).
