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研究用

蛍光Elispotで複数のサイトカインを同時に検出 特集:Fluorospot

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FluoroSpotとは

catalog_13817.jpg

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FluoroSpot は、タンパク質を分泌する細胞の検出、定量に使用されます。このイムノアッセイは、ELISpot の感度と複数の分析対象物の分泌を同時に調べる能力を兼ね備えています。

MAB_banner_all.png

 

使用目的

希少細胞の同定

FluoroSpotは、細胞内サイトカイン染色の最大500倍の感度を持つ、最も感度の高い細胞アッセイの1つです。1つの細胞が分析物を分泌すれば、1つのスポットとして 検出・可視化されます

キネティクスが異なる分析対象物の研究

FluoroSpotでは、複数のサイトカインやイムノグロブリンの放出を単一細胞レベルで調べることができます。活性化後に直接放出されるサイトカインは、細胞内プロセスを操作することなく、より遅い動態を持つサイトカインと一緒に分析することができます。

スケールアップが簡単

FluoroSpotはロバストなので、探索段階から大規模試験へ簡単にスケールアップが可能です。

感度を示す事例

FluoroSpot とフローサイトメトリーの感度比較のために、105個の非トランスフェクト細胞に IFN-γ とIL-10 を構成的に分泌するトランスフェクトCHO細胞の濃度をいくつか振って混合し (X軸)、測定した。左のY軸にスポット形成細胞(SFC)の数、右のY軸にサイトカイン細胞内染色細胞(ICS)の頻度を示す。FluoroSpot は、わずか10個のトランスフェクト細胞を加えただけでサイトカイン分泌を検出する一方で、フローサイトメトリーでは、少なくとも 5,000個のトランスフェクト細胞が必要であった。
(図は Chauvat et al., Hum Vaccin Immunother:2014から引用)。

MAB_FluoroSpot_02.jpg

アプリケーション例

FluoroSpot
3色の FluoroSpotアッセイを用いることで、1つの分析物を分泌する3つの細胞集団(1-3)、2つの分析物を分泌する3つの集団(4-6)、3つの分析物すべてを分泌する1つの集団(7)を識別することができます。

FluoroSpot は高感度なため、ワクチンやがん研究などで多機能な細胞を同定するのに適しています。

様々な分泌プロファイルを検出することで、反応細胞を異なる機能グループに分けることができます。複数のタンパク質を並行して調べることで、同じウェル内で異なる細胞集団を識別する可能性が高まります。特定の抗原に対する細胞傷害性T細胞応答を調べる解析では、IFN-γ は IL-2、TNF-α、またはグランザイムBとしばしば一緒に測定されます。刺激剤には通常、ワクチン抗原をカバーするペプチドプールを使用します。

MAB_FluoroSpot_04.jpg
同一ウェルから得られた 3 つの個別画像と、3 つのフィルターからの画像を組み合わせたオーバーレイ画像を示す FluoroSpot解析。

 

キットの種類と構成内容

Flexible, validated, or down a charted path ? it’s your choice.

  • FluoroSpot Flex
    その名の通り「フレキシブル」なキットフォーマットで、主要な試薬のみが含まれていますので、お客様ご自身でカスタマイズする場合に有用です。、分析物を選択し、10万通り以上の組み合わせを作成することができます
  • FluoroSpot Plus
    いわゆる「キット」の形式でお届けする商品です。Mabtech社の柱となる商品群でプレコートプレートや、一般的に必要な試薬が含まれています。有効な分析物の組 み合わせとプレコートされたプレートで、時間を節約し、ばらつきを最小限に抑えます。
  • FluoroSpot Path Pathシリーズは、特定の抗原を含み、特定の病原体に対する免疫反応を研究するために設計されています。
構成内容 FluoroSpot Flex
adaptable
 
FluoroSpot PLUS
Reproducible
  おススメです!
FluoroSpot Path
Antigen-specific
 
FluoroSpot Plate Non-Coated Pre-coated Pre-coated
キャプチャー抗体 Coated on plate Coated on plate
検出抗体
蛍光標識二次試薬
抗CD抗体
(ポジティブコントロール)*
 
抗CD28抗体
(共刺激用)*
R848+IL-2
(ポリクローナルアクチベーター)**
FluoroSpot エンハンサー
ペプチドプールもしくは抗原    
サイズ 1、10プレート分の試薬量 2、10プレート分 1プレート分
キットイメージ MAB_fspot-flex-clear7-dark3-1.jpg MAB_fspot-plus-clear4-dark3-2.jpg MAB_fspot-path-clear2-dark2-1.jpg

*特定のサイカイン分析物に含まれます。
**特定の免疫グロブリン分析物に含まれます。

 

分析

Mabtech IRIS™ 2

MAB_FluoroSpot_IRIS_01.jpg

FluoroSpotキットの分析には、以下の波長(励起/発光)のフィルターを備えたFluoroSpotリーダーが必要です:

  • 380nm/430nm (LED380, DAPI)
  • 490nm/510nm (LED490, FITC)
  • 550nm/570nm (LED550, Cy3)
  • 640nm/660nm (LED640, Cy5)
すべてのFluoroSpotキットは、Mabtech社 FluoroSpotリーダーのMabtech IRIS™ 2で簡単に読み取ることができます。この新しいソフトウェアは、正確なスポットセンター検出のために最適化されており、正確なマルチプレキシングを実現します。
※本機器は当社グループ会社であるビーエム機器株式会 社が取り扱っております。詳細はコチラ

 

 

ポジティブコントロール

ELISpot や FluoroSpot アッセイのポジティブコントロールの調製に使用するペプチドや抗体製品です。T細胞やB細胞を活性化し、サイトカインやイムノグロブリンの分泌を誘発させる際にご利用いただけます。

 

技術情報

 

よくあるご質問

 

参考文献

Mabtech社の FluoroSpot キットは、ワクチン開発からがん研究に至るまで、数多くの出版物に掲載されています。詳細は下記をご覧ください

商品ラインアップ

ヒト サル マウス ウシ
GM-CSF GM-CSF - -
Granzyme B - - -
IFN-γ - IFN-γ IFN-γ
IgA IgA - -
- - IgG1 -
IgG IgG - -
- - IgG2a -
- - IgG2b -
- - IgG2c -
IgG3 - IgG3 -
IgG4 - - -
IgM IgM - -
IL-1β - - -
IL-2 IL-2 IL-2 IL-2
IL-3   - -
IL-4 IL-4 IL-4 -
IL-5 IL-5 IL-5 -
IL-6 IL-6 IL-6 -
IL-8(XXCL8) IL-8(XXCL8) - IL-8(XXCL8)
IL-10 - IL-10 -
IL-12/-13(p40) IL-12/-13(p40) - -
IL-13 - - -
IL-17A - IL-17A -
IL-22 - - -
IL-27 - - -
TNFα TNFα - -

ヒト用のキットをご使用の場合、ヒト以外の霊長類にもご使用いただける場合がございます。
現在Mabtech社にて確認されている交差性情報はこちらからご確認ください。

>>>Non-Human Primate Cross-reactivity

交差動物例:アカゲザル、カニクイザルなど

FluoroSpot FLEXのご注文方法

お客様のご希望条件に合わせた組み合わせでのご提供となります。
お問い合わせの際は

  • 分析対象の動物種(ヒト、サル、マウス、ウシ)
  • Analyte 数(1〜4 Analytesまで選択可)
  • ご希望の分析対象(IFN-γなど)※上記の表よりお選びください
  • ご希望の蛍光色(黄色、緑、赤、青)
  • ご希望サイズ(1 プレート または 10 プレート 包装)

上記5点の情報を記載の上、下記のお問い合わせフォームよりお問い合わせください。

参考価格: 1 analyte 用 ヒト FluoroSpot

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
IFN-γ FluoroSpotFLEX, Human詳細データ MAB X-01A-1 1 KIT
[1 plate]
¥46,000
IFN-γ FluoroSpotFLEX, Human詳細データ MAB X-01A-10 1 KIT
[10 plate]
¥388,000
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FluoroSpot PLUS商品

複数のターゲットを取り揃えておりますので、以下のELISA/ELISpot検索よりご覧ください。

ヒトFluoroSpot PLUS商品の主なラインアップ

※その他動物種用のFluoroSpot商品も取り扱いしております。

■ 1 analyte 用 FluoroSpot(蛍光1色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
FluoroSpot Plus: IFN-γ, Human詳細データ MAB FSP-01A-2 1 KIT
[2 plates]
¥107,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ, Human詳細データ MAB FSP-01A-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ, Human詳細データ MAB FSP-01B-2 1 KIT
[2 plates]
¥107,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ, Human詳細データ MAB FSP-01B-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
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■ 2 analytes 用 FluoroSpot(蛍光2色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-2, Human詳細データ MAB FSP-0102-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-2, Human詳細データ MAB FSP-0102-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-13, Human詳細データ MAB FSP-0104-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-13, Human詳細データ MAB FSP-0104-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10, Human詳細データ MAB FSP-0107-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10, Human詳細データ MAB FSP-0107-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-0108-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-0108-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-0109-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-0109-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-4, Human詳細データ MAB FSP-0116-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-4, Human詳細データ MAB FSP-0116-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
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■ 3 analytes 用 FluoroSpot(蛍光3色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-13, Human詳細データ MAB FSP-0104-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-13, Human詳細データ MAB FSP-0104-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-0108-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-0108-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-4, Human詳細データ MAB FSP-0116-2 1 KIT
[2 plates]
¥173,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-4, Human詳細データ MAB FSP-0116-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-2/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-010209-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-2/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-010209-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-17A/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-010308-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-17A/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-010308-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-2, Human詳細データ MAB FSP-010702-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-2, Human詳細データ MAB FSP-010702-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-010703-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-010703-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-010708-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-10/IL-5, Human詳細データ MAB FSP-010708-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
IFN-γ/IL-10/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-010710-2 1 KIT
[2 plates]
販売終了
IFN-γ/IL-10/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-010710-10 1 KIT
[10 plates]
販売終了
IFN-γ/Granzyme B/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-011002-2 1 KIT
[2 plates]
販売終了
IFN-γ/Granzyme B/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-011002-10 1 KIT
[10 plates]
販売終了
IFN-γ/Granzyme B/TNF-α FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-011009-2 1 KIT
[2 plates]
販売終了
IFN-γ/Granzyme B/TNF-α FluoroSpot kit, pre-coated, Human詳細データ MAB FSP-011009-10 1 KIT
[10 plates]
販売終了
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-22/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-011803-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IFN-γ/IL-22/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-011803-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IL-1β/IL-6/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-121309-2 1 KIT
[2 plates]
¥221,000
FluoroSpot Plus: IL-1β/IL-6/TNF-α, Human詳細データ MAB FSP-121309-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
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■ 4 analytes FluoroSpot(蛍光4色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
FluoroSpot Plus: IL-22/IFN-γ/IL-10/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-18010703-2 1 KIT
[2 plates]
¥274,000
FluoroSpot Plus: IL-22/IFN-γ/IL-10/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-18010703-10 1 KIT
[10 plates]
お問い合わせ
FluoroSpot Plus: IL-22/IFN-γ/IL-5/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-18010803-2 1 KIT
[2 plates]
¥274,000
FluoroSpot Plus: IL-22/IFN-γ/IL-5/IL-17A, Human詳細データ MAB FSP-18010803-10 1 KIT
[10 plates]
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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