エクソソーム由来のRNAを含む cfc-DNA/RNA を精製 尿用 循環セルフリー＆ウイルス核酸精製キット

尿（フレッシュ／凍結／保存）から、エクソソーム由来のRNAを含む循環セルフリーDNA（cfc-DNA）やウイルスDNA／RNAを、迅速に精製・濃縮できるキットです。精製したDNA／RNAは高品質で、PCR阻害物質を含みません。

本キットは、Norgen社独自のスピンカラムクロマトグラフィーを用いて、全てのサイズの cfc-DNA・循環RNA（microRNA を含む）・エキソソーム由来のRNAを精製することができます。他社のキットとは異なり、フェノール／クロロホルム抽出やプロテアーゼ処理の必要がありません。また、使用目的に合わせて、50 µL から 100 µL の量で溶出することが可能です。精製した核酸は、PCR・qPCR・メチル化感受性逆転写 qPCR（methylation-sensitive reverse transcription qPCR）、RT-PCR、メチル化感受性PCR、サザンブロット法、ノーザンブロット法、RNase プロテクションアッセイ、プライマー伸長法、発現アレイ、次世代シーケンシング（NGS）などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Mini キット（250 µL - 2 mL）、Midi キット（2 - 10 mL）、Maxi キット（10 - 30 mL）からお選びいただけます。

• 1回の溶出で、全てのサイズの循環DNA・循環RNA・エクソソーム由来のRNA（micro RNA・ウイルスDNA／RNAを含む）を単離
• 様々な量の尿サンプルに対応
  （Mini キット： 250 µL - 2 mL 、Midi キット： 2 - 10 mL、Maxi キット： 10 - 30 mL）
• フェノール抽出やキャリアRNA不要
• サイズやGC含量に関わらず、全てのRNAをバイアスなしで結合・溶出
• 循環セルフリーDNA／RNA、ウイルスDNA／RNAを目的に合わせた溶出量に濃縮
  （Mini／Midi／Maxi キット： 50 - 100 µL）
• 短時間で高品質なRNA／DNAを精製
  （Mini キット： 25 - 30 分、Midi キット： 40 - 45 分、Maxi キット： 45 - 50 分）
• 様々な尿サンプル（新鮮／凍結／保存）に対応

Mini キット（品番： 59900）の使用例

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図1　様々な量の尿から精製したRNAの直線性
本キットを用いて、尿（500 µL、1 mL、2 mL）からRNAを精製した。精製RNA 2 µL を RT-qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の尿から精製した miR-21 の直線性を評価した。本キットは、500 µL の尿から精製した miR-21 量に対して、1 mL の尿からの回収率は 95% であった。また、1 mL の尿から精製した miR-21 量に対して、2 mL の尿からの回収率は 92% であった。

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図2　尿RNAサンプル中に存在する阻害物質量の測定
本キットを用いて、尿（500 µL、1 mL、2 mL）からRNAを単離した。様々な量で溶出したRNA（2、4、8 µL）を用いて、反応容量 20 µL で逆転写反応を行った後に qPCR により増幅し、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。逆転写反応のテンプレートとして用いるPCRインプット量が増加しても、miR-21 qPCR の Ct値に影響は見られなかった。実際には、PCRインプット量の増加に伴い、Ct値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したRNAは、尿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

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図3　様々な量の尿から精製したDNAの直線性
本キットを用いて、尿（500 µL、1 mL、2 mL）から循環DNAを精製した。精製DNA 2 µL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の尿から精製したハウスキーピング遺伝子 5S rRNA 量の直線性を評価した。500 µL の尿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、1 mL の尿からの回収率は 91% であった。また、1 mL の尿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、2 mL の尿からの回収率は 95% であった。

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