記事ID ： 15813

エクソソーム由来のRNAを含む cfc-DNA/RNA を精製血漿／血清用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製キット

メーカー名：Norgen Biotek Corp.

EDTA／クエン酸を添加した血漿／血清サンプル（フレッシュ／凍結）から、エクソソーム由来のRNAを含む循環セルフリーDNA（cfc-DNA）／RNAを、迅速に精製・濃縮できるキットです。精製したDNA／RNAは高品質で、PCR阻害物質を含みません。
ヘパリンを添加した血液から調製した血漿サンプルは、精製後のRT-PCRなどの実験に影響するため、使用できません。

精製した核酸は、PCR・qPCR・メチル化感受性逆転写 qPCR（methylation-sensitive reverse transcription qPCR）、RT-PCR・メチル化感受性PCR・サザンブロット法・ノーザンブロット法・RNase プロテクションアッセイ・プライマー伸長法・発現アレイ・次世代シーケンシング（NGS）などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Mini キット（50 - 200 µL）、Midi キット（250 µL - 1.5 mL）、Maxi キット（2 - 5 mL）からお選びいただけます。

特長

1回の溶出で、全てのサイズの循環DNA・循環RNA・エクソソーム由来のRNA（micro RNA・ウイルスDNA／RNAを含む）を単離
様々な量の血漿・血清サンプルに対応
（Mini キット： 50 - 200 µL、Midi キット： 250 µL - 1.5 mL、Maxi キット： 2 - 5 mL）
フェノール抽出やキャリアRNA不要
サイズやGC含量に関わらず、全てのRNAをバイアスなしで結合・溶出
循環セルフリーDNA／RNA・ウイルスDNA／RNAを使用目的に合わせた溶出量に濃縮
（Mini キット： 10 - 25 µL、Midi／Maxi キット： 50 - 100 µL）
短時間で高品質なRNA／DNAを精製
（Mini キット： 15 - 20 分、Midi／Maxi キット： 35 - 40 分）
Streck社「Cell-Free DNA BCT® Tube」に対応

構成内容

構成内容	Mini キット品番： 56300	Midi キット品番： 56400	Maxi キット品番： 56500
サイズ	50 プレップ	20 プレップ	10 プレップ
溶解バッファー A	2 x 20 mL	100 mL	1 x 130 mL 1 x 30mL
洗浄溶液 A	18 mL	1 x 38 mL 1 x 18 mL	38 mL
溶出バッファー F	6 mL	15 mL	15 mL
Micro スピンカラム	50
Mini スピンカラム		20	10
Midi スピンカラム		20
Maxi スピンカラム			10
コレクションチューブ	50	20	10
溶出チューブ（1.7 mL）	50	20	10

各キットの仕様

仕様	Mini キット品番： 56300	Midi キット品番： 56400	Maxi キット品番： 56500
サンプルの種類	血漿／血清	血漿／血清	血漿／血清
抗凝固剤（血漿用）※	EDTA／クエン酸	EDTA／クエン酸	EDTA／クエン酸
サンプル量	50 - 200 µL	250 µL - 1.5 mL	2 - 5 mL
最小溶出量	10 µL	50 µL	50 µL
最大溶出量	25 µL	100 µL	100 µL
10回の精製にかかる時間	15 - 20 分	35 - 40 分	35 - 40 分
精製できるRNAのサイズ	全てのサイズ miRNA および small RNA（< 200 nt）を含む
精製できるDNAのサイズ	≥ 50 bp
平均的な収量	サンプルにより異なる

※ 本キットは、EDTA／クエン酸を添加した血液から調製した、フレッシュ／凍結した血清／血漿からの全核酸（RNAおよびDNA）の精製に適しています。
ヘパリンを添加した血液から調製した血漿サンプルは使用しないでください。特に、主にRNAに関する実験を行う場合、ヘパリンが精製後のRT-PCRなどの実験に影響する可能性があります。主にDNAに関する実験の場合は、ヘパリンを添加した血漿を使用することができます。

使用例

Mini キット（品番： 56300）の使用例

図1 様々な量の血漿から精製したRNAの直線性
本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清（50 µL、100 µL、200 µL）からRNAを精製した。精製したRNA 2μL を RTqPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血漿から精製した miR-21 の直線性を評価した。50 µL の血漿から精製した miR -21 量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 95% であった。また、100 µL の血漿から精製した miR -21 量に対して、200 µL の血漿からの回収率は 92% であった。

図2　血漿RNAサンプル中に存在する阻害物質量の測定
本キットを用いて、血漿（50 µL、100 µL、200 µL）からRNAを単離した。様々な量で溶出したRNA（2、4、8 µL）を用いて、反応容量 20 µL で逆転写反応を行った後に qPCR により増幅し、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。逆転写反応のテンプレートとして用いるPCRインプット量が増加しても、miR-21 qPCR の Ct値に影響は見られなかった。実際には、PCRインプット量の増加に伴い、Ct値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したRNAは、血漿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

図3　様々な量の血漿から精製したDNAの直線性
本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血漿（50 µL、100 µL、200 µL）から、循環DNAを精製した。精製DNA 2 µL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血漿から精製したハウスキーピング遺伝子 5S rRNA 量の直線性を評価した。50 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 94% であった。また、100 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、200 µL 血漿からの回収率は 98% であった。

血漿／血清用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製キット

■ Mini キット（50 - 200 µL）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Mini Kit	NOG	56300	50 PREP.	￥103,000

■ Midi キット（250 µL - 1.5 mL）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Midi Kit	NOG	56400	20 PREP.	￥95,000

■ Maxi キット（2 - 5 mL）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Maxi Kit	NOG	56500	10 PREP.	￥56,000

血漿／血清サンプル調製キット　セレクションガイド

品名	品番	サイズ	サンプル量
循環セルフリーDNA精製キット
血漿／血清用循環セルフリーDNA精製 Micro キット	55500	50 preps	10-200 μL
血漿／血清用循環セルフリーDNA精製 Mini キット	55100	50 preps	200-500 μL
血漿／血清用循環セルフリーDNA精製 Midi キット	55600	20 preps	1-4 mL
血漿／血清用循環セルフリーDNA精製 Maxi キット	55800	10 preps	4-10 mL
尿用循環セルフリー DNA 精製 Mini キット	56600	50 preps	200 μL-2 mL
尿用循環セルフリー DNA 精製 Midi キット	56700	20 preps	2-10 mL
尿用循環セルフリー DNA 精製 Maxi キット	56800	10 preps	10-30 mL
循環セルフリーRNA精製キット
血漿／血清用 RNA精製 Mini キット	55000	50 preps	50-200 μL
血漿／血清用 RNA精製 Midi キット	56100	20 preps	250 μL-1.5 mL
血漿／血清用 RNA精製 Maxi キット	56200	10 preps	4-10 mL
尿用循環セルフリーRNA精製 Mini キット	56900	50 preps	250 μL-2 mL
尿用循環セルフリーRNA精製 Midi キット	57000	20 preps	2-10 mL
尿用循環セルフリーRNA精製 Maxi キット	57100	10 preps	10-30 mL
トータル（全）核酸精製キット
血漿／血清用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Mini キット	56300	50 preps	50-200 μL
血漿／血清用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Midi キット	56400	20 preps	250 μL-1.5 mL
血漿／血清用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Maxi キット	56500	10 preps	2-5 mL
尿用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Mini キット	59900	50 preps	250 μL-2 mL
尿用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Midi キット	60000	20 preps	2-10 mL
尿用循環セルフリー＆ウイルス核酸精製 Maxi キット	60100	10 preps	10-30 mL