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記事ID : 15813
研究用

エクソソーム由来のRNAを含む cfc-DNA/RNA を精製血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製キット

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EDTA/クエン酸を添加した血漿/血清サンプル(フレッシュ/凍結)から、エクソソーム由来のRNAを含む循環セルフリーDNA(cfc-DNA)/RNAを、迅速に精製・濃縮できるキットです。精製したDNA/RNAは高品質で、PCR阻害物質を含みません。
ヘパリンを添加した血液から調製した血漿サンプルは、精製後のRT-PCRなどの実験に影響するため、使用できません。

精製した核酸は、PCR・qPCR・メチル化感受性逆転写 qPCR(methylation-sensitive reverse transcription qPCR)、RT-PCR・メチル化感受性PCR・サザンブロット法・ノーザンブロット法・RNase プロテクションアッセイ・プライマー伸長法・発現アレイ・次世代シーケンシング(NGS)などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Mini キット(50 - 200 µL)、Midi キット(250 µL - 1.5 mL)、Maxi キット(2 - 5 mL)からお選びいただけます。

特長

  • 1回の溶出で、全てのサイズの循環DNA・循環RNA・エクソソーム由来のRNA(micro RNA・ウイルスDNA/RNAを含む)を単離
  • 様々な量の血漿・血清サンプルに対応
    (Mini キット: 50 - 200 µL、Midi キット: 250 µL - 1.5 mL、Maxi キット: 2 - 5 mL)
  • フェノール抽出やキャリアRNA不要
  • サイズやGC含量に関わらず、全てのRNAをバイアスなしで結合・溶出
  • 循環セルフリーDNA/RNA・ウイルスDNA/RNAを使用目的に合わせた溶出量に濃縮
    (Mini キット: 10 - 25 µL、Midi/Maxi キット: 50 - 100 µL)
  • 短時間で高品質なRNA/DNAを精製
    (Mini キット: 15 - 20 分、Midi/Maxi キット: 35 - 40 分)
  • Streck社 「Cell-Free DNA BCT® Tube」 に対応

構成内容

構成内容 Mini キット
品番: 56300
Midi キット
品番: 56400
Maxi キット
品番: 56500
サイズ 50 プレップ 20 プレップ 10 プレップ
溶解バッファー A 2 x 20 mL 100 mL 1 x 130 mL
1 x 30mL
洗浄溶液 A 18 mL 1 x 38 mL
1 x 18 mL
38 mL
溶出バッファー F 6 mL 15 mL 15 mL
Micro スピンカラム 50    
Mini スピンカラム   20 10
Midi スピンカラム   20  
Maxi スピンカラム     10
コレクションチューブ 50 20 10
溶出チューブ(1.7 mL) 50 20 10

各キットの仕様

仕様 Mini キット
品番: 56300
Midi キット
品番: 56400
Maxi キット
品番: 56500
サンプルの種類 血漿/血清 血漿/血清 血漿/血清
抗凝固剤(血漿用)※ EDTA/クエン酸 EDTA/クエン酸 EDTA/クエン酸
サンプル量 50 - 200 µL 250 µL - 1.5 mL 2 - 5 mL
最小溶出量 10 µL 50 µL 50 µL
最大溶出量 25 µL 100 µL 100 µL
10回の精製にかかる時間 15 - 20 分 35 - 40 分 35 - 40 分
精製できるRNAのサイズ 全てのサイズ
miRNA および small RNA(< 200 nt)を含む
精製できるDNAのサイズ ≥ 50 bp
平均的な収量 サンプルにより異なる

※ 本キットは、EDTA/クエン酸を添加した血液から調製した、フレッシュ/凍結した血清/血漿からの全核酸(RNAおよびDNA)の精製に適しています。
ヘパリンを添加した血液から調製した血漿サンプルは使用しないでください。特に、主にRNAに関する実験を行う場合、ヘパリンが精製後のRT-PCRなどの実験に影響する可能性があります。主にDNAに関する実験の場合は、ヘパリンを添加した血漿を使用することができます。

使用例

Mini キット(品番: 56300)の使用例

図1 様々な量の血漿から精製したRNAの直線性
(画像はクリックで拡大されます)

図1 様々な量の血漿から精製したRNAの直線性
本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)からRNAを精製した。精製したRNA 2μL を RTqPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血漿から精製した miR-21 の直線性を評価した。50 µL の血漿から精製した miR -21 量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 95% であった。また、100 µL の血漿から精製した miR -21 量に対して、200 µL の血漿からの回収率は 92% であった。

図2 血漿RNAサンプル中に存在する阻害物質量の測定
(画像はクリックで拡大されます)

図2 血漿RNAサンプル中に存在する阻害物質量の測定
本キットを用いて、血漿(50 µL、100 µL、200 µL)からRNAを単離した。様々な量で溶出したRNA(2、4、8 µL)を用いて、反応容量 20 µL で逆転写反応を行った後に qPCR により増幅し、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。逆転写反応のテンプレートとして用いるPCRインプット量が増加しても、miR-21 qPCR の Ct値に影響は見られなかった。実際には、PCRインプット量の増加に伴い、Ct値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したRNAは、血漿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

図3 様々な量の血漿から精製したDNAの直線性
(画像はクリックで拡大されます)

図3 様々な量の血漿から精製したDNAの直線性
本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血漿(50 µL、100 µL、200 µL)から、循環DNAを精製した。精製DNA 2 µL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血漿から精製したハウスキーピング遺伝子 5S rRNA 量の直線性を評価した。50 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 94% であった。また、100 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、200 µL 血漿からの回収率は 98% であった。

血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製キット

■ Mini キット(50 - 200 µL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Mini Kit詳細データ NOG 56300 50 PREP.
¥65,000

■ Midi キット(250 µL - 1.5 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Midi Kit詳細データ NOG 56400 20 PREP.
¥74,000

■ Maxi キット(2 - 5 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating and Viral Nucleic Acid Purification Maxi Kit詳細データ NOG 56500 10 PREP.
¥52,000

血漿/血清サンプル調製キット セレクションガイド

品名 品番 サイズ サンプル量
循環セルフリーDNA精製キット
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Micro キット 55500 50 preps 10-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Mini キット 55100 50 preps 200-500 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Midi キット 55600 20 preps 1-4 mL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Maxi キット 55800 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Mini キット 56600 50 preps 200 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Midi キット 56700 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Maxi キット 56800 10 preps 10-30 mL
循環セルフリーRNA精製キット
血漿/血清用 RNA精製 Mini キット 55000 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 RNA精製 Midi キット 56100 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 RNA精製 Maxi キット 56200 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Mini キット 56900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Midi キット 57000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Maxi キット 57100 10 preps 10-30 mL
トータル(全)核酸精製キット
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 56300 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 56400 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 56500 10 preps 2-5 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 59900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 60000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 60100 10 preps 10-30 mL

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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