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記事ID : 15812
研究用

PCR 阻害物質を含まない cfc-DNA を単離 血漿/血清用 循環セルフリー DNA 精製キット

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血漿/血清サンプル(フレッシュ/凍結)から、PCR阻害物質を含まない高品質な循環セルフリーDNA(cfc-DNA: cell-free circulating DNA)を、スピンカラム法により迅速に単離できるキットです。

本キットは、血漿/血清サンプル(フレッシュ/凍結)から全てのサイズの cfc-DNA を単離し、使用目的に合わせた量(25 µL から 100 µL の範囲)で溶出することができます。精製した血漿/血清 cfc-DNA は、PCR・qPCR・メチル化感受性PCR法・サザンブロット解析・マイクロアレイ・次世代シーケンシング(NGS)などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Micro キット(10 - 200 µL)、Mini キット(200 - 500 µL)、Midi キット(1 - 4 mL)、Maxi キット(5 - 10 mL)からお選びいただけます。

特長

  • 血漿・血清サンプルから全てのサイズの循環DNAを迅速・簡単に精製
  • ウイルスおよび細菌のDNAを単離
  • 様々な量の血漿・血清サンプルに対応
    (Micro キット: 10 - 200 µL、Mini キット: 200 - 500 µL、Midi キット: 1 – 4 mL、Maxi キット: 5 - 10 mL)
  • 循環DNAを使用目的に合わせた溶出量に濃縮
    (Micro キット: 25 - 50 µL、Mini/Midi/Maxi キット: 50 - 100 µL)
  • PCR阻害物質を含まない循環セルフリーDNAを単離
  • 短時間で高品質なDNAを精製
    (Micro/Mini キット: 15 - 20 分、Midi/Maxi キット: 40 - 45 分)
  • Streck社「Cell-Free DNA BCT® Tube」に対応

構成内容

構成内容 Micro キット
品番: 55500
Mini キット
品番: 55100
Midi キット
品番: 55600
Maxi キット
品番: 55800
サイズ 50 プレップ 50 プレップ 20 プレップ 10 プレップ
結合バッファー B 40 mL 1 x 40 mL
1x 12 mL
2 x 85 mL 2 x 85 mL
1 x 40 mL
プロテイナーゼ K 0.3 mL 0.6 mL 1 mL 1.2 mL
洗浄溶液 A 18 mL 18 mL 18 mL 18 mL
溶出バッファー B 8 mL 8 mL 30 mL 30 mL
Micro スピンカラム 50      
Mini スピンカラム   50 20 10
Midi スピンカラム     20  
Maxi スピンカラム       10
コレクションチューブ 50 50 20 10
溶出チューブ(1.7 mL) 50 50 20 10

各キットの仕様

仕様 Micro キット
品番: 55500
Mini キット
品番: 55100
Midi キット
品番: 55600
Maxi キット
品番: 55800
サンプルの種類 血漿/血清 血漿/血清 血漿/血清 血漿/血清
抗凝固剤(血漿用) EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン
サンプル量 10 - 200 μL 200 - 500 μL 1 - 4 mL 5 - 10 mL
最小溶出量 25 μL 50 μL 50 μL 50 μL
最大溶出量 50 μL 100 μL 100 μL 100 μL
10回の精製にかかる時間 15 - 20 分 15 - 20 分 40 - 45 分 40 - 45 分
精製できるDNAのサイズ ≥ 50 bp
平均的な収量 サンプルにより異なる

使用例

Micro キット(品番: 55500)の使用例

図1 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から循環DNAを精製し、Q社の同等製品と比較した。
(画像はクリックで拡大されます)

図1 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から循環DNAを精製し、Q社の同等製品と比較した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の相対量を評価した。5S rRNA 遺伝子の相対量は、インプットしたサンプル量に応じて、直線的に増加した。本キットは、他社製品と比較して、ハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の回収率が高いことが示された。

図2 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から、循環DNAを精製した。
(画像はクリックで拡大されます)

図2 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から、循環DNAを精製した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血清から精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の直線性を評価した。50µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 96% であった。また、100 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、200 µL の血漿からの回収率は 97% であった。

図3 本キットを用いて、血清(50 µL、100 µL、200 µL)からDNAを単離した。
(画像はクリックで拡大されます)

図3 本キットを用いて、血清(50 µL、100 µL、200 µL)からDNAを単離した。
溶出量を増やした(2、4、8 µL)DNAを用いて、反応容量 20 µL で qPCR を行い、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。溶出量を増やしたDNAを qPCR のテンプレートに用いてもCt値への影響は見られず、実際には、PCRインプット量の増加に伴いCt値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したDNAは、血漿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

血漿/血清用 循環セルフリー DNA 精製キット

■ Micro キット(10 - 200 µL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit詳細データ NOG 55500 50 PREP.
¥41,000

■ Mini キット(200 - 500 μL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit詳細データ NOG 55100 50 PREP.
¥41,000

■ Midi キット(1 - 4 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit詳細データ NOG 55600 20 PREP.
¥84,000

■ Maxi キット(5 - 10 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Maxi Kit詳細データ NOG 55800 10 PREP.
¥60,000

血漿/血清サンプル調製キット セレクションガイド

品名 品番 サイズ サンプル量
循環セルフリーDNA精製キット
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Micro キット 55500 50 preps 10-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Mini キット 55100 50 preps 200-500 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Midi キット 55600 20 preps 1-4 mL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Maxi キット 55800 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Mini キット 56600 50 preps 200 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Midi キット 56700 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Maxi キット 56800 10 preps 10-30 mL
循環セルフリーRNA精製キット
血漿/血清用 RNA精製 Mini キット 55000 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 RNA精製 Midi キット 56100 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 RNA精製 Maxi キット 56200 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Mini キット 56900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Midi キット 57000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Maxi キット 57100 10 preps 10-30 mL
トータル(全)核酸精製キット
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 56300 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 56400 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 56500 10 preps 2-5 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 59900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 60000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 60100 10 preps 10-30 mL

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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