PCR 阻害物質を含まない cfc-DNA を単離 血漿／血清用 循環セルフリー DNA 精製キット

血漿／血清サンプル（フレッシュ／凍結）から、PCR阻害物質を含まない高品質な循環セルフリーDNA（cfc-DNA： cell-free circulating DNA）を、スピンカラム法により迅速に単離できるキットです。

本キットは、血漿／血清サンプル（フレッシュ／凍結）から全てのサイズの cfc-DNA を単離し、使用目的に合わせた量（25 µL から 100 µL の範囲）で溶出することができます。精製した血漿／血清 cfc-DNA は、PCR・qPCR・メチル化感受性PCR法・サザンブロット解析・マイクロアレイ・次世代シーケンシング（NGS）などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Micro キット（10 - 200 µL）、Mini キット（200 - 500 µL）、Midi キット（1 - 4 mL）、Maxi キット（5 - 10 mL）からお選びいただけます。

• 血漿・血清サンプルから全てのサイズの循環DNAを迅速・簡単に精製
• ウイルスおよび細菌のDNAを単離
• 様々な量の血漿・血清サンプルに対応
  （Micro キット： 10 - 200 µL、Mini キット： 200 - 500 µL、Midi キット： 1 – 4 mL、Maxi キット： 5 - 10 mL）
• 循環DNAを使用目的に合わせた溶出量に濃縮
  （Micro キット： 25 - 50 µL、Mini／Midi／Maxi キット： 50 - 100 µL）
• PCR阻害物質を含まない循環セルフリーDNAを単離
• 短時間で高品質なDNAを精製
  （Micro／Mini キット： 15 - 20 分、Midi／Maxi キット： 40 - 45 分）
• Streck社「Cell-Free DNA BCT® Tube」に対応

Micro キット（品番： 55500）の使用例

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図1 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清（50 µL、100 µL、200 µL）から循環DNAを精製し、Q社の同等製品と比較した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の相対量を評価した。5S rRNA 遺伝子の相対量は、インプットしたサンプル量に応じて、直線的に増加した。本キットは、他社製品と比較して、ハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の回収率が高いことが示された。

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図2 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清（50 µL、100 µL、200 µL）から、循環DNAを精製した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血清から精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の直線性を評価した。50µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 96% であった。また、100 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、200 µL の血漿からの回収率は 97% であった。

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図3　本キットを用いて、血清（50 µL、100 µL、200 µL）からDNAを単離した。
溶出量を増やした（2、4、8 µL）DNAを用いて、反応容量 20 µL で qPCR を行い、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。溶出量を増やしたDNAを qPCR のテンプレートに用いてもCt値への影響は見られず、実際には、PCRインプット量の増加に伴いCt値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したDNAは、血漿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

血漿／血清サンプル調製キット　セレクションガイド

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