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記事ID : 15812
研究用

PCR 阻害物質を含まない cfc-DNA を単離 血漿/血清用 循環セルフリー DNA 精製キット

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血漿/血清サンプル(フレッシュ/凍結)から、PCR阻害物質を含まない高品質な循環セルフリーDNA(cfc-DNA: cell-free circulating DNA)を、スピンカラム法により迅速に単離できるキットです。

本キットは、血漿/血清サンプル(フレッシュ/凍結)から全てのサイズの cfc-DNA を単離し、使用目的に合わせた量(25 µL から 100 µL の範囲)で溶出することができます。精製した血漿/血清 cfc-DNA は、PCR・qPCR・メチル化感受性PCR法・サザンブロット解析・マイクロアレイ・次世代シーケンシング(NGS)などのアプリケーションにご使用いただけます。

サンプル量に合わせて、Micro キット(10 - 200 µL)、Mini キット(200 - 500 µL)、Midi キット(1 - 4 mL)、Maxi キット(5 - 10 mL)からお選びいただけます。

特長

  • 血漿・血清サンプルから全てのサイズの循環DNAを迅速・簡単に精製
  • ウイルスおよび細菌のDNAを単離
  • 様々な量の血漿・血清サンプルに対応
    (Micro キット: 10 - 200 µL、Mini キット: 200 - 500 µL、Midi キット: 1 – 4 mL、Maxi キット: 5 - 10 mL)
  • 循環DNAを使用目的に合わせた溶出量に濃縮
    (Micro キット: 25 - 50 µL、Mini/Midi/Maxi キット: 50 - 100 µL)
  • PCR阻害物質を含まない循環セルフリーDNAを単離
  • 短時間で高品質なDNAを精製
    (Micro/Mini キット: 15 - 20 分、Midi/Maxi キット: 40 - 45 分)
  • Streck社「Cell-Free DNA BCT® Tube」に対応

構成内容

構成内容 Micro キット
品番: 55500
Mini キット
品番: 55100
Midi キット
品番: 55600
Maxi キット
品番: 55800
サイズ 50 プレップ 50 プレップ 20 プレップ 10 プレップ
結合バッファー B 40 mL 2 x 40 mL 2 x 85 mL
1 x 12 mL
2 x 85 mL
1 x 40 mL
プロテイナーゼ K 0.6 mL 2 x 1 mL 6.5 mL 8 mL
溶液 WN 18 mL 18 mL 18 mL 18 mL
洗浄溶液 A 18 mL 38 mL 18 mL 18 mL
溶出バッファー B 8 mL 8 mL 30 mL 30 mL
Micro スピンカラム 50 50 20 10
Mini スピンカラム   50    
Midi スピンカラム     20  
Maxi スピンカラム       10
コレクションチューブ 50 100 20 10
溶出チューブ(1.7 mL) 50 100 20 10

各キットの仕様

仕様 Micro キット
品番: 55500
Mini キット
品番: 55100
Midi キット
品番: 55600
Maxi キット
品番: 55800
サンプルの種類 血漿/血清 血漿/血清 血漿/血清 血漿/血清
抗凝固剤(血漿用) EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン EDTA/クエン酸/ヘパリン
サンプル量 10 - 200 μL 200 - 500 μL 1 - 4 mL 5 - 10 mL
最小溶出量 25 μL 25 μL 25 μL 25 μL
最大溶出量 50 μL 50 μL 50 μL 50 μL
10回の精製にかかる時間 15 - 20 分 15 - 20 分 90 分 90 分
精製できるDNAのサイズ ≥ 50 bp
平均的な収量 サンプルにより異なる

使用例

Micro キット(品番: 55500)の使用例

図1 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から循環DNAを精製し、Q社の同等製品と比較した。
(画像はクリックで拡大されます)

図1 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から循環DNAを精製し、Q社の同等製品と比較した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の相対量を評価した。5S rRNA 遺伝子の相対量は、インプットしたサンプル量に応じて、直線的に増加した。本キットは、他社製品と比較して、ハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の回収率が高いことが示された。

図2 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から、循環DNAを精製した。
(画像はクリックで拡大されます)

図2 本キットを用いて、抗凝固剤としてクエン酸を添加した血液から調製した血清(50 µL、100 µL、200 µL)から、循環DNAを精製した。
精製したDNA 2μL を qPCR のテンプレートとして使用し、様々な量の血清から精製したハウスキーピング 5S rRNA 遺伝子の直線性を評価した。50µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、100 µL の血漿からの回収率は 96% であった。また、100 µL の血漿から精製した 5S rRNA 遺伝子量に対して、200 µL の血漿からの回収率は 97% であった。

図3 本キットを用いて、血清(50 µL、100 µL、200 µL)からDNAを単離した。
(画像はクリックで拡大されます)

図3 本キットを用いて、血清(50 µL、100 µL、200 µL)からDNAを単離した。
溶出量を増やした(2、4、8 µL)DNAを用いて、反応容量 20 µL で qPCR を行い、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。溶出量を増やしたDNAを qPCR のテンプレートに用いてもCt値への影響は見られず、実際には、PCRインプット量の増加に伴いCt値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したDNAは、血漿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

血漿/血清用 循環セルフリー DNA 精製キット

■ Micro キット(10 - 200 µL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Micro Kit詳細データ NOG 55500 50 PREP.
¥41,000

■ Mini キット(200 - 500 μL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Mini Kit詳細データ NOG 55100 50 PREP.
¥41,000

■ Midi キット(1 - 4 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Midi Kit詳細データ NOG 55600 20 PREP.
¥84,000

■ Maxi キット(5 - 10 mL)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Maxi Kit詳細データ NOG 55800 10 PREP.
¥60,000

血漿/血清サンプル調製キット セレクションガイド

品名 品番 サイズ サンプル量
循環セルフリーDNA精製キット
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Micro キット 55500 50 preps 10-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Mini キット 55100 50 preps 200-500 μL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Midi キット 55600 20 preps 1-4 mL
血漿/血清用 循環セルフリーDNA精製 Maxi キット 55800 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Mini キット 56600 50 preps 200 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Midi キット 56700 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー DNA 精製 Maxi キット 56800 10 preps 10-30 mL
循環セルフリーRNA精製キット
血漿/血清用 RNA精製 Mini キット 55000 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 RNA精製 Midi キット 56100 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 RNA精製 Maxi キット 56200 10 preps 4-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Mini キット 56900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Midi キット 57000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリーRNA精製 Maxi キット 57100 10 preps 10-30 mL
トータル(全)核酸精製キット
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 56300 50 preps 50-200 μL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 56400 20 preps 250 μL-1.5 mL
血漿/血清用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 56500 10 preps 2-5 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Mini キット 59900 50 preps 250 μL-2 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Midi キット 60000 20 preps 2-10 mL
尿用 循環セルフリー&ウイルス核酸精製 Maxi キット 60100 10 preps 10-30 mL

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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