ヒト血液サンプルや細胞培養上清から CD147 陽性エクソソームをELISA法で直接定量！
ヒトCD147陽性エクソソーム（CD9）ELISAキット

本品は、エクソソーム・マーカーである CD9 と CD147 に対する高性能な抗体を利用し、ヒトの血清や細胞培養液において細胞が分泌するエクソソームの表面に発現する CD147 分子を検出する 2 ステップサンドイッチELISAキットです。

CD147 は腫瘍細胞表面に高発現している膜貫通糖タンパク質で、線維芽細胞を刺激して多数のマトリックスメタロプロテアーゼを産生させ、腫瘍の浸潤・転移および腫瘍誘発性血管新生を促進します。¹⁾ がん細胞から血流に放出された CD147 陽性エクソソームの増加は、大腸がんなどの診断および予後のバイオマーカーとして機能する可能性が示唆されています。^２）

このELISAキットは2ステップサンドイッチ法を原理としています。
キットのELISAプレートは抗 CD147 抗体が予め固相されていて、サンプルを加えるとサンプル中の CD147 を発現しているエクソソームなどがトラップされます。洗浄後、トラップされた CD147 陽性エクソソームに発現しているCD9に対してHRP 標識抗 CD9 抗体を反応させ、基質添加後 HRP による発色をプレートリーダーで読み取り定量化します。

• ヒト血清サンプルや細胞培養上清などに含まれる CD147 陽性エクソソームを直接定量できます。
• 特殊な装置は不要で、通常のプレートリーダーがあれば測定できます(波長 450 nm)。
• 標準試薬として保存安定性に欠けるエクソソームそのものを使用せず、CD147/CD9 融合タンパク質（標準タンパク質）を利用することで安定性と再現性を確保できます。
• CD147/CD9 融合タンパク質(標準タンパク質)を用いた標準曲線で読み取ることで各サンプルの相対定量が可能です。
• 固相化した CD147 抗体とHRP標識したCD9抗体を用いて、2ステップサンドイッチ法でヒト CD147 陽性エクソソームを検出します。

保存温度：冷蔵（２〜８℃）

*1 n=2 として、検量線 4 回分
*2 洗浄バッファー(10 倍濃縮)は、冷蔵保管中に結晶が析出する場合がありますので、45 ℃で加温して溶解後に使用してください。
*3 本キットを速やかに使用しない場合は、標識抗体をキットから取り出して -20 ℃に保管してください。

標準曲線

一例として、標準タンパク質 (pg/mL)に対する吸光度(OD450)をグラフに描くと図 1 のようになります。ただし、標準曲線は、アッセイ毎に新たに描いてください。

標準タンパク質 (pg/mL)	吸光度 (450 nm)		平均吸光度
	1	2
0	0.074	0.071	0.073
31.25	0.117	0.116	0.117
62.5	0.16	0.16	0.16
125	0.252	0.253	0.253
250	0.421	0.428	0.425
500	0.782	0.784	0.783
1000	1.491	1.589	1.54
2000	2.667	2.707	2.687

図１ 標準タンパク質による標準曲線

サンプルの測定例

精製エクソソーム

大腸がん細胞株 HCT116 の培養上清から超遠心法により精製したエクソソーム（15.6, 31.3, 62.5, 125, 250, 500, 1000 ng/mL）をウェルに 100 µL 加えて本キットで測定しました。エクソソーム濃度(ng/mL)と吸光度(OD450)をグラフに表すと図 ２のようになります。

図 2 HCT116 由来エクソソーム

HCT116 培養上清

大腸がん細胞株 HCT116 の培養上清を 2 日ごとに回収して本キットで測定した。培養日数と培養上清中の CD147/CD9 陽性エクソソーム量(吸光度:OD450)をグラフに表すと図 3 のようになります。

図 3　HCT116 培養上清中の CD147/CD9 陽性エクソソーム量のタイムコース

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