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血液サンプルや細胞培養上清からイヌ由来エクソソームを直接定量！ CD9/CD9 Exosome ELISA キット（dog）
CD63/CD63 Exosome ELISA キット（dog）

メーカー名：株式会社ハカレル

エクソソームは生体を構成するほぼすべての細胞から分泌される直径30~200nmの小胞で、血液や尿などあらゆる体液中に存在します^(1)～(5)。また、in vitroでは動物細胞の培養上清にも分泌されます。エクソソームは細胞と同様に脂質二重膜に包まれており、その表面には膜タンパクが存在し、また、内部にはタンパク質やマイクロRNAなどが包含されています。エクソソームを取り込んだ標的細胞において、これらのタンパク質やマイクロRNAが機能することによって、エクソソームは細胞間のコミュニケーションを担っていると考えられます⁽⁶⁾。エクソソームの構造上の特徴の一つとして表面上に存在するテトラスパニンファミリーが挙げられます。イヌにおいてもCD9やCD63はそのメンバー分子で、エクソソームの表面マーカーとして存在しています^(7),(8)。
エクソソームの定量法としては、エクソソームが含むタンパク量で代替したり、ナノトラッキング法による粒子解析がありますが⁽⁹⁾、これらの方法は超遠心法などで一旦エクソソームを精製する必要があります。体液中や細胞培養液中のエクソソームを直接定量する手段は極めて限られており、これまで一般的な方法は開発されてきませんでした。
本キットは、エクソソーム・マーカーであるイヌCD9、CD63に対する高性能抗体を用いた2ステップサンドイッチELISAにより、表面にイヌCD9、CD63分子を持つエクソソームを相対的に定量することができます。

ヒト由来エクソソーム定量用CD9、CD63、CD81 ELISA キットはこちら

特長

血液サンプルや細胞培養上清などに含まれるエクソソームを直接定量できます。
特殊な装置は不要で、通常のプレートリーダーがあれば測定できます(波長450nm)。
標準試薬として安定化させたAZ-ACU(イヌ尿路上皮癌細胞)由来エクソソームを使用しております。
エクソソームスタンダードにより補正することで各サンプルの相対定量が可能です。
固相化したイヌCD9、CD63抗体でエクソソームを捕捉し、HRP標識したイヌCD9、CD63抗体で検出します。

構成内容

抗イヌCD9^*1 抗体固相化 96 ウェルプレート　8-well x 12 strips 1枚
エクソソームスタンダード　4本^*2
アッセイバッファー　25mL 1本
洗浄バッファー(10X)　25mL 1本
HRP 標識抗イヌ CD9^*1 抗体(500X)　20μL 1本
基質液　12mL 1本
停止液(2N H₂SO₄) 　6mL 1本
プレートシール　2枚

*1：品番：HAK-DEL6363-1 は、CD63
*2： n=2 として、検量線4 回分

データ例

図1　CD9/CD9 ELISA による標準曲線

図2　CD63/CD63 ELISA による標準曲線

（各標準タンパク質濃度の吸光度からブランク吸光度を差し引いた値をプロットしています）

参考文献

J. Skog, T. Wurdinger, S. van Rijn, D. H. Meijer, L. Gainche, M. Sena-Esteves, W. T. Jr. Curry, B. S. Carter, A. M. Krichevsky and X. O. Breakefield: Nat Cell Biol., 10, 1470 (2008).
T. Pisitkun, R. F. Shen and M. A. Knepper: Proc Natl Acad Sci USA., 101, 13368 (2004).
S. Runz, S. Keller, C. Rupp, A. Stoeck, Y. Issa, D. Koensgen, A. Mustea, J. Sehouli, G. Kristiansen and P. Altevogt: Gynecol Oncol., 107, 563 (2007).
S. Keller, A. K. Konig, F. Marme, S. Runz, S. Wolterink, D. Koensgen, A. Mustea, J. Sehouli and P. Altevogt: Cancer Lett., 278, 73 (2009).
C. Lasser, V. Seyed AlikhS. Gabrielsson, J. Lotvall and H. Valadi: J Transl Med., 9, 9 (2011).
Y. Naito, Y. Yoshioka, Y. Yamamoto and T. Ochiya: Cell Mol Life Sci., 74, 697 (2017).
E. J. Fish, K. J. Irizarry, P. DeInnocentes, et al.: BMC Cancer., 18, 832 (2018).
M. A. Rojas, B. B. Rentzsch, J. Plendl, et. al.: BMC Vet Res., 14, 179 (2018).
V. Filipe, A. Hawe and W. Jiskoot: Pharm Res., 27, 796 (2010).