PBMC・免疫細胞の基本フェノタイピングを、よりシンプルに、より高品質に フローサイトメトリー用 FcZero-rAb® Basic Panel

■ 従来の通常抗体が抱えるFc受容体（FcR）への非特異的結合と偽陽性リスク

フローサイトメトリー（FC）解析において、通常抗体のFc領域が細胞表面のFc受容体（FcR）に非特異的に結合することによって生じる「偽陽性シグナル」や「高バックグラウンド」は、正確なデータ取得を阻害する大きな課題でした。特にマクロファージや単球、樹状細胞といったFcRを高発現する免疫細胞の解析では著しい偽陽性が生じやすく、従来はこの影響を抑えるためにFcRブロッキング処理が不可欠とされ、手間やコストがかかっていました。

■ Fc受容体と結合しないフローサイトメトリー抗体

『FcZero-rAb®（エフシーゼロ・リコンビナント抗体）』は、FcRによる偽陽性問題を抗体改変技術によって解決したウサギリコンビナント（組換え）抗体です。Proteintechが独自に開発・採用した「FcZero® IgG骨格（定常領域）」テクノロジーにより、FcRとの結合領域へ特定のアミノ酸変異を導入し、FcRへの非特異的結合を完全に排除しました。これにより、フローサイトメトリー（FC）解析におけるFcR由来の偽陽性を防ぎ、バックグラウンドを抑えた高いS/N比を発揮します。

▲ ヒトFcRとの結合試験
―FcZero-rAb®はヒトFcRに結合しません。

■ 部位特異的な蛍光色素標識（AccuBright™技術）

蛍光色素の標識位置を正確に制御できる独自の『AccuBright™（アキュブライト）』部位特異的標識技術を採用しています。この技術により、蛍光色素が抗体の抗原結合部位に干渉することをあらかじめ防ぐことができます。さらに、従来のランダムな化学的標識法とは異なり、各抗体に結合する蛍光色素の数（標識度：DOL、Degree of Labeling）を正確に制御できるため、従来のランダム標識抗体で生じがちだった「ロット間の品質のばらつき」や「標識による抗原結合能の低下」といった問題を克服し、安定して高い蛍光強度と優れた再現性を発揮します。

■ 1種類のアイソタイプに統一

ウサギ由来の定常領域を改変した「FcZero® IgG骨格」を採用し、すべての抗体を単一のアイソタイプで統一しています。これにより、従来のマルチカラー解析などで必要とされていた「ターゲット抗体の動物種やサブクラスごとに異なる複数のアイソタイプコントロールを準備する」という手間や余分な購入コストを排除し、最小限のネガティブコントロールで効率的かつ経済的に実験を進めることができます。

■ リコンビナント抗体の高いロット一貫性

Proteintech独自のABCE™プラットフォーム（Antigen-Specific B-Cell Cloning & Engineering）により開発されたリコンビナント抗体技術を基盤として開発されています。これにより、ロットごとの品質のばらつきやハイブリドーマの変異・失活といったリスクを克服し、高い特異性と親和性を備えた抗体を安定して供給します。

■ FcZero-rAb®の特長

• FcRへの非特異的結合で生じる「偽陽性」を排除
• FcRブロッキング工程不要でプロトコールを簡素に
• 安定した蛍光色素の標識度＆高いシグナル
• アイソタイプコントロールは1種類で完結（※一部抗体パネルでは、ウサギIgG骨格以外のクローンを採用しています）
• リコンビナント抗体の高いロット一貫性＆再現性
• CDマーカーを中心に200種類以上のクローンをご用意

■ 製品データ

• FcR由来のバックグラウンドシグナルを排除

▲ヒトPBMCのCD3およびCD4のフローサイトメトリー解析

▲ヒトPBMCのCD8aおよびCD4のフローサイトメトリー解析

■ FcZero-rAb® Basic Panel

主要な細胞マーカーがあらかじめ最適化された抗体パネルをご用意しています。

• こんな方におすすめ/こんなシーンで活躍します

• PBMCの品質確認・フェノタイピング
• 免疫細胞サブセットの基本解析(T/B/NK細胞・単球・マクロファージ)
• ワクチン接種・免疫療法前後の免疫モニタリング
• ヒト・マウス・サルモデルを用いた免疫評価

*1：FcZero-rAb® でないウサギ/マウスモノクローナル抗体を使用しています。

■ 使用蛍光色素一覧

各パネルは以下の蛍光色素の組み合わせにより設計されています。

• CoraLite® Plus 405(Ex/Em:399 nm/422 nm)
• CoraLite® Plus 488(Ex/Em:493 nm/522 nm)
• CoraLite® Plus 594(Ex/Em:594 nm/615 nm)
• CoraLite® Plus 647(Ex/Em:654 nm/674 nm)
• CoraLite® Plus 750(Ex/Em:755 nm/780 nm)
• PerCP(Ex/Em:482 nm/677 nm)
• PE(Ex/Em:496, 565 nm/578 nm)
• APC(Ex/Em:650 nm/660 nm)
• APC-Cyanine7(Ex/Em:650 nm/778 nm)

■ FcZero-rAb®抗体パネルを使用したフローサイトメトリー（FC）解析例

• FcZero-rAb® TBNK Basics Panel, Flow Cytometry Antibody Panel（品番：PK30050）における染色結果

図. ヒト末梢血単核細胞（PBMC）のフローサイトメトリー： 1x10^6 個のヒトPBMCの細胞表面をFcZero-rAb® TBNK Basics Panel, Flow Cytometry Antibody Panel（品番：PK30050）で染色した。プロットは、リンパ球におけるCD3およびCD19の発現を示している。細胞は未固定で使用した。

図. ヒト末梢血単核細胞（PBMC）のフローサイトメトリー：
1x10^6 個のヒトPBMCの細胞表面をFcZero-rAb® TBNK Basics Panel, Flow Cytometry Antibody Panel（品番：PK30050）で染色した。プロットは、CD3⁺/CD19^- リンパ球におけるCD4およびCD8の発現を示している。細胞は未固定で使用した。

図. ヒト末梢血単核細胞（PBMC）のフローサイトメトリー：
1x10^6 個のヒトPBMCの細胞表面をFcZero-rAb® TBNK Basics Panel, Flow Cytometry Antibody Panel（品番：PK30050）で染色した。プロットは、CD3^-/CD19^-リンパ球におけるCD56の発現を示している。細胞は未固定で使用した。

• FcZero-rAb® Mouse Macrophage Basics Panel（品番：PK30055）における染色結果

図. RAW264.7細胞のフローサイトメトリー：
1x10^6 個の未刺激 RAW264.7 細胞の細胞表面をFcZero-rAb® Mouse Macrophage Basics Panel（品番：PK30055）で染色した。プロットは、CD45⁺細胞におけるCD11bおよびF4/80の発現を解析した結果を示している。細胞は未固定で使用した。

図. RAW264.7細胞のフローサイトメトリー：
1x10^6 個の未刺激 RAW264.7 細胞の細胞表面をFcZero-rAb® Mouse Macrophage Basics Panel（品番：PK30055）で染色した。プロットは、CD45⁺CD11b⁺F4/80⁺細胞におけるCD86およびCD206の発現を示している。細胞は未固定で使用した。

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