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  • 細胞内フローサイトメトリー解析試薬(Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit)

細胞内フローサイトメトリー解析試薬(Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit)は、細胞内タンパク質(Foxp3等の転写因子/核内抗原/細胞質局在タンパク質)を検出するための細胞内フローサイトメトリー解析用の固定・透過処理バッファーセットです。キット構成品として含まれる各種バッファーは優れた解像度と低いバックグラウンドの細胞内フローサイトメトリー解析を実現します。

※ 本キットの構成品には細胞表面/細胞質/核タンパク質抗原を検出するための一次抗体試薬は含まれません。ご使用にあたり一次抗体試薬を別途ご用意いただく必要があります。

背景

■ フローサイトメトリーとは?

フローサイトメトリー(flow cytometry)とは、不均一な細胞サンプル中に含まれる特定の細胞集団・細胞群・細胞種を同定するための解析技術であり、免疫学、分子生物学、微生物学、がんや感染症等の幅広い研究分野で重要な実験手法となっています。フローサイトメトリー解析では、一列に並べられて流路系を通過していく個々の細胞に対してレーザーを照射することで、細胞の大きさ、細胞数、各種マーカーの発現有無/発現レベルを解析・測定することができます。細胞マーカーの解析においては、一般的に細胞表面(細胞外)に発現するマーカー(例. CDマーカー)の解析が頻繁に行われ、蛍光色素で標識された抗体を生細胞(未固定サンプル)に添加することで実施されます(図1)。

図. フローサイトメトリー解析の手順
図1. 細胞表面マーカー・タンパク質を検出する一般的なフローサイトメトリー解析の手順

■ 細胞内フローサイトメトリーとは?

細胞内フローサイトメトリー(Intracellular flow cytometry)とは、細胞表面マーカーではなく、転写因子/核内抗原または細胞質に局在するタンパク質を検出するための実験手法です。細胞表面マーカーのみを染色する従来のフローサイトメトリーとは異なり、細胞内フローサイトメトリーはリン酸化シグナル伝達因子、転写因子、サイトカイン等の細胞内のターゲットタンパク質を同時に染色できるため、さらに詳細な表現型を解析するためのパワフルな手法になり得ます。細胞表面マーカーのみを検出する場合とは異なり、細胞内に存在するタンパク質を検出する場合、追加の手順として細胞の固定処理・透過処理を施す必要があります。固定処理・透過処理を実施することで、蛍光色素で標識された抗体が細胞膜および核膜を透過して、細胞内のターゲットタンパク質を染色することができます(図2)

図. 細胞内フローサイトメトリー解析の手順
図2. 細胞質/核タンパク質を検出する細胞内フローサイトメトリー解析の手順

使用目的

  • 核/細胞質タンパク質抗原を検出する「細胞内フローサイトメトリー解析」に最適なバッファーセット
  • プロトコールに簡単に組み込み可能!細胞サンプルの固定処理・透過処理ステップ適用バッファー
  • 低いバックグランドと優れた解像度の細胞内フローサイトメトリー解析を実現

特長

■ 細胞内フローサイトメトリー解析試薬
商品名 細胞内フローサイトメトリー解析試薬
(Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit)
品番 PF00011 外部リンク
アプリケーション フローサイトメトリー(FC)
保管方法 4℃

構成内容

■ キット構成品

細胞内フローサイトメトリー解析試薬(品番:PF00011 外部リンク)の構成内容
構成品名 品番(単品品番) 容量
固定処理/透過処理用バッファー濃縮タイプ(4倍)
(Foxp3/Transcription Factor Fix/Perm Concentrate(4X))
PF00011-A 外部リンク 50 mL
固定処理/透過処理用バッファー希釈液(1倍)
(Foxp3/Transcription Factor Fix/Perm Diluent(1X))
PF00011-B 外部リンク 160 mL
透過処理用バッファー濃縮タイプ(10倍)
(Flow Cytometry Perm Buffer(10X))
PF00011-C 外部リンク 150 mL

■ キット構成品以外の推奨バッファー

フローサイトメトリー解析バッファー(別売品※)
品名 品番 容量
フローサイトメトリー解析バッファー(1倍)
(Flow Cytometry Staining Buffer (1X))
PF00012 外部リンク 500 mL

※ 細胞内フローサイトメトリー解析試薬(品番:PF00011 外部リンク)のプロトコールに掲載されている、キット構成品には含まれない推奨バッファー品(別売品)です。ウシ血清とアジ化ナトリウムが含まれ、細胞洗浄および細胞懸濁ステップに使用できます。

マニュアル資料

使用方法

■ バッファー・試薬調製方法

  1. 「固定処理/透過処理用バッファー濃縮タイプ(4x)(品番:PF00011-A(キット構成品))」に「固定処理/透過処理用バッファー希釈液(1x)(品番:PF00011-B(キット構成品))」を加えて固定処理/透過処理用バッファーワーキング溶液(1x)を調製します。固定処理/透過処理用バッファーワーキング溶液の1サンプルあたりの必要量目安は約1 mLです。
  2. 「透過処理用バッファー濃縮タイプ(10x)(品番:PF00011-C(キット構成品))」に蒸留水/精製水を加えて透過処理用バッファーワーキング溶液(1x)を調製します。ワーキング溶液の1サンプルあたりの必要量目安は約3〜5 mLです。

■ 細胞内染色・フローサイトメトリー解析の手順例

  1. 染色に必要な細胞数をチューブに分注します。
  2. 細胞表面抗原(細胞表面マーカータンパク質)に対する任意の蛍光標識抗体を添加します
  3. 遮光条件下で4℃または室温にて20〜30分間インキュベートします。
  4. 1〜2 mLのフローサイトメトリー解析バッファー(Flow Staining Buffer(1x))(品番:PF00012(別売品))で細胞を洗浄します
  5. サンプルを室温にて300〜400×gで5分間遠心後、上清を捨てます。
  6. サンプルをボルテックス(5秒以下)にかけて懸濁し、細胞ペレットを完全に解離させます。
  7. 各チューブに1 mLの固定処理/透過処理用バッファーワーキング溶液(1x)(品番:PF00011-A+PF00011-B(キット構成品))を添加します。その後、ボルテックス(5秒以下)にかけて懸濁します。
  8. 暗所で4℃または室温にて30〜60分間インキュベートします。
  9. サンプルを室温にて300〜400×gで5分間遠心し、上清を捨てます。
  10. 1〜2 mLの透過処理用バッファーワーキング溶液(1x)(品番:PF00011-C(キット構成品))で細胞を洗浄します
  11. サンプルを室温にて300〜400×gで5分間遠心し、上清を捨てます。
  12. [オプション]2 μLの2%正常マウス/ラット血清を直接添加し、室温で15分間インキュベートすることでブロッキング操作を実施します。
  13. 洗浄せずに細胞内/核内タンパク質抗原に対する蛍光標識抗体を添加します。その後、暗所・室温で30分間以上インキュベートします。
  14. 1〜2 mLの透過処理用バッファーワーキング溶液(1x)(品番:PF00011-C(キット構成品))で細胞を洗浄します
  15. サンプルを室温にて300〜400×gで5分間遠心し、上清を捨てます。
  16. 1〜2 mLのフローサイトメトリー解析バッファー(Flow Staining Buffer(1x))(品番:PF00012(別売品))で細胞を洗浄します
  17. サンプルを室温にて300〜400×gで5分間遠心し、上清を捨てます。
  18. 適切な量のフローサイトメトリー解析バッファー(Flow Staining Buffer(1x))(品番:PF00012(別売品))に懸濁し、フローサイトメトリー解析を実施します

使用例

■ 細胞表面マーカー/細胞内タンパク質のフローサイトメトリー同時解析例

本製品PF00011を用いて固定・透過処理を行ったフローサイトメトリー解析図
図3. 1X106個のマウス脾臓細胞をCoraLite®488標識マウスCD4抗体(品番:CL488-65104、クローン番号:GK1.5)を用いて細胞表面染色後、本キット(品番:PF00011)で固定・透過処理を行いました。続けて、CoraLite®647標識マウスIgG1アイソタイプコントロール(左図)またはCoraLite®647標識マウスFoxp3抗体(品番:CL647-65089、クローン番号:3G3)(右図)で細胞内染色し、フローサイトメトリー解析を行いました。

細胞内フローサイトメトリー解析試薬(Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit)

■ Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit(構成品:PF00011-A、-B、-Cが含まれます)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Kit詳細データ PGI PF00011 1 KIT
¥22,500(キャンペーン中)
¥30,000(通常希望販売価格)

※ 国内在庫[あり/なし]の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって[入荷予定あり/当社在庫なし]の場合があります。

[関連]細胞内フローサイトメトリー解析試薬(キット構成品/単品販売)

■ Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Kit(品番:PF00011)構成品の単品販売

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Foxp3 / Transcription Factor Fix/Perm Concentrate (4X)詳細データ PGI PF00011-A 50 ML
¥10,500(キャンペーン中)
¥14,000(通常希望販売価格)
Foxp3 / Transcription Factor Fix/Perm Diluent (1X)詳細データ PGI PF00011-B 160 ML
¥5,250(キャンペーン中)
¥7,000(通常希望販売価格)
Flow Cytometry Perm Buffer (10X)詳細データ PGI PF00011-C 150 ML
¥12,750(キャンペーン中)
¥17,000(通常希望販売価格)

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[関連]フローサイトメトリー解析バッファー(キット構成品外/別売品)

■ Flow Cytometry Staining Buffer (1X)
(細胞懸濁/抗体希釈/洗浄操作に利用できる緩衝液です。本製品の成分としてウシ血清とアジ化ナトリウムが含まれます。)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Flow Cytometry Staining Buffer (1X)詳細データ PGI PF00012 500 ML
¥12,000(キャンペーン中)
¥16,000(通常希望販売価格)

※ 国内在庫[あり/なし]の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって[入荷予定あり/当社在庫なし]の場合があります。

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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