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IP-WBに最適！重鎖・軽鎖を検出しない立体構造特異的二次抗体 Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 組換え抗体（HRP標識）

メーカー名：Proteintech Group, Inc.

HRP標識 Goat Anti-Rabbit IgG（Conformation Specific）組換え二次抗体は、ヤギ（Goat）を宿主動物（免疫動物）として作製された、ウサギIgGのネイティブ（立体）構造を認識するHRP標識二次抗体です。

変性したIgG重鎖（50 kDa）および軽鎖（25 kDa）フラグメントを検出しないため、免疫沈降（IP）後のウェスタンブロット（WB）解析に最適です。

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背景

■ 立体構造特異的二次抗体とは?

• ネイティブIgG構造のみを認識する特異的クローン

本製品（品番：RGAR301）は、ウサギIgGのネイティブ（立体）構造を特異的に認識する組換えモノクローナル二次抗体です。

本製品は、ヤギ組換え二次抗体シリーズ『Multi-rAb®（マルチ・ラブ）シリーズ』の開発過程で得られた多数のクローンの中から、IgGの立体構造を特異的に認識するクローン（ = 変性したIgG重鎖（約50 kDa）および軽鎖（約25 kDa）を検出しないクローン）を同定し、単独で製品化したものです。Multi-rAb®シリーズは、モノクローナル抗体の「優れた特異性」と、ポリクローナル抗体のような「高い検出感度」を実現する "カクテルタイプ" の組換え二次抗体ですが、本製品はそのスクリーニング過程で見出された構造特異的な "単一クローンのみ" を採用しています。

チラシを見る

［関連商品］Multi-rAb®（マルチ・ラブ）二次抗体
［参考：プロテインテック社製品ページ］Multi-rAb®（マルチ・ラブ）カクテルタイプの組換え二次抗体

使用目的

■ よくあるIP-WBのお困りごとは?

IgG抗体はY字型構造を有し、2本の重鎖（50 kDa）と2本の軽鎖（25 kDa）から構成されています。
還元条件下でウェスタンブロット（WB）を行うと、IgGは重鎖と軽鎖に解離します。そのため、免疫沈降（IP）とWBで同一の一次抗体を使用した場合、IPに用いたIgG由来の重鎖（50 kDa）および軽鎖（25 kDa）が二次抗体によって検出されてしまうことがあります。特に25 kDaおよび50 kDa付近に目的タンパク質が存在する場合、IgG由来バンドが重なり、正確な解析を妨げる要因となります。

図1. IP-WBにおける軽鎖・重鎖検出の模式図

■ その課題は「二次抗体を変えるだけ」で解決できます

プロテインテックの立体構造特異的二次抗体（品番：RGAR301）は、IgGの立体構造を認識し、還元条件により解離した重鎖（約50 kDa）および軽鎖（約25 kDa）を検出しません。そのため「二次抗体を変えるだけ」で、既存のIPおよびWBプロトコールを大きく変更することなく、IgG由来バンドの干渉を回避できます。25 kDaまたは50 kDa付近のタンパク質解析においても、より明瞭で解釈しやすい検出結果が得られます。

図2. ウサギIgG立体構造特異的二次抗体（品番：RGAR301）を用いたIP後のWB検出例

特長

■ Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 二次抗体
商品名	Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 組換え二次抗体, HRP標識（HRP-Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific Recombinant Secondary Antibody）（ヤギ由来抗ウサギIgG構造特異的二次抗体）
品番	RGAR301
検出ターゲット	ウサギIgGネイティブ構造（Rabbit IgG Conformation Specific）
宿主動物/免疫動物	ヤギ（Goat）由来（リコンビナントモノクローナル抗体）
特異性（交差性／非交差性）	［交差動物種・交差アイソタイプ（specificity, cross-reactivity）］ウサギIgG (H+L) ［非交差動物種・非交差アイソタイプ（minimal cross-reactivity）］ウサギIgG軽鎖単体、ウサギIgG重鎖単体
容量	100 µL／500 µL／1 mL
フォーマット	液体（Liquid）
アプリケーション	IP-WB（免疫沈降-ウェスタンブロット）、WB（ウェスタンブロット）、ELISA
標識	HRP 標識済み
精製	アフィニティ精製（The antibody was purified from culture media supernatant by immunoaffinity chromatography using Protein G beads.）
保存剤	0.1% Proclin-300
保存バッファー	PBS with 50% glycerol, 10 mg/mL BSA, 0.1% Proclin-300, pH 7.4.
保存方法	凍結防止剤として、バッファー中に50%グリセロールを含みます。分注は行わず、元のバイアルの状態で【-20 ℃】で保管してください。そのほか、よくあるご質問はこちら

その他

ウサギIgGの立体構造特異的なクローンを採用しています。
完全なIgG構造を選択的に認識し、軽鎖・重鎖単体を検出しない「優れた特異性」を示します。
安定的な供給能、高いロット間一貫性、再現性を備えるため、長期的プロジェクトにも最適です。
高い希釈倍率（1:2500～）で使用可能なため、実使用ベースでも効率的にご活用いただけます。
IP-WB、WB、ELISA等の各種アプリケーションで検証されています。
液体フォーマット／グリセロールバッファー入り（-20 ℃の冷凍庫で凍らず便利！）で提供されます。

使用例

■ Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 組換え抗体（HRP標識）（品番：RGAR301）

• 還元条件下におけるRabbit IgG（重鎖・軽鎖）の検出

図3. 通常二次抗体（品番：RGAR001、左）と立体構造特異的二次抗体（品番：RGAR301、右）を用いたRabbit IgG（重鎖・軽鎖）検出結果の比較
ウサギ組換え抗体（品番：84975-1-RRおよび84871-1-RR）ならびにウサギポリクローナル抗体（品番：15240-1-APおよび15675-1-AP）を、還元条件下において100 ng/laneでSDS-PAGEに供し、その後、Multi-rAb® HRP標識ヤギ抗ウサギ組換え二次抗体（H+L）（品番：RGAR001、濃度：0.05 μg/mL）およびHRP標識ヤギ抗ウサギIgG立体構造特異的組換え二次抗体（品番：RGAR301、濃度：0.1 μg/mL）を用いてウェスタンブロット解析を実施した。その結果、立体構造特異的組換え二次抗体（品番：RGAR301）は還元されたウサギIgGフラグメントと反応しないことが示された。

• 免疫沈降後のウェスタンブロット（IP-WB）検証データ

図4. IP-WBにおけるRPLP0タンパク質の検出（品番：11290-2-AP（一次抗体）、品番：RGAR301（立体構造特異的二次抗体））
HeLa細胞ライセートを用い、RPLP0抗体（品番：11290-2-AP）により免疫沈降（IP）を実施した。IP用抗体コントロールにはRabbit IgG（品番：30000-1-AP）を使用した。SDS-PAGEにはIP溶出液の20%およびインプットとして総タンパク質30 µgをロードした。ウェスタンブロット解析では、一次抗体としてRPLP0抗体（品番：11290-2-AP、希釈倍率：1:8000）、二次抗体としてHRP標識ヤギ抗ウサギIgG立体構造特異的組換え二次抗体（品番：RGAR301、希釈倍率：1:2500）を使用した。

IP-WBにおける立体構造特異的二次抗体を用いたSynaptophysinタンパク質の検出

図5. IP-WBにおけるSynaptophysinタンパク質の検出（品番：17785-1-AP（一次抗体）、品番：RGAR301（立体構造特異的二次抗体））
マウス脳組織ライセートを用い、Synaptophysin抗体（品番：17785-1-AP）により免疫沈降を行った。IP用抗体コントロールにはRabbit IgG（品番：30000-1-AP）を使用した。SDS-PAGEにはIP溶出液の20%およびインプットとして総タンパク質30 µgをロードした。ウェスタンブロット解析では、一次抗体としてSynaptophysin抗体（品番：17785-1-AP、希釈倍率：1:50000）、二次抗体としてHRP標識ヤギ抗ウサギIgG立体構造特異的組換え二次抗体（品番：RGAR301、希釈倍率：1:2500）を使用した。

• 直接ELISAによるRabbit IgG検出

プロテインテック社の通常または立体構造特異的二次抗体と他社Conformation-specific二次抗体の比較

図6. プロテインテック社の二次抗体（品番：RGAR001（通常、青）、品番：RGAR301（立体構造特異的、緑））と他社Conformation-specific二次抗体（橙）の比較
Rabbit IgGを50 ng/wellでコーティングし、段階希釈した各種二次抗体を用いて検出を行った。発色はTMB基質により行い、H₂SO₄で反応を停止した。シグナル強度は450 nmにおける吸光度として測定した。青線はプロテインテック社のMulti-rAb® HRP標識ヤギ抗ウサギ組換え二次抗体（H+L）（品番：RGAR001）、緑線はプロテインテック社のHRP標識ヤギ抗ウサギIgG立体構造特異的組換え二次抗体（品番：RGAR301）、橙線は他社製マウス抗ウサギIgG立体構造特異的二次抗体によるシグナル強度を示している。

■ 全ての製品詳細はこちらから閲覧できます

「Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 組換え抗体（HRP標識）（品番：RGAR301）」詳細

Goat Anti-Rabbit IgG Conformation Specific 組換え抗体（HRP標識）

■ HRP標識ヤギ由来抗ウサギIgG構造特異的二次抗体（リコンビナントモノクローナル抗体）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Anti IgG Conformation Specific, Multi-rAb, Recombinant Secondary Antibody, Rabbit (Goat) Horseradish Peroxidase	PGI	RGAR301	100 UL	￥21,000
Anti IgG Conformation Specific, Multi-rAb, Recombinant Secondary Antibody, Rabbit (Goat) Horseradish Peroxidase	PGI	RGAR301	500 UL	￥70,000
Anti IgG Conformation Specific, Multi-rAb, Recombinant Secondary Antibody, Rabbit (Goat) Horseradish Peroxidase	PGI	RGAR301	1 ML	￥116,000