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記事ID : 11771
研究用

エクソソームにsiRNA、miRNAを簡単導入ExoFectin® sRNA-into-Exosome Kit(Electro)

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各種エクソソーム単離キット(品番P100、P101P120P121)で単離した高純度エクソソームに、miRNA、siRNAなどのsmallRNAを導入するためのキットです。

特長

  • 高いローディング効率
  • エクソソームに対する影響は穏やか
  • 扱いやすい

構成内容

  • ExoFectin® 溶液A、B
  • エレクトロポーレーションキュベット
  • 無菌ピペット

操作概要

  1. 高純度エクソソームを単離します(エクソソーム単離キット(品番P100、P101P120P121 など)を使用)。単離したエクソソームがペレットの場合は、PBS10-100μLに再懸濁します(エクソソームペレットの大きさに応じて、ペレットの10倍容量のPBSを加えます)。エクソソーム懸濁液を氷上に置きます。
  2. エクソソーム懸濁液2-5μLをとり、エクソソームタンパク質を定量します。トータルのエクソソームタンパク質濃度がエクソソームの定量値を示します。
  3. ExoFectin® 溶液A 65μLとExoFectin® 溶液B 35μLを混合し、エクソソーム(10-100μg)及びsmall RNA(0.1-3μmol)に加えて、ピペットで上下させて混合させます。*混合液のトータル容量は、120μLを超えないようにしてください。
  4. ExoFectin®-エクソソーム-smallRNA混合液をキュベットに移します(混合液でキュベットの底を覆い、気泡が入らないようにしてください)。キュベットに蓋をします。
  5. 混合液の入ったキュベットを、エレクトロポレーターキュベットホルダーに挿入します。400mV、パルスタイム10-15秒で混合液をエレクトロポレートします。
  6. エレクトロポレート完了後、キュベットを取り出し、PBS 500μLをキュベットに加えます。キットに添付の無菌ピペットを使用して、混合液を新しい無菌チューブ(予め1%BSAを含むPBS 1.5mLを入れておく)に移します。この時点でエクソソームにはsmallRNAが導入されています。
  7. (オプション) PureExo® エクソソーム単離キット(品番P100)を用いてエクソソームを沈殿させます。
  8. smallRNAを導入したエクソソームについて、下記のようなアプリケーションに使用できます。
    • エクソソームを使ってターゲット細胞にRNAをデリバリー:
      1%BSAを含むPBSにエクソソームを懸濁します。ターゲット細胞を48時間飢餓状態にします。もしくは、50%コンフルエントに達するまでターゲット細胞をFBS枯渇状態で培養します。smallRNAを導入したエクソソームを加えます。48-72時間培養を続けた後、細胞を回収し、リアルタイムRT-PCRでターゲット遺伝子の発現を測定します。
    • in vivo RNAデリバリー(動物への静脈注射(尾部注射など)または局所注射(筋肉内注射など)によるデリバリー):
      単離したエクソソームを5%グルコース通常食塩水に再懸濁し、レシピエント動物に注射します。注射を繰り返すことで、エクソソームデリバリーの効果を増強することができます。免疫抵抗を最小限に抑えるために、エクソソームの由来と同じ種のレシピエント動物を選択することを推奨します。エクソソームデリバリー後、各種時点において、挿入した組織におけるターゲット遺伝子の発現を、リアルタイムRT-PCRを用いて測定するか、映像法を用いてターゲット遺伝子の発現を検出します。

ExoFectin® sRNA-into-Exosome Kit(Electro)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ExoFectin(R) sRNA-into-Exosome Kit (Electro)詳細データ OBL P400 1 KIT
[10 RXN]
¥145,000

[関連商品]sRNA-into-Exosome Kit(Chemical)

独自の組成のポリマー試薬で、miRNA、siRNAなどのsmallRNAをエクソソームに導入(トランスフェクション)するための製品です。

 

【構成内容】

  • ExoFectin Reagent
  • Supplemental buffer
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ExoFectin(R) sRNA-into-Exosome Kit (Chemical)詳細データ OBL P401 1 KIT
[20 RXN]
¥84,000

関連商品

製品使用文献

【sRNA-into-Exosome Kit(Chemical)(#P401)
  1. Salama A, Fichou N, Allard M, Dubreil L, De Beaurepaire L, Viel A, Jégou D, Bösch S, Bach JM. MicroRNA-29b modulates innate and antigen-specific immune responses in mouse models of autoimmunity. PLoS One. 2014 Sep 9;9(9):e106153. doi: 10.1371/journal.pone.0106153.

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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