記事ID ： 1033

cAMPの検出による細胞ベースのGPCRプロファイリングキットです！ cAMP Hunter® eXpress アッセイキット
DiscoverX社；GPCR凍結細胞とcAMP評価用試薬がセットになったReady-to-Useキット

DiscoverX社；GPCR凍結細胞とcAMP評価用試薬がセットになったReady-to-Useキット" data-hatena-bookmark-layout="standard-balloon" data-hatena-bookmark-lang="ja" title="このエントリーをはてなブックマークに追加">

メーカー名：Eurofins DiscoverX Corporation

背景

GPCRは、ヒトの場合1,000種類も存在するといわれ、創薬における非常に重要なターゲットです。市場で扱いのある薬剤のうち約60%が、GPCRをターゲットにしています。
本キットは、GPCRを細胞膜表面上に安定発現しているcAMP Hunter® cell lineと、cAMPの高感度検出用試薬を一つにまとめたキットです。

原理

本キットによるアッセイは、DiscoverX社独自の技術；Enzyme Fragment Complementation（EFC）技術を利用し、cAMPを検出する競合免疫測定法です。測定法の詳細な原理につきましてはHitHunter® cAMPアッセイと同様になりますので下記リンクをご参照ください。
本キットに同梱されている細胞株は薬剤処理にて細胞増殖を止めてあります。細胞株の詳細およびターゲットリストは下記リンクをご参照ください。

特長

酵素断片の1:1の結合を見ることにより、偽陽性・偽陰性の少ないデータの入手が可能
簡便な非放射性ホモジニアスアッセイ
細胞培養接着後、数時間でアッセイ可能な簡便プロトコール（下記プロトコールを参照）
アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴニストの検出、基底cAMPレベルのモニタリングも可能。(Fig. 1)
PathHunter® を併用することで、化合物の幅広いプロファイリング情報が得られます。(Fig．2)

Fig.1 Gi共役型GPCRのアゴニスト／アンタゴニスト用量依存曲線

Fig. 2 グルカゴン受容体に対するバイアスリガンド評価
リガンドとしてグルカゴン(内在性リガンド)、アンタゴニストとしてグルカゴンアミド ([des-His1, Glu9]-Gluc)を用いて検討を行った。

キット構成

96 wells フォーマットにて３種類(100, 200, 1,000 data point (dp))のサイズをご用意しています。

cAMP Hunter® eXpressキット	100 dp	200 dp	1,000 dp	保管条件
Box1 cAMP Hunter eXpress Cells	3.75x10⁶ cells / 1 vial	3.75x10⁶ cells / 2 vials	3.75x10⁶ cells / 10 vials	-80°C (短期) Liquid N2 (長期)
Box 2: cAMP Hunter eXpress Detection Reagents - cAMP Lysis Buffer - cAMP Solution D (ED- cAMP Conjugate) - cAMP Solution A (EA Reagent) - cAMP Antibody Reagent - cAMP Standard (250uM) - Substrate Reagent 1* - Substrate Reagent 2* Forskolin (dried powder) - Cell Assay Buffer - Cell Plating Reagent **	3.8 mL 5 mL 8 mL 2.5 mL 1 mL 1 mL 0.2 mL 1 x 0.25 mg 12.5 mL 1 x 20 mL	7.6 mL 10 mL 16 mL 5 mL 1 mL 2 mL 0.4 mL 2 x 0.25 mg 25 mL 2 x 20 mL	38 mL 50 mL 80 mL 25 mL 1 mL 10 mL 2 mL 10 x 0.25 mg 125 mL 2 x 100 mL	-20°C
Box 3: 96-well Tissue Culture Treated Plates	1 plate	2 plates	10 plates	Room Temperature