原理・用途をわかりやすく解説！チラミド増幅で高感度な免疫染色・多重染色を実現 Tyramide Signal Amplification（TSA）検出キット

Proteintech社のTSA検出キット（Tyramide Signal Amplification Kit）およびCoraLite® Plus TSA試薬（Tyramide Reagent）は、チラミドシグナル増幅（TSA）技術を活用した高感度な蛍光IHC・IF/ICC用試薬です。従来の間接法と比較して約10倍〜約100倍（最大）のシグナル増幅を実現し、低発現ターゲットの明瞭な染色・可視化や、一次抗体の動物種（免疫動物／宿主動物）に依存しない最大5色の多重蛍光染色（Multiplex IHC/IF/ICC）を可能にします。

■ Tyramide Signal Amplification（TSA）法の原理とは？

Tyramide Signal Amplification（TSA、チラミド シグナル増幅）法とは、HRP（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）の酵素触媒反応を利用して標的タンパク質近傍に蛍光標識されたチラミド基質（Tyramide）を共有結合的に沈着させる高感度な検出システムです。

二次抗体等に結合したHRP酵素の存在下で過酸化水素を加えると、蛍光標識されたチラミド基質（例：CoraLite® Plus-Tyramide）が一電子酸化され、短寿命で高活性なチラミドラジカルが生成されます。このラジカルは拡散することなく、標的抗原近傍に存在するタンパク質のチロシン残基と迅速に共有結合を形成します。この連続的な酵素反応によって抗原周辺へ多量の蛍光色素が局所的に蓄積されるため、従来の間接免疫染色法と比較して最大100倍のシグナル増幅が得られ、S/N比の優れた再現性の高い画像データの取得を可能にします。

図. TSA検出キットのシグナル増幅原理

• 組織切片（FFPE切片等）や培養細胞サンプルにおける低発現・微量抗原ターゲットの高感度検出を実現
• 一次抗体の動物種（免疫動物／宿主動物）に制限されない最大5色の多重蛍光免疫染色（Multiplex IHC/IF/ICC）が可能
• 抗体剥離（Stripping）と再プローブのサイクルによる、同一組織切片上での複数マーカー解析（細胞種同定・微小環境解析）にも適用可能

■ 「単色試薬」と「オールインワンキット」から選択可能

Proteintech社では、お持ちのHRP標識二次抗体と自由に組み合わせ可能な単体試薬「CoraLite® Plus-Tyramide Reagents」と、多重染色に必要なバッファー類や二次抗体が含まれるオールインワンキット「TSA Detect Kits」を展開しています。

■ 単色試薬（CoraLite® Plus-Tyramide Reagents）

あらゆるHRP標識二次抗体と組み合わせて使用できる蛍光チラミド単体試薬です。IHC、ICC、ISHの実験系に対応します。

■ オールインワンキット（TSA Detect Kits）

組織多重解析に最適化されたキットです。各色チラミド試薬に加え、DAPI、Multi-rAb® HRP組換え二次抗体、各種バッファーが含まれます。

■ FITC Plus、CoraLite® / CoraLite® Plusスペクトル

マルチプレックス（多重）染色のために各種CoraLite®／CoraLite® Plus色素を使用できます。重複する蛍光スペクトル領域が最小限であり、それぞれの蛍光色素を同時に使用できます。以下に表示するプロテインテックの蛍光スペクトルビューアーは、Fluorofinder  のプラットフォームを搭載しており、多重免疫蛍光染色等の実験のデザインに活用できます。

• ［参考：CoraLite®蛍光色素について］CoraLite®（コーラライト）／CoraLite® Plus（コーラライトプラス）蛍光色素 

■ 製品ラインアップ

■ 単色用

チラミド試薬（容量：100 µL）と増幅バッファー（容量：5 mL）のセット品

■ 単色用試薬 一覧

品名		励起/蛍光波長 （Ex/Em）	品番	包装
	CoraLite® Plus 488-Tyramide Reagent, TSA (Tyramide Signal Amplification) dyes	493 nm/522 nm	PR30022	50 test
	CoraLite® Plus 555-Tyramide Reagent, TSA (Tyramide Signal Amplification) dyes	554 nm/570 nm	PR30023
	CoraLite® Plus 594-Tyramide Reagent, TSA (Tyramide Signal Amplification) dyes	594 nm/615 nm	PR30024
	CoraLite® Plus 647-Tyramide Reagent, TSA (Tyramide Signal Amplification) dyes	654 nm/674 nm	PR30025

■ 多重染色用

チラミド試薬と増幅バッファーに加え、DAPI染色試薬、HRP-Polymer Multi-rAb®二次抗体、クエンチングバッファー、およびブロッキングバッファーが含まれたセット品。

■ 多重染色用キット 一覧

品名	キットに含まれる色素					品番	包装
	DAPI	CL488	CL555	CL594	CL647
Four color TSA Detect Kit for Rabbit/Mouse Primary Antibody	〇	〇	-	〇	〇	PK10032	50 test
Four color TSA Detect Kit for Rabbit Primary Antibody	〇	〇	-	〇	〇	PK10033
Five color TSA Detect Kit for Rabbit/Mouse Primary Antibody	〇	〇	〇	〇	〇	PK10034
Five color TSA Detect Kit for Rabbit Primary Antibody	〇	〇	〇	〇	〇	PK10035

■ 間接染色法との比較データ

• A431細胞における、IL-17RAポリクローナル抗体（品番：32055-1-AP）の検出比較

図. 蛍光標識二次抗体（品番：RGAR004）を用いた染色画像

図. HRP標識二次抗体（品番：RGAR011）＆チラミドシグナル増幅試薬（CoraLite® Plus 594-Tyramide Reagent、品番：PR30024）を用いた染色画像

A431細胞におけるインターロイキン-17受容体A（赤、IL-17RA Polyclonal antibody、品番：32055-1-AP）の共焦点画像。DNAはDAPI（青）で染色した。チラミド試薬を用いた検出によりシグナル強度が大幅に改善され、ターゲットを鮮明に可視化できる。

• HeLa細胞におけるオーロラAキナーゼタンパク質（緑）の検出比較

図. 従来の蛍光標識済み二次抗体を用いた染色画像

図. Multi-rAb®ポリマーHRP二次抗体およびCoraLite® Plus 488 チラミド試薬（品番：PR30022）を用いた染色画像

HeLa細胞におけるオーロラAキナーゼタンパク質（緑、AURKA Recombinant monoclonal antibody、品番：82906-1-RR）の共焦点画像。DNAはDAPI（灰色）で染色した。チラミド試薬を用いた検出により感度が劇的に向上し、細胞内DNAとオーロラAキナーゼタンパク質の共局在をより鮮明に可視化できる。

■ 多重染色データ

• FFPEラット脳組織

図. Lamin B1（黄）、GFAP（緑）、IBA1（赤）、TDP-43（紫）
FFPE（ホルマリン固定パラフィン包埋）ラット脳組織を用いて実施された免疫蛍光染色（IF）。Lamin B1抗体 (品番：66095-1-Ig、希釈率 1:2000) で染色後、HRP-ポリマー標識二次抗体（品番：RGAU011）を用いて検出しました。シグナルの発色（黄色）には、CoraLite® Plus 555 チラミド試薬 を使用しました。続いて、スライドを pH 9.0 Tris-EDTA 緩衝液中で加熱して抗体を剥離した後、GFAP抗体 (品番：60190-1-Ig、希釈率 1:20000) で染色しました。シグナルの発色（緑色）には、CoraLite® Plus 488 チラミド試薬を使用しました。同様に、IBA1抗体 (品番：81728-1-RR、希釈率 1:2000) および TDP-43抗体 (品番：80002-1-RR、希釈率 1:3200) で順次染色しました。シグナルの発色には、それぞれ CoraLite® Plus 594 チラミド試薬 (赤色) および CoraLite® Plus 647 チラミド試薬 (紫色) を使用しました。最後に、細胞核（青色）は DAPI で染色しました。

• FFPEヒト扁桃炎組織

図. CD23（黄）、CD3（緑）、CD8a（赤）、CD138（紫）
FFPE（ホルマリン固定パラフィン包埋）ヒト扁桃炎組織を用いて実施された免疫蛍光染色（IF）。CD23抗体 (品番：60208-2-Ig、希釈率 1:8000) で染色後、HRP-ポリマー標識二次抗体（品番：RGAU011）を用いて検出しました。シグナルの発色（黄色）には、CoraLite® Plus 555 チラミド試薬を使用しました。続いて、スライドを pH 9.0 Tris-EDTA 緩衝液中で加熱して抗体を剥離した後、CD3抗体 (品番：60181-1-Ig、希釈率 1:10000) で染色しました。シグナルの発色（緑色）には、CoraLite® Plus 488 チラミド試薬を使用しました。同様に、CD8a抗体 (品番：66868-1-Ig、希釈率 1:20000) および CD138抗体 (品番：67155-1-Ig、希釈率 1:10000) で順次染色しました。シグナルの発色には、それぞれ CoraLite® Plus 594 チラミド試薬 (赤色) および CoraLite® Plus 647 チラミド試薬 (紫色) を使用しました。最後に、細胞核（青色）は DAPI で染色しました。

※ 国内在庫［あり/なし］の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって［入荷予定あり/当社在庫なし］の場合があります。

※ 国内在庫［あり/なし］の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって［入荷予定あり/当社在庫なし］の場合があります。

※ 国内在庫［あり/なし］の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって［入荷予定あり/当社在庫なし］の場合があります。

※  表示価格について

※  CAS Registry Numbers have not been verified by CAS and may be inaccurate.