カラム精製不要・最短1時間で蛍光色素やビオチンを共有結合 ChemBright 抗体標識キット

Proteintech社のChemBright 抗体標識キットは、カラム精製不要で抗体ロスなく、最短1時間・6ステップで手持ちの一次抗体を蛍光標識できるコンジュゲーションキットです。マレイミド-チオール反応による強力な共有結合標識により、作製したコンジュゲーション抗体は4℃で最長1年間安定して保存できます。安定的かつ直接的に標識された一次抗体は、フローサイトメトリー（FC）や免疫蛍光染色（IF/ICC）、ウェスタンブロット（WB）の実験ワークフローと多重染色解析を効率化します。

■ マレイミド-チオール反応による強力な共有結合標識

ChemBright 抗体標識キットは、抗体のアミノ基にチオール基（-SH）を付加する修飾試薬（Vial A）と、マレイミド基を有する高輝度CoraLite? Plus 蛍光色素（Vial B）による化学的共有結合（チオエーテル結合）を利用します。物理吸着とは異なり脱落しにくい共有結合を形成するため、各種アッセイでの洗浄工程や長時間インキュベーション後も標識が安定し、高い再現性と低バックグラウンドノイズを実現します。従来法のように抗体のジスルフィド結合を還元しないため、抗体の構造を維持したまま、最適化された数（抗体1分子あたり4〜6個）の標識分子を結合します。

図. ChemBright抗体標識キットと従来法標識の違い

■ 多重染色（マルチプレックス解析）の自由度向上

一次抗体を直接蛍光標識することで、二次抗体による交叉反応の懸念がなくなり、同一種由来の一次抗体同士を組み合わせた多重染色が可能になります。本キットで作製したコンジュゲーション抗体は、以下の主要アプリケーションで高いパフォーマンスを発揮します。

• フローサイトメトリー（FC）： 複数マーカーの同時解析やパネル設計の最適化
• 免疫蛍光染色（IF/ICC）： 細胞内局在解析や多色共局在解析
• 蛍光ウェスタンブロット（Fluorescent WB）： 同一膜上での複数ターゲット同時定量検出

■ ChemBright 抗体標識キットの主な特長

• わずか55分・6ステップの迅速プロトコール： 複雑な抽出や精製なしに、ピペッティングとインキュベーションのみで標識が完了します。
• カラム精製不要で抗体ロスゼロ： 精製カラムを通さないため、100 ?gの抗体を無駄なく回収・保持できます。
• 4℃で最長1年間の優れた保存安定性： 共有結合で色素が固定されるため調製後も安定で、4℃で長期保存・即時使用が可能です。
• 豊富な蛍光色素・標識バリエーション： CoraLite? Plus 各波長（405, 488, 594, 647, 700, 750）やFITC Plus、Biotinなどをラインアップ。
• 多様な種の一次抗体（IgG）に対応： アジド・グリセロールフリーのPBS溶液（1 mg/mL、<0.1% BSA）中のIgG抗体100 ?gから標識可能。

■ キット構成内容（3 × 100 ?g 標識用）

※抗体要件：濃度1.0 mg/mLのIgG（キャリアーフリーPBSバッファー、BSA <0.1%、アジドフリー、グリセロールフリー）。最終標識抗体濃度は約0.83 mg/mLとなります。

■ 簡単プロトコール

ChemBright抗体標識キットは、専用のバイアル（A・B・C）へ順次液を移し替えてインキュベーションするだけで、抗体のチオール化からチオエーテル共有結合、反応停止まで完了します。わずか6ステップ・約1時間の簡便な操作で、精製工程を挟むことなく高回収率な標識抗体が得られます。

図. ChemBright抗体標識キットのワークフロー

■ 培養細胞のマルチプレックス（多重）染色

MCF-7細胞

PFA固定MCF-7細胞の免疫蛍光染色（IF）。緑：ChemBright CoraLite® Plus 488 抗体標識キット（品番：PK30030）で標識したZO-1抗体（品番：21773-1-AP）、マゼンタ：ChemBright CoraLite® Plus 647 抗体標識キット（品番：PK30031）で標識したα-Tubulin抗体（品番：66031-1-Ig）、青：DAPIで染色した細胞株。

■ フローサイトメトリー解析

ヒト末梢血単核細胞（PBMC）

1 × 10⁶ 個の末梢血単核細胞（PBMC）を採取し、ChemBright CoraLite® Plus 488 抗体標識キット（品番：PK30030）で標識した 0.125 µg のCD3抗体（品番：65151-1-Ig、クローン番号：UCHT1）と、ChemBright CoraLite® Plus 647 抗体標識キット（品番：PK30031）で標識した 0.125 µg のCD4抗体（品番：65147-1-Ig、クローン番号：SK3）。染色前に Fc受容体阻害剤で細胞を処理し、細胞は非固定条件下で用いた。

ヒト末梢血単核細胞（PBMC）

1 × 10⁶ 個のヒト末梢血単核細胞（PBMC）を採取し、ChemBright CoraLite® 700 抗体標識キット（品番：PK30037）で標識した 0.2 µg の Anti-Human CD8a 抗体（品番：65135-1-Ig、クローン番号：OKT8）。染色前に Fc受容体阻害剤で細胞を処理し、細胞は非固定条件下で用いた。

■ ウェスタンブロット検出

HepG2細胞、およびHT29細胞ライセート

HepG2 細胞および HT29 細胞ライセートのWB（ウェスタンブロット）：ChemBright CoraLite® Plus 647 抗体標識キット（品番：PK30031）で標識した TOM20 抗体（品番：11802-1-AP、1:1000）。

■ 製品ラインアップ

■ ChemBright 抗体標識キット一覧

標識物質		励起/蛍光波長 （Ex/Em）	品番	包装サイズ
	Biotin（ビオチン）	-	PK30033	1 kit（3×100 µg）
	CoraLite® Plus 405	399 nm/422 nm	PK30035
	FITC Plus	495 nm/524 nm	PK30032
	CoraLite® Plus 488	493 nm/522 nm	PK30030
	CoraLite® Plus 594	594 nm/615 nm	PK30036
	CoraLite® Plus 647	654 nm/674 nm	PK30031
	CoraLite® 700	702 nm/723 nm	PK30037
	CoraLite® Plus 750	755 nm/780 nm	PK30034

■ FITC Plus、CoraLite®&CoraLite® Plusスペクトル

マルチプレックス（多重）染色のために各種CoraLite®／CoraLite® Plus色素を使用できます。重複する蛍光スペクトル領域が最小限であり、それぞれの蛍光色素を同時に使用できます。以下に表示するプロテインテックの蛍光スペクトルビューアーは、Fluorofinder  のプラットフォームを搭載しており、多重免疫蛍光染色等の実験のデザインに活用できます。

• ［参考：CoraLite®蛍光色素について］CoraLite®（コーラライト）／CoraLite® Plus（コーラライトプラス）蛍光色素 

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