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アポトーシス解析のための新規セルベーススクリーニングアッセイ PathHunter® Bcl2-Bim Protein Interaction Assay
DiscoverX社；アポトーシス解析のための新規セルベーススクリーニングアッセイ

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メーカー名：Eurofins DiscoverX Corporation

特長

・BH3ドメインに特異的な模倣体の同定

・Bcl2-Bim間の相互作用を阻害する化合物のスクリーニングおよびプロファイリング

・候補化合物の毒性評価

・化学発光測定法を用いたセルベースアッセイ

・試薬を添加するだけのシンプル操作

・HTSに対応可能なホモジニアスアッセイ

アポトーシス性の細胞死は、抗がん剤に応答する癌細胞除去の主要なメカニズムです。
癌細胞は、抗アポトーシス因子であるB-cell lymphoma-2 (Bcl2)を過剰発現しており、プロアポトーシスタンパク質であるBimが持つBH3ドメインと相互作用して、癌細胞内の細胞生存を決定している下流のプロセスを制御しています。BH3ドメイン模倣体によりBcl2-Bim間の相互作用を喪失させると、ミトコンドリア表面にポアを形成するために凝集するBak/Baxのような他のアポトーシス促進性因子が活性化され、細胞内へのシトクロムcの放出が引き起こされ、カスパーゼカスケードが活性化された結果、アポトーシス性の細胞死が誘導されます。

アッセイ原理

EFC（Enzyme Fragment Complementation）技術の原理

PathHunte® Pathway Assayでは、DiscoverX社独自のEFC技術（Enzyme Fragment Complementation）を用いております。本アッセイではBH3ドメインにEDとBimの融合タンパク質(Bim-ED)と、完全長Bcl2タンパク質の両方を過剰発現しています。Bim-EDは、Bcl2との相互作用により安定化していますが、Bcl2の非存在下においては分解されます。Bcl2に結合するBH3阻害剤を添加・培養すると、Bim-PLとBcl2の相互作用が解離し、Bim-EDが遊離します。遊離したBim-ED量は、EAを含むPL/PK Detection Kit を使用して再構成された活性型β-ガラクトシダーゼの酵素活性依存的なシグナルを検出することで測定できます。

商品ラインナップ

《安定発現細胞株及び検出試薬》

継代可能な安定発現細胞株は大規模なプロファイリングやスクリーニングに最適です。

PRODUCT DESCRIPTION	ASSAY MEASURES
PathHunter® U2OS Bcl2-Bim Protein Interaction Cell Line	Bcl2-Bim間のタンパク質相互作用
PathHunter™ ProLabel Detection Kit （EDが含まれております）	検出用試薬

※その他、専用培地や関連試薬の取扱いもございますので詳細はお問い合わせください。

《eXpress kit》

使い切り凍結細胞と検出試薬および96ウェルプレート1枚を含むReady-to-Use kitです。
実験条件検討の必要なく、少量スケールのアッセイが可能です。