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酸化ストレスのパスウェイ解析のための新規セルベーススクリーニングアッセイ PathHunter® Keap1-NRF2 Functional Assay
DiscoverX社；酸化ストレスのパスウェイ解析のための新規セルベーススクリーニングアッセイ

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メーカー名：Eurofins DiscoverX Corporation

特長

・NRF2活性化における化合物の影響を測定

・Keap1-NRF2経路に対する化合物のスクリーニングと解析

・in house候補化合物の毒性解析

・化学発光測定法を用いたセルベースアッセイ

・試薬を添加するだけのシンプル操作

・HTSに対応可能なホモジニアスアッセイ

転写因子NRF2 [Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2] は高等生物における抗酸化防御機構において重要な制御因子として知られており、神経変性疾患やがんなど様々な疾患治療の標的分子として注目されています。喫煙や炎症、日光照射といった様々な環境要因がフリーラジカルや活性酸素種を生成し、細胞に損傷を与えます。細胞の損傷は、動脈硬化症、脳卒中、喘息、心筋梗塞、アルツハイマー病、パーキンソン病や癌など様々な疾患に関与しています。

アッセイ原理

PathHunte® Pathway Assayでは、DiscoverX社独自のEFC技術（Enzyme Fragment Complementation）を用いております。本アッセイでは、NRF2タンパク質にEDを付加し、核局在タンパク質としてEAを発現させています。また、NRF2と複合体を形成し、NRF2の核内移行を抑制しているKeap1タンパク質も細胞内に共発現させています。フリーラジカルなどの酸化ストレスをKeap1が感知するとNRF2が解放され核内に移行すると、NRF2タンパク質に付加したEDと、核内に局在しているEAが相互作用して、活性型βガラクトシダーゼが再構成されます。このβ-ガラクトシダーゼの酵素活性により添加した化学発光基質が加水分解され、酵素活性依存的な発光シグナルが得られます。