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V5-Trap® Magnetic Particles M-270（V5トラップ®磁気ビーズ）は、V5タグ融合タンパク質の免疫沈降（IP：Immunoprecipitation）実験に最適なMagnetic Particles M-270（磁性粒子/磁気ビーズ）担体結合済みのV5タグ抗体です。
Magnetic Particles M-270（磁気ビーズ）には、アルパカ（Alpaca）を宿主動物（免疫動物）として作製された「抗V5組換えモノクローナルVHH抗体」が結合しています。VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。
V5タグ（V5-tag）とは、14残基のアミノ酸配列「GKPIPNPLLGLDST（Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr）」からなる短鎖ペプチドタグです。V5タグは、クローニング技術によりタグ融合タンパク質として組換え発現させることが可能であり、V5タグ融合タンパク質は、V5タグに対する抗体やVHH抗体（別名：Nanobody®）を用いることでELISA、フローサイトメトリー、免疫沈降、免疫蛍光染色、ウェスタンブロット等の実験手法により検出や精製を実施することができます。V5タグは、シミアンウイルス5（パラミクソウイルス科、SV5：simian virus 5）のRNAポリメラーゼのαサブユニットに関与するPタンパク質およびアクセサリータンパク質であるVタンパク質に共通のN末端配列に存在する95番目から108番目のアミノ酸配列に由来し、1992年の論文で最初に記載されました
［PMID：1372038 
］。
V5タグペプチドを認識する、様々なポリクローナル抗体やモノクローナル抗体、およびVHH抗体（Nanobody®）が市販されています。V5タグ抗体によって捕捉されたV5タグ融合タンパク質は、通常はグリシンやクエン酸バッファーを用いる酸溶出法、またはV5タグペプチド（配列：GKPIPNPLLGLDST）を用いるペプチド競合溶出法によって、溶出させることができます。免疫沈降を実施する場合、ChromoTek（クロモテック、ドイツ：2020年10月よりプロテインテックグループの一部）の『V5-Trap® 』を推奨します。V5-Trap®は各種担体（アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ）を結合させたアルパカ由来の抗V5タグ VHH抗体（Nanobody®）からなる高い親和性と特異性を示す製品です。
VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。
Nano-Trap（ナノトラップ）は、迅速かつ効率的な免疫沈降（IP）に最適です。各種担体（アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ）に結合したVHH抗体で構成されます。
各種ビーズ上に結合したVHH抗体は、ビーズ上に残存し、SDSサンプルバッファー中で溶出されません。したがって、従来のIP解析でしばしば問題となるIP抗体由来の軽鎖または重鎖バンドの干渉が無く、シングルバンドの精製を可能とします。さらに、ウエスタンブロットに使用する一次抗体/二次抗体を自由に選択できます。
Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp 
）が担当しています。
プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。
また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。
| 商品名 | V5-Trap® Magnetic Particles M-270（V5トラップ®磁気ビーズ） （Nano-Trap alpaca anti-V5, recombinant VHH, coupled to Magnetic Particles M-270） （磁気ビーズ標識アルパカ由来抗V5ナノ抗体） |
|---|---|
| 品番 | v5td-10/v5td-20/v5td-100/v5td-200/v5td-400 |
| 免疫原 | V5-tag |
| 交差種 | - |
| 特異性 | V5-tag sequence motif GKPIPNPLLGLDST |
| アプリケーション | IP（免疫沈降）、CoIP（共免疫沈降）、ChIP（クロマチン免疫沈降）、RIP（RNA免疫沈降） |
| 標識 | Magnetic Particles M-270（磁気ビーズ） |
| 宿主動物/免疫動物 | アルパカ（組換えモノクローナルVHH抗体） |
| クローン番号 | - |
| 抗体タイプ | アルパカ由来シングルドメイン一価抗体 （Alpaca single domain antibodies, monovalent） |
| 抗体親和性（KD値） | Dissociation constant KD of 40 nM |
| 結合キャパシティ | 10 µL slurry bind ~ 0.25-0.5 µg of recombinant V5-tagged protein ~30 kDa |
| 容量 | 250 µL (10 reactions)/500 µL (20 reactions)/2.5 mL (100 reactions)/5 mL (200 reactions)/10 mL (400 reactions) |
| フォーマット | 液体（slurry） |
| ビーズ詳細 | Bead size: ~ 2.8 µm |
| 洗浄バッファー適合性 | 2 % Nonidet P40 Substitute, 2 % Triton X-100, 150 mM NaCl, 10 mM TCEP, 10 mM DTT, 50 mM Urea |
| 溶出方法 | - V5-peptide. - SDS sample buffer - 0.2 M glycine pH 2.5. Please consider whether elution is really needed. We recommend on-bead assays like on-bead digestion for MS analysis. |
| 別名 | recombinant, monoclonal anti-V5-tag single domain antibody (sdAb) fragment |
| バッファー・保存剤 | 1x PBS, Preservative: 0.09 % sodium azide |
| 保存方法 |
|
はい、N末端とC末端融合タグのどちらも機能します。
必要に応じて、サンプルの「プレクリア処理（Pre-clearing）」を実施してください。その際、コントロールアガロース（品番：bab-20）またはコントロール磁性アガロース（品番：bmab-20）を利用できます。詳細は以下のトラブルシューティングガイドをご覧ください。
1回の免疫沈降反応で約10^6~10^7の哺乳類細胞の使用をおすすめします。収量は目的のタンパク質や相互作用因子の発現レベルに依存する場合があります。
哺乳類細胞以外の場合、0.5~1.0mgの細胞抽出物の使用をおすすめします。
免疫沈降後にビーズ上で直接消化する方法も利用可能です。より迅速で効率的なサンプル前処理と高収率を実現します。詳細は以下の資料をご覧ください。
いいえ、活性中心がブロックされていない限り、直接酵素アッセイが可能です。詳細は以下の資料をご覧ください。
親和性が非常に高いため、1回の反応あたり25 µL（Nano-Trap slurry量）で十分です。
各ビーズの特性（表1）に基づいて以下のように推奨します。
| V5-Trap® 結合担体 | アガロース | 磁性アガロース | 磁気ビーズ |
|---|---|---|---|
| ビーズ詳細 | アガロース （4% cross-linked） |
磁性アガロース （6% cross-linked） |
磁気ビーズ M-270 |
| ビーズ形状 | 多孔質 | 多孔質、鉄コア | 固体 |
| 結合抗体 | 抗V5タグ組換えモノクローナルVHH抗体 | ||
| 分離可能なタンパク質サイズ* | 小〜大（<200 kDa） | 小〜大（<200 kDa） 特大（>200 kDa） |
|
| ビーズ外観 | 白 | 黒 | 茶 |
| ビーズサイズ | 90 µm | 40 µm | 2.8 µm |
| 結合能 （10 µLあたり） |
6 µg | ~7 µg | ~0.25-0.5 µg |
| バックグラウンド | 非常に低い | 低い | |
| 磁気分離/自動化 | No | Yes | |
| 最大遠心力（x g） | 2,500 x g | 800 x g | 8,000 x g |
*タンパク質のサイズ、形状、多量体/複合体、相互作用因子に依存します。
いいえ、使用している磁気ビーズ（Magnetic Particles M-270）はバックグラウンドタンパク質に対する非特異的結合が極めて低い、不活性な磁気ビーズです。したがって、VHH抗体が結合していない磁気ビーズを用いた「プレクリア処理」は必要ありません。V5-Trap® Magnetic Particles M-270（磁気ビーズ標識V5タグ抗体）への非特異的結合を検証する場合には、V5タグ融合タンパク質を含まない細胞溶解物をコントロールに用意して、同様に免疫沈降（IP）を行ってください。
![V5-Trap Magnetic Particles M-270 for immunoprecipitation of V5 fusion proteins. HEK293T cell lysate with V5-tagged protein. Coomassie and Western blot. V5-tag antibody [SV5-P-K], monoclonal mouse IgG1 kappa and anti-mouse secondary antibody. I: Input, FT: Flow-Through, B: Bound](https://www.cosmobio.co.jp/product/uploads/detail_images/PGI_v5td10_2.png)
■Magnetic Particles M-270（磁性粒子/磁気ビーズ）標識モノクローナル抗体（組換えVHH抗体）
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
Anti V5, V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, recombinant VHH (Alpaca) Magnetic Particle |
PGI | V5TD-10 | 10 RXN |
￥67,000 |
| Anti V5, V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, recombinant VHH (Alpaca) Magnetic Particle |
PGI | V5TD-20 | 20 RXN |
￥110,000 |
| Anti V5, V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, recombinant VHH (Alpaca) Magnetic Particle |
PGI | V5TD-100 | 100 RXN [5 x 20 rxns] |
￥497,000 |
| Anti V5, V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, recombinant VHH (Alpaca) Magnetic Particle |
PGI | V5TD-200 | 200 RXN [10 x 20 rxns] |
お問い合わせ |
| Anti V5, V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, recombinant VHH (Alpaca) Magnetic Particle |
PGI | V5TD-400 | 400 RXN [20 x 20 rxns] |
お問い合わせ |
■ 「推奨バッファー」も入ってお得な免疫沈降（IP）キットです。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| V5-Trap(R) Magnetic Particles M-270, kit (Alpaca) |
PGI | V5TDK-20 | 20 RXN |
￥143,000 |
「磁気ビーズ標識V5タグ抗体」と「バッファー類（Lysis buffer、RIPA buffer、Dilution buffer、Wash bufferを含む）」のセット商品です。
■ 溶出用ペプチド（配列：GKPIPNPLLGLDST）
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| V5-peptide |
PGI | V5P-1 | 1 MG |
￥17,000 |
好評
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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