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細胞イメージングに最適！トランスフェクションするVHH発現ベクター蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid）

メーカー名：Proteintech Group, Inc.

Dnmt1-Chromobody plasmid（Dnmt1抗体クロモボディープラスミド）は、『蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体（抗Dnmt1ナノボディ/VHH抗体）』をコードするDNAプラスミドです。細胞にトラスフェクションすることによって、Dnmt1を特異的に蛍光標識し、生細胞イメージング等の観察に使用できます。

高親和性&高特異性VHH抗体-蛍光タンパク質プラスミド細胞イメージングに最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH

図. 従来の1/10ほどの分子量

ChromoTek（クロモテック）抗体・関連製品

■ Chromobody®（クロモボディ）とは?

『Chromobody®（クロモボディ）』とは、内在性タンパク質のリアルタイム/生細胞イメージングを可能にする蛍光ナノプローブです。クロモボディは、蛍光タンパク質-VHH融合タンパク質であり、ターゲット特異的なVHH抗体（ナノボディ）と蛍光タンパク質で構成されます。

旧クロモテック社（現プロテインテックグループの一部門）のクロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質（TagRFP、TagGFP2またはEGFP）の融合タンパク質をコードする『Chromobody®（クロモボディ）プラスミド』として提供されます。

The nanoprobe Chromobody is an intracellularly expressed fusion protein, which consists of a target-specific Nanobody and a fluorescent protein.

図. Chromobody® の模式図

クロモボディプラスミドは、トランスフェクションされた後、細胞内にクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を特異的に標識します。クロモボディは、標的タンパク質の機能に干渉することなく非侵襲的に標識するため、細胞研究やハイコンテント分析に有用です。

クロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質（TagRFPまたはTagGFP、EGFP）の融合体です。クロモボディプラスミドとして入手できます。

図. 製品概要（クロモボディプラスミド）

クロモボディプラスミドのトランスフェクション後、細胞はクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を標識します。

図. 使用方法（トランスフェクションによる細胞内導入）

Chromobody®（クロモボディ）

■ Dnmt1-Chromobody®とは?

Dnmt1-Chromobody®は、細胞周期の進行中に内在性Dnmt1をリアルタイムで可視化します。Dnmt1は、真核細胞における主要なDNAメチルトランスフェラーゼです。Dnmt1は、ゲノム全体のメチル化パターンを維持し、発生中の遺伝子発現とゲノム安定性を制御するためのエピジェネティックネットワークで必須の役割を果たします。

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp 外部リンク）が担当しています。

全てオリジナル商品：自社ラボで製造、検証済み（購入後1年間の交換保証付き）
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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

ProteintechとChromoTekは2022 CiteAb Awardsで表彰されました

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 外部リンク」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）外部リンク」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ

サイトカイン・増殖因子外部リンク

ChromoTek 試薬外部リンク

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特長

■ 蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid
商品名	蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid）
品番	dcg/dcr
タイプ	プラスミド
特異性	ヒトDnmt1（DNA（シトシン-5）-メチルトランスフェラーゼ1）
アプリケーション	Live cell imaging、Observing endogenous Dnmt1 localization、Dnmt1 as biomarker during cell cycle progression
標識	TagRFP/TagGFP2
別名	-
GeneID （遺伝子データベース情報）	-
容量	20 µg
エンコードされているVHH抗体	Monoclonal anti-Dnmt1 single domain antibody (sdAb) fragment
シーケンス（配列）	With the Dnmt1-Chromobody plasmid you receive the sequence information of the Alpaca antibody to Dnmt1 fused to TagGFP2 or TagRFP, as well as the full vector sequence.
顕微鏡観察技法	Wide-field epifluorescence microscopy; confocal microscopy
トランスフェクション手法	Transfection of Chromobody plasmids into mammalian cells can be done with standard DNA-transfection methods, e.g. lipofection (Lipofectamine 2000® from Thermo Scientific), according to the manufacturer’s protocol for the transfection reagent. Please choose the transfection method that works the best for your cell type.
保存方法	商品到着後は、-20℃で保管してください。

その他

■ Dnmt1抗体発現用プラスミドフォーマット

■ プラスミドフォーマット
	Dnmt1-Chromobody （TagGFP2）	Dnmt1-Chromobody （TagRFP）
ベクタータイプ	mammalian expression vector
プロモーター	constitutive CMV IE
レポーター	TagGFP2	TagRFP
使用コドン	mammalian
セレクションマーカー	prokaryotic - kanamycin eukaryotic - neomycin（G418）
複製起点	prokaryotic - pUC ori eukaryotic - SV40 ori
核局在化シグナル（NLS）	No
ベクターマップ
品番	dcg	dcr

よくある質問 FAQ

【01】クロモボディは恒常的に発現しますか?

はい、クロモボディ発現はCMVプロモーター下で調節されます。CMVプロモーターは、IE（immediate early）プロモーターであり、恒常的なクロモボディの発現を可能にします。

【02】クロモボディは生細胞でのみ機能しますか?

はい、クロモボディプラスミドは生細胞でのみ機能します。クロモボディの局在シグナルを観察するには、クロモボディプラスミドを細胞にトランスフェクション後、少なくとも一晩インキュベーションする必要があります。また、イメージング前に細胞を固定することも可能です。
（注：Histone-Chromobody導入細胞の固定はおすすめできません。）

【03】トランスフェクション後、どの時点で細胞を画像化する必要がありますか?

クロモボディのシグナルは、細胞内で最大3日間維持されます。ただし細胞種にも大きく依存します。したがって、トランスフェクション後、16~24時間後に細胞を画像化することをおすすめします。

【04】細胞内で発現したクロモボディは、細胞膜を透過して培地中に拡散しますか?

いいえ、クロモボディは細胞質で発現するタンパク質です。細胞膜の完全性が維持されている限り、培地中には分泌されず、細胞内にとどまります。

【05】ターゲットに結合したときにのみ蛍光を発しますか?

いいえ、クロモボディはVHH抗体と蛍光タンパク質を融合したキメラタンパク質です。ターゲットに結合しているかどうかに関係なく、蛍光を維持します。

【06】バクテリア内でクロモボディプラスミドを増幅できますか?

はい、クロモボディプラスミドは、標準的な大腸菌（E.coli）を利用した方法で増幅できます。

使用例

■ 蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid）（品番：dcg/dcr）

Series of 4 images of HeLa cells expressing the Dnmt1-Chromobody （over 5.5 hours）: In G phase cells, the signal is homogeneously distributed through the nucleus and cytoplasm. Over time, during S phase granules appear in the nucleus as replication foci form, finally the granularity disappears, and the cells divide.

図1
Series of 4 images of HeLa cells expressing the Dnmt1-Chromobody（over 5.5 hours）: In G phase cells, the signal is homogeneously distributed through the nucleus and cytoplasm. Over time, during S phase granules appear in the nucleus as replication foci form, finally the granularity disappears, and the cells divide.

■ 全ての評価データはこちらから閲覧できます

「蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid）（品番：dcg/dcr）」検証データ

蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド（Dnmt1-Chromobody plasmid）

■ 蛍光タンパク質-VHHモノクローナル抗体発現用プラスミド

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Dnmt1-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	DCG	20 UG	￥196,000
Dnmt1-Chromobody^(R) plasmid (TagRFP)	PGI	DCR	20 UG	￥196,000

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