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細胞イメージングに最適！アルパカ由来のVHH抗体-蛍光タンパク質発現プラスミド Chromobody®（クロモボディ）

メーカー名：Proteintech Group, Inc.

Chromobody®（クロモボディ）プラスミドは、細胞骨格や細胞形態、細胞周期関連マーカーのリアルタイム/生細胞イメージングに最適な『アルパカ由来のVHH抗体-蛍光タンパク質』発現プラスミドです。VHH抗体は、蛍光タンパク質融合体として発現され、各種タンパク質を特異的に標識します。

高親和性&高特異性VHH抗体-蛍光タンパク質プラスミド細胞イメージングに最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH

図. 従来の1/10ほどの分子量

ChromoTek（クロモテック）抗体・関連製品

■ Chromobody®（クロモボディ）とは?

『Chromobody®（クロモボディ）』とは、内在性タンパク質のリアルタイム/生細胞イメージングを可能にする蛍光ナノプローブです。クロモボディは、蛍光タンパク質-VHH融合タンパク質であり、ターゲット特異的なVHH抗体（ナノボディ）と蛍光タンパク質で構成されます。

旧クロモテック社（現プロテインテックグループの一部門）のクロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質（TagRFP、TagGFP2またはEGFP）の融合タンパク質をコードする『Chromobody®（クロモボディ）プラスミド』として提供されます。

The nanoprobe Chromobody is an intracellularly expressed fusion protein, which consists of a target-specific Nanobody and a fluorescent protein.

図. Chromobody® の模式図

クロモボディプラスミドは、トランスフェクションされた後、細胞内にクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を特異的に標識します。クロモボディは、標的タンパク質の機能に干渉することなく非侵襲的に標識するため、細胞研究やハイコンテント分析に有用です。

クロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質（TagRFPまたはTagGFP、EGFP）の融合体です。クロモボディプラスミドとして入手できます。

図. 製品概要（クロモボディプラスミド）

クロモボディプラスミドのトランスフェクション後、細胞はクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を標識します。

図. 使用方法（トランスフェクションによる細胞内導入）

特長

細胞機能、細胞生存、細胞移動に影響しない
ゲノムDNAに挿入されない
蛍光融合タンパク質過剰発現時に細胞毒性を示さない

使用例

The time lapse analysis reveals the reorganization of actin after treatment with Cytochalasin D: HeLa cells were subjected to confocal imaging upon treatment with 2 µM of Cytochalasin D for 1 hour and recovery for 4 hours. Actin Chromobody enables monitoring of actin dynamics in real-time in living cells.

図1. アクチンクロモボディによる共焦点イメージング
The time lapse analysis reveals the reorganization of actin after treatment with Cytochalasin D: HeLa cells were subjected to confocal imaging upon treatment with 2 µM of Cytochalasin D for 1 hour and recovery for 4 hours. Actin Chromobody enables monitoring of actin dynamics in real-time in living cells.

Live cell imaging of HeLa cells: Live cell imaging of HeLa cells stable expressing Cell Cycle-Chromobody (TagRFP). Images from a time series of 22 hours are shown

図2. PCNAクロモボディによるライブセルイメージング
Live cell imaging of HeLa cells: Live cell imaging of HeLa cells stable expressing Cell Cycle-Chromobody (TagRFP). Images from a time series of 22 hours are shown

図3. ビメンチンクロモボディによる細胞骨格の可視化
Visualize vimentin cytoskeleton with the Vimentin-Chromobody in real time in your cell line of interest

製品一覧

■ 各種クロモボディプラスミド
ターゲット	核局在化シグナル（NLS）の有無/局在	融合蛍光タンパク質	フォーマット	品番
Actin（アクチン）	No/細胞内	TagRFP	プラスミド（liquid format in water）	acr
	No/細胞内	TagGFP2		acg
	Yes/核内	TagGFP2		acg-n
PCNA（増殖細胞核抗原）	No/細胞内	TagRFP		ccr
Histone（ヒストンH2A-H2Bヘテロ二量体）		EGFP		tcg
Dnmt1（DNAメチルトランスフェラーゼ）		TagGFP2		dcr
Dnmt1（DNAメチルトランスフェラーゼ）		TagRFP		dcg
Lamin（ラミンA/C）		TagGFP2		lcg
PARP1		TagGFP2		xcg
PARP1		TagRFP		xcr
Vimentin（ビメンチン）		TagGFP2		vcg

＊：表中『ターゲット』欄をクリックすると各クロモボディプラスミドの商品紹介をご覧になれます。『融合蛍光タンパク質』欄をクリックすると蛍光タンパク質データベース「FPbase」（https://www.fpbase.org/）で各蛍光タンパク質の詳細をご覧になれます。

よくある質問 FAQ

【01】クロモボディは恒常的に発現しますか?

はい、クロモボディ発現はCMVプロモーター下で調節されます。CMVプロモーターは、IE（immediate early）プロモーターであり、恒常的なクロモボディの発現を可能にします。

【02】クロモボディは生細胞でのみ機能しますか?

はい、クロモボディプラスミドは生細胞でのみ機能します。クロモボディの局在シグナルを観察するには、クロモボディプラスミドを細胞にトランスフェクション後、少なくとも一晩インキュベーションする必要があります。また、イメージング前に細胞を固定することも可能です。
（注：Histone-Chromobody導入細胞の固定はおすすめできません。）

【03】トランスフェクション後、どの時点で細胞を画像化する必要がありますか?

クロモボディのシグナルは、細胞内で最大3日間維持されます。ただし細胞種にも大きく依存します。したがって、トランスフェクション後、16~24時間後に細胞を画像化することをおすすめします。

【04】細胞内で発現したクロモボディは、細胞膜を透過して培地中に拡散しますか?

いいえ、クロモボディは細胞質で発現するタンパク質です。細胞膜の完全性が維持されている限り、培地中には分泌されず、細胞内にとどまります。

【05】ターゲットに結合したときにのみ蛍光を発しますか?

いいえ、クロモボディはVHH抗体と蛍光タンパク質を融合したキメラタンパク質です。ターゲットに結合しているかどうかに関係なく、蛍光を維持します。

【06】バクテリア内でクロモボディプラスミドを増幅できますか?

はい、クロモボディプラスミドは、標準的な大腸菌（E.coli）を利用した方法で増幅できます。

■ Chromobody®（クロモボディ）の特異性

アクチン-Chromobody®は、アクチン細胞骨格の可視化とその動態のモニタリングのための生細胞プローブです。アクチン-Chromobody®は、適切なプロモーター下であれば、哺乳類細胞だけでなくゼブラフィッシュや植物のような進化的に遠縁の種の細胞や組織でもアクチンミクロフィラメントを非侵襲的に標識します。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合アクチン抗体発現用プラスミド）

細胞周期-Chromobody®は、増殖細胞核抗原（PCNA：Proliferating Cell Nuclear Antigen）を可視化します。PCNAは、DNAを取り囲むホモ三量体の環状タンパク質です。PCNAは、DNAトランザクションにおける定常的なプラットフォームとして機能し、複数の因子と相互作用します。細胞周期-Chromobody®は、癌治療薬等の化合物の細胞周期への影響や毒性のスクリーニングを可能にします。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合PCNA抗体発現用プラスミド）

Histone-Chromobody®は、生細胞におけるクロマチン動態を可視化するための新規プローブです。ヌクレオソームコアの一部であるヒストンH2A-H2Bヘテロ二量体に結合します。Histone-Chromobody®は、それぞれで適切なプロモーターを使用し、酵母、ハエ、哺乳類細胞で試験されています。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合Histone抗体発現用プラスミド）

Dnmt1-Chromobody®は、細胞周期の進行中に内在性Dnmt1をリアルタイムで可視化します。Dnmt1は、真核細胞における主要なDNAメチルトランスフェラーゼです。Dnmt1は、ゲノム全体のメチル化パターンを維持し、発生中の遺伝子発現とゲノム安定性を制御するためのエピジェネティックネットワークで必須の役割を果たします。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合Dnmt1抗体発現用プラスミド）

Lamin-Chromobody®は、ラミンA/Cと結合することにより核ラミナを可視化し、目的の細胞株における細胞の大きさ、核の形態、および有糸分裂をリアルタイムで観察することを可能にします。Lamin-Chromobody®は、ハイコンテント分析（HCA）でも有用です。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド）

PARP1-Chromobody®は、生細胞中の内在性PARP1（poly(ADP-ribose) polymerase 1、ポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ1）をリアルタイムで可視化します。PARP1は、核中で最も豊富に存在するタンパク質の1つであり、DNA修復、転写調節、クロマチン構造の調節等の種々の細胞プロセスに関与します。PARP1‐Chromobody®は、微小照射後のDNA損傷を調べるのに使用されます。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合PARP1抗体発現用プラスミド）

Vimentin-Chromobody®は、生細胞におけるビメンチン細胞骨格の動態を追跡します。Vimentin-Chromobody®は、主に間葉細胞で発現するビメンチン中間径フィラメントに結合します。
（商品詳細：蛍光タンパク質融合Vimentin抗体発現用プラスミド）

Chromobody®（クロモボディ）プラスミド

■ 蛍光タンパク質-VHHモノクローナル抗体発現用プラスミド

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Actin-Chromobody^(R) plasmid (TagRFP)	PGI	ACR	20 UG	￥196,000
Actin-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	ACG	20 UG	￥196,000
Nuclear Actin-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	ACG-N	20 UG	￥196,000
Cell Cycle Chromobody^(R) plasmid (TagRFP)	PGI	CCR	20 UG	￥196,000
Dnmt1-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	DCG	20 UG	￥196,000
Dnmt1-Chromobody^(R) plasmid (TagRFP)	PGI	DCR	20 UG	￥196,000
Histone-Chromobody^(R) plasmid (eGFP)	PGI	TCG	20 UG	￥196,000
Lamin-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	LCG	20 UG	￥196,000
PARP1-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	XCG	20 UG	￥196,000
PARP1-Chromobody^(R) plasmid (TagRFP)	PGI	XCR	20 UG	￥196,000
Vimentin-Chromobody^(R) plasmid (TagGFP2)	PGI	VCG	20 UG	￥196,000

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