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記事ID : 42702
研究用

細胞イメージングに最適!トランスフェクションするVHH発現ベクター 蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド(Lamin-Chromobody plasmid)

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Lamin-Chromobody plasmid(Lamin抗体クロモボディープラスミド)は、『蛍光タンパク質融合Lamin抗体(抗Laminナノボディ/VHH抗体)』をコードするDNAプラスミドです。細胞にトラスフェクションすることによって、Laminを特異的に蛍光標識し、生細胞イメージング等の観察に使用できます。

高親和性&高特異性VHH抗体-蛍光タンパク質プラスミド細胞イメージングに最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. 従来の1/10ほどの分子量
図. 従来の1/10ほどの分子量
 

■ Chromobody®(クロモボディ)とは?

Chromobody®(クロモボディ)』とは、内在性タンパク質のリアルタイム/生細胞イメージングを可能にする蛍光ナノプローブです。クロモボディは、蛍光タンパク質-VHH融合タンパク質であり、ターゲット特異的なVHH抗体(ナノボディ)と蛍光タンパク質で構成されます。

旧クロモテック社(現プロテインテックグループの一部門)のクロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質(TagRFP、TagGFP2またはEGFP)の融合タンパク質をコードする『Chromobody®(クロモボディ)プラスミド』として提供されます。

The nanoprobe Chromobody is an intracellularly expressed fusion protein, which consists of a target-specific Nanobody and a fluorescent protein.
図. Chromobody® の模式図
 

クロモボディプラスミドは、トランスフェクションされた後、細胞内にクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を特異的に標識します。クロモボディは、標的タンパク質の機能に干渉することなく非侵襲的に標識するため、細胞研究やハイコンテント分析に有用です。

クロモボディは、アルパカ由来のターゲット特異的VHH抗体と蛍光タンパク質(TagRFPまたはTagGFP、EGFP)の融合体です。クロモボディプラスミドとして入手できます。
図. 製品概要(クロモボディプラスミド)
クロモボディプラスミドのトランスフェクション後、細胞はクロモボディを発現し、ターゲットタンパク質を標識します。
図. 使用方法(トランスフェクションによる細胞内導入)
 

■ Lamin-Chromobody®とは?

Lamin-Chromobody®は、ラミンA/Cと結合することにより核ラミナを可視化し、目的の細胞株における細胞の大きさ、核の形態、および有糸分裂をリアルタイムで観察することを可能にします。Lamin-Chromobody®は、ハイコンテント分析(HCA)でも有用です。

■ Proteintech Group(プロテインテック)とは?

Proteintech Group, Inc.(プロテインテック)社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン(www.ptglab.co.jp 外部リンク)が担当しています。

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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

プロテインテックとChromoTek(クロモテック、ドイツ)は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 外部リンク」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice(研究者の選択)外部リンク」部門と「Environmental Initiative of the Year(今年の環境イニシアチブ)外部リンク」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?(日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?)外部リンク」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

 

特長

■ 蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド(Lamin-Chromobody plasmid)
商品名蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド
(Lamin-Chromobody plasmid)
品番lcg 外部リンク
タイププラスミド
特異性ヒト細胞株(HeLa、U2OS)、昆虫S2細胞でテストされたラミンA/C※
アプリケーションTrace the nuclear lamina in live cells in real-time、Monitor the nuclear integrity and morphology、Use the Lamin-Chromobody® as a biosensor for real-time assays of mitosis or apoptosis
標識TagGFP2
別名-
GeneID
(遺伝子データベース情報)
-
容量20 µg
エンコードされているVHH抗体Monoclonal anti-Lamin single domain antibody(sdAb)fragment
シーケンス(配列)With the Lamin-Chromobody plasmid you receive the sequence information of the Alpaca antibody to Lamin fused to TagGFP2, as well as the full vector sequence.
顕微鏡観察技法Wide-field epifluorescence microscopy; confocal microscopy
トランスフェクション手法Transfection of Chromobody plasmids into mammalian cells can be done with standard DNA-transfection methods, e.g. lipofection(Lipofectamine 2000® from Thermo Scientific), according to the manufacturer’s protocol for the transfection reagent. Please choose the transfection method that works the best for your cell type.
保存方法商品到着後は、-20℃で保管してください。

※:VHH抗体発現プラスミドに搭載されているプロモーターは、哺乳動物細胞で機能するCMV IEプロモーターです。

その他

■ Lamin抗体発現用プラスミドフォーマット

■ プラスミドフォーマット
Lamin-Chromobody
(tagGFP2)
ベクタータイプ mammalian expression vector
プロモーター constitutive CMV IE
レポーター TagGFP2 外部リンク
使用コドン mammalian
セレクションマーカー prokaryotic - kanamycin
eukaryotic - neomycin(G418)
複製起点 prokaryotic - pUC ori
eukaryotic - SV40 ori
核局在化シグナル(NLS) No
ベクターマップ pLC-TagGFP
品番 lcg PDF

よくある質問 FAQ

【01】クロモボディは恒常的に発現しますか?

はい、クロモボディ発現はCMVプロモーター下で調節されます。CMVプロモーターは、IE(immediate early)プロモーターであり、恒常的なクロモボディの発現を可能にします。

【02】クロモボディは生細胞でのみ機能しますか?

はい、クロモボディプラスミドは生細胞でのみ機能します。クロモボディの局在シグナルを観察するには、クロモボディプラスミドを細胞にトランスフェクション後、少なくとも一晩インキュベーションする必要があります。また、イメージング前に細胞を固定することも可能です。
(注:Histone-Chromobody導入細胞の固定はおすすめできません。)

【03】トランスフェクション後、どの時点で細胞を画像化する必要がありますか?

クロモボディのシグナルは、細胞内で最大3日間維持されます。ただし細胞種にも大きく依存します。したがって、トランスフェクション後、16~24時間後に細胞を画像化することをおすすめします。

【04】細胞内で発現したクロモボディは、細胞膜を透過して培地中に拡散しますか?

いいえ、クロモボディは細胞質で発現するタンパク質です。細胞膜の完全性が維持されている限り、培地中には分泌されず、細胞内にとどまります。

【05】ターゲットに結合したときにのみ蛍光を発しますか?

いいえ、クロモボディはVHH抗体と蛍光タンパク質を融合したキメラタンパク質です。ターゲットに結合しているかどうかに関係なく、蛍光を維持します。

【06】バクテリア内でクロモボディプラスミドを増幅できますか?

はい、クロモボディプラスミドは、標準的な大腸菌(E.coli)を利用した方法で増幅できます。

使用例

■ 蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド(Lamin-Chromobody plasmid)(品番:lcg)

U2OS cell line expressing Lamin-Chromobody fused to the green fluorescent protein TagGFP2
図1
U2OS cell line expressing Lamin-Chromobody fused to the green fluorescent protein TagGFP2
U2OS cell line expressing Lamin-Chromobody fused to the green fluorescent protein TagGFP2
図2
U2OS cell line expressing Lamin-Chromobody fused to the green fluorescent protein TagGFP2
 

蛍光タンパク質融合Lamin抗体発現用プラスミド(Lamin-Chromobody plasmid)

■ 蛍光タンパク質-VHHモノクローナル抗体発現用プラスミド

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Lamin-Chromobody(R) plasmid (TagGFP2)詳細データ PGI LCG 20 UG
¥196,000

MTAの締結について

本商品は、ご購入にあたり「Material Transfer Agreement(MTA)」の締結を必要とする商品です。お客様のご所属が大学・官公庁または非営利組織(Academic/Non-profit-entity)であることをご確認の上、以下の書類をダウンロードしてください。また、ご購入前にMTAの内容を十分にお読みいただき、ご確認、ご了解の上、必要事項をご記入ください。

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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