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記事ID : 45692
研究用

固定細胞内のアクチンフィラメント(F-Actin)を蛍光染色/可視化 CoraLite® 594 ファロイジン(赤)

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CoraLite® 594 ファロイジン(赤)(CoraLite® 594-Phalloidin (red))は、CoraLite® 594蛍光色素(Ex/Em = 593 nm/614 nm)で標識されたファロイジン分子です。4% PFA固定細胞のアクチン染色に利用できます。

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背景

■ ファロイジンとは?

ファロイジン(Phalloidin)とは、タマゴテングタケ(Amanita phalloides、キノコの1種)から単離された天然由来分子であり、細胞骨格を構成するタンパク質構造の1つであるアクチンフィラメント(F-Actin、Filamentous actin、線維状アクチン)に対して高い親和性で特異的に結合します[PMID:291981 外部リンク]。そのため蛍光色素標識ファロイジン分子は、細胞骨格研究において培養細胞(4% PFA固定/透過処理済み細胞)に添加されることで、蛍光顕微鏡下でのアクチンフィラメント構造の可視化/観察に利用されています。

特長

  • 蛍光標識済みファロイジン
  • アクチンフィラメント(F-actin)を特異的に染色・可視化
  • 4%パラホルムアルデヒド(4% PFA)固定/透過処理済み培養細胞に適用可能
  • 優れた明るさを示すCoraLite®/CoraLite® Plus蛍光色素標識体として提供
  • 安定な凍結乾燥品としてお届け
  • 1バイアル300テスト入り

※ 培養細胞への添加量(スケール)によって、1包装(300 TEST)で染色可能な最大サンプル数は異なります。

その他

• ファロイジンに標識されている蛍光色素

本製品(品番:PF00003)には蛍光色素の1つ「CoraLite®(コーラライト)594(Ex/Em = 593 nm/614 nm)」が標識されています。CoraLite®(コーラライト)色素はプロテインテック独自の蛍光色素であり、優れた明るさと高い光安定性を示します。各色素の蛍光波長を示す「蛍光スペクトルビューアー(CoraLite® 594/CoraLite® Plus 488) 外部リンク」もご参照ください。

使用方法

■ 再構成手順

  1. 凍結乾燥品としてバイアルに封入されているファロイジン(包装:300 TEST)を1.5mLの無菌水に溶解して再構成します。再構成後の溶液をストック溶液(200 TEST/mL、5 µL/TEST)として、ワーキング溶液のマスターミックスを都度調製してください。ストック溶液は遮光条件で保管してください。

※ 培養細胞への添加量(スケール)によって、1包装(300 TEST)で染色可能な最大サンプル数は異なります。

■ 染色手順

  1. 細胞をPBSで3回洗浄します。
  2. 洗浄後、細胞に4%パラホルムアルデヒド溶液(4% PFA in PBS)を添加し、氷上で15分間固定します
    注:メタノールによる固定法は、固定中にアクチン構造を崩壊させるためファロイジンを用いたアクチン染色には適しません。
  3. 固定後、細胞をPBSで3回洗浄します。
  4. 固定細胞に0.2% Triton X-100(in PBS)を添加し、室温で5分間透過処理を実施します
  5. 透過処理後、細胞をPBSで3回洗浄します。
  6. あらかじめ調製したファロイジンのストック溶液1〜5 µLをPBSバッファー200 µLに希釈し、アクチン染色用ファロイジンのマスターミックスとして調製します。複数サンプルを染色する場合、適切にスケールアップしてください。
  7. サンプルにアクチン染色用ファロイジンのマスターミックス200 µLを添加し、遮光して室温で20分間インキュベートします
  8. 染色後、細胞をPBSで3回洗浄します。
  9. 蛍光顕微鏡でサンプルを観察します

マニュアル資料

■ CoraLite® 594 ファロイジン(赤)の参考資料

使用例

■ CoraLite® 594 ファロイジン(赤)を用いたアクチンの蛍光染色例

CoraLite 594標識ファロイジンを用いたHeLa細胞のアクチン蛍光染色結果
図1
CoraLite® 594標識ファロイジン(品番:PF00003、希釈倍率:1:400)を用いたHeLa細胞(4% PFA固定)のアクチン蛍光染色結果(赤)。DAPIを用いた核の対比染色(青)。

■ 製品データシートはこちらから閲覧できます

CoraLite® 594 ファロイジン(赤)

• CoraLite® 594-Phalloidin (red)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
CoraLite(R)594-Phalloidin (red), CoraLite(R) 594 new詳細データ PGI PF00003 300 TEST
¥38,000

※ 国内在庫[あり/なし]の最新状況は、↑  品名  クリック先ページ  当社在庫  の表示をご確認ください。タイミングによって[入荷予定あり/当社在庫なし]の場合があります。

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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