ヒト破骨細胞は、M-CSF とRANKL の存在下で骨髄細胞から破骨細胞へと分化誘導します。また、播種時に象牙質切片上もしくはオステオアッセイプレートで培養することで、骨吸収窩が形成され骨吸収能を評価することができます。
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ヒト破骨細胞は、M-CSF とRANKL の存在下で骨髄細胞から破骨細胞へと分化誘導します。また、播種時に象牙質切片上もしくはオステオアッセイプレートで培養することで、骨吸収窩が形成され骨吸収能を評価することができます。
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骨組織は見た目の堅いイメージとは裏腹に骨吸収と骨形成が絶えず繰り返され、常に骨のリモデリング(再構築)が行われています。骨中には骨形成を担当する骨芽細胞と骨吸収を担当する破骨細胞の2種類の細胞が存在しており、両細胞の活性のバランスで骨の恒常性を保っています。破骨細胞が活性化し、骨形成量に対し骨吸収量が相対的に上回った状態が続くと、骨量が減少し、骨粗しょう症になることが知られています。
破骨細胞はヒト由来の骨髄単核球から選択的増殖法を用いて調製した破骨前駆細胞です。高い分化効率(図 2, 6)を持ち、象牙質切片を用いたピットフォーメーションアッセイでは明瞭な骨吸収窩を形成します。別売りの専用培地は予め成分調整済みですので、お手元に届きましたらすぐお使い頂けます。
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図1 M-CSF / RANKL で分化誘導したヒト破骨細胞 (播種4 日目) |
図2 TRAP 染色したヒト破骨細胞 |
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図3 象牙質切片上の吸収窩(Pit) ヘマトキシリン染色 (培養2 週間後) |
図4 象牙質切片上の吸収窩(Pit) SEM 画像 |
図5 分化前後の破骨細胞マーカーの発現
Real Time PCR analysis of major Osteoclast markers (normalized by RPLPO)
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100 μM | 25 μM | 0 μM |
図6 β−エストラジオール添加による破骨細胞形成阻害試験
(添加濃度:100・25・0 μM) 播種5 日目 TRAP 染色
象牙質切片は、骨モデルとして長期培養に適しています。取り扱いが簡便なオステオプレートアッセイでは、同一表面上でコッサ染色とTRAP 染色を行うことができます。
破骨細胞のマーカー酵素は酒石酸抵抗性酸 性ホスファターゼ(Tartrate-Resistant Acid Phosphatase; TRAP) となり、別売り のTRAP 染色キット(品番: AK04F) で酒石 酸抵抗性酸性ホスファターゼを簡便に検出することができます(図8 参照)。
図7(左) オステオアッセイプレート表面上で M-CSF/RANKL で分化誘導した破骨細胞
図8(中央) オステオアッセイプレート表面上で形成された破骨細胞の TRAP 染色
図9(右) オステオアッセイプレート表面上で形成された吸収窩(Pit)のコッサ染色
象牙質切片またはオステオアッセイプレート上で形成された破骨細胞は骨基質を溶解し吸収窩(Pit)を形成します。吸収窩の総面積を測定してください(図9、10 参照)
注1: オステオアッセイプレートを使用した場合は播種した細胞密度などにもよって変わってきますが、概ね培養5 日目あたりから吸収窩(Pit)が形成されてきます。必要以上に培養期間を長くすると骨基質をすべて吸収し吸収窩が確認できなくなります。
図10 象牙質切片における(pit)形成のpH 依存性
測定装置: 走査型電気化学顕微鏡
ヒト破骨前駆細胞を象牙質切片上で培養後(2週間)、切片を回収し、5 mLの1 Mアンモニア水中で超音波処理し
細胞を剥離しました。処理した切片をアンモニア水から取り出し、マイヤーのヘマトキシリン液で1分間染色し、
水洗、乾燥させた後、破骨細胞によって形成された吸収窩を観察し、形状の測定を行いました。
※本測定には、特殊専用加工を行った象牙質切片を使用しております。詳細についてはお問い合わせください。
形成された骨吸収窩を広い範囲で形状測定を行いました。
図11 ラット骨芽細胞
図12 測定結果
さらに、図12 □内の骨吸収窩の詳細を調べるため、高解像度で測定を行い、深さを解析しました。
図13 骨吸収窩の深さ解析結果
同様に、形成された骨吸収窩形状を測定後、単一の骨吸収窩形状データを抽出して体積を計算しました。
図14 骨吸収窩の体積測定結果
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
ヒト破骨細胞 / Human Osteoclasts, Human ![]() |
PMC | OSC15C | 1 VIAL [1.5×10^6 cells/vial] |
¥160,000 |
本商品のご注文には、専用の申込みフォームが必要です。
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
破骨細胞培養用メディウム(ヒト用) / Osteoclast Culture Medium ![]() |
PMC | OSCMHB | 30 ML |
¥33,000 |
破骨細胞洗浄用メディウム / Osteoclast Wash Medium, Unlabeled ![]() |
PMC | OSCMW | 100 ML |
¥12,000 |
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
RANKL, Human![]() |
PMC | AK30 | 10 UG [1 mg/mL] |
¥19,000 |
96 ウェルプレートで10 枚分(10 回分)
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
TRAP染色キット / TRAP Staining Kit ![]() |
PMC | AK04F | 10 PLATE [96 well x 10] |
¥38,000 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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