キナーゼの直接の基質の標識と同定

Sci. Signal., 5 June 2012
Vol. 5, Issue 227, p. pl3
[DOI: 10.1126/scisignal.2002568]

Scott M. Carlson^1,2* and Forest M. White^1,2†

¹ Department of Biological Engineering, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA, USA.
² Koch Institute for Integrative Cancer Biology, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA, USA.

^* Present address: Department of Biology, Stanford University, Stanford, CA, USA.

† Corresponding author. E-mail, fwhite@mit.edu

要約：キナーゼの基質の同定は、シグナル伝達経路をマッピングする際の重要なステップであるが、依然として時間のかかる難しい過程である。アナログ感受性（AS）キナーゼは、全細胞ライセート中でキナーゼの直接の基質を選択的に標識して同定するために利用される。このアプローチでは、標的タンパク質を選択的にチオリン酸化するために、γ-チオールアデノシン三リン酸アナログとASキナーゼが利用される。チオリン酸はトリプシン消化物からペプチドを精製するための化学的ハンドルとして利用され、標的タンパク質は液体クロマトグラフィーとタンデム質量分析法（LC-MS/MS）によって同定される。本稿でわれわれは、ASキナーゼの基質を標識するための最新の方策、チオリン酸化ペプチドの固相捕集、非特異的なバックグラウンドのペプチドをふるい分けするための細胞培養での安定同位体標識の取込み、少量の標的を同定するためのリン酸化標的ペプチドの濃縮、およびLC-MS/MSによる解析について述べる。

S. M. Carlson, F. M. White, Labeling and Identification of Direct Kinase Substrates. Sci. Signal. 5, pl3 (2012).