タグタンパク質の高効率かつ特異的な精製・免疫沈降（IP）に最適 DYKDDDDK Fab-Trap™ Agarose（アガロースビーズ標識DYKDDDDK抗体）

DYKDDDDK Fab-Trap™ Agarose（DYKDDDDK-Fabトラップ™アガロース）は、DYKDDDDKタグ融合タンパク質の単離・精製・免疫沈降（IP：Immunoprecipitation）実験に最適なアガロースビーズ担体結合済みのDYKDDDDKタグ抗体です。

アガロースビーズ（agarose beads）には、1xおよび3xDYKDDDDKタグ配列（1xおよび3xFlag®タグ）を特異的に認識する「抗DYKDDDDK組換えモノクローナル抗体（Fab領域）」が結合しています。

DYKDDDDKタグとは?

DYKDDDDKタグ（別名：Flag®タグ）は、天然のタンパク質に由来しないアミノ酸配列からなる、人為的に作られたペプチドタグです。1988年に発表されたHoppらの論文で最初に報告されました［DOI：10.1038/nbt1088-1204 ］。DYKDDDDKタグは、目的タンパク質配列のN末端またはC末端に付加・クローニングされることでタグ融合組換えタンパク質の作製・発現に用いられ、抗体による様々な捕捉や検出アプリケーションのためのエピトープタグとして利用されます。「Flag®タグ」としても知られますが、「Flag®（Anti-Flag®）」という名称はSigma-Aldrich（Merck）社の登録商標です。そのため、一般的にはそのペプチド配列に基づきDYKDDDDKタグと呼称されます。DYKDDDDKタグは、8つのアミノ酸残基からなり、そのアミノ酸配列は「DYKDDDDK（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）」です。いわゆる1xFlag®タグに加えて、3xFlag®タグも使用されますが、多くの3xFlag®タグに使用されている配列モチーフ（アミノ酸配列：DYKDHDG-DYKDHDI-DYKDDDDK）は、1xFlag®配列（アミノ酸配列：DYKDDDDK）の単純な繰り返し配列ではありません。クロモテック（2020年よりプロテインテックグループ）の『DYKDDDDK Fab-Trap™（ファブトラップ）』は、免疫沈降用アガロースビーズ結合済みの抗DYKDDDDKタグ Fabフラグメント抗体です。1xFlag®タグ配列および3xFlag®配列を認識し、純度が高くバックグラウンドの低い良好な免疫沈降（IP）を実現します。

• ［参考ブログ記事］Flag®タグと3xFlag®タグとは？ 
  （DYKDDDDKタグの性状、特性、由来、配列、分子量、その他の概要を解説します。）
• ［参考ブログ記事］DYKDDDDKタグ融合タンパク質の免疫沈降（IP）法 
  （DYKDDDDKタグは、免疫沈降（IP）、タンパク質精製、免疫蛍光染色（IF）、ウェスタンブロット（WB）等の様々なアプリケーションで使用されます。）
• ［参考ブログ記事］免疫沈降用の異なる抗体フォーマット（従来型抗体、Fabフラグメント、VHH抗体）の利点と制約 
• ［参考ブログ記事］Fab-Trap™が「”Fab”ulous（素晴らしい）」な理由  
  （クロモテックのFab-Trap™（ファブトラップ）は、抗体のFabフラグメントを利用した免疫沈降（IP）用アフィニティ試薬です。）

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp ）が担当しています。

• 全てオリジナル商品：自社ラボで製造、検証済み（購入後1年間の交換保証付き）
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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ サイトカイン・増殖因子 ChromoTek 試薬 

 

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■ DYKDDDDK Fab-Trap™ アプリケーション参考資料

• ［プロトコール］DYKDDDDK Fab-Trap Agarose
• ［プロトコール］DYKDDDDK Fab-Trap Agarose Kit

■ DYKDDDDK Fab-Trap™ Agarose（アガロースビーズ標識DYKDDDDK抗体）（品番：ffa-10/-20/-100/-200/-400）

図1
DYKDDDDK Fab-Trap™ was used for immunoprecipitation of Flag®-tagged protein from HEK293T cell lysate. During elution with 3xDYKDDDDK-peptide (fp-1) the enriched Flag® fusion protein is released from DYKDDDDK Fab-Trap™. Western blot was probed with DYKDDDDK tag Polyclonal antibody (Binds to FLAG® tag epitope) (Proteintech, 20543-1-AP) and Nano-Secondary® alpaca anti-human IgG/anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor® 488 [CTK0101, CTK0102] (srbAF488-1). L: Prestained protein marker (Proteintech, PL00001), I: Input, FT: Flow-Through, E: Elution.

図2
Analysis of unspecific binding of endogenous proteins to the DYKDDDDK Fab-Trap™ in the absence of Flag® fusion protein. Lysates devoid of Flag® fusion protein from HEK cells (HEK293T), Yeast (Saccharomyces cerevisiae), Insect cells (HighFive), Bacteria (Escherichia coli TG1) , and Plant (Arabidopsis thaliana) were subjected to immunoprecipitation with DYKDDDDK Fab-Trap™ and elution with 2x SDS-sample buffer. SDS-PAGE analysis shows elution of Fab-fragment only without contamination of endogenous proteins. L: Prestained protein marker (Proteintech, PL00001), I: Input, B: Bound.

図3
DYKDDDDK Fab-Trap™ was used for immunoprecipitation of Flag®-tagged protein from HEK293T cell lysate. During elution with 2x SDS-sample buffer the enriched Flag® fusion protein and Fab-fragment are released from DYKDDDDK Fab-Trap™. Western blot was probed with DYKDDDDK tag Polyclonal antibody (Binds to FLAG® tag epitope) (Proteintech, 20543-1-AP) and Nano-Secondary® alpaca anti-human IgG/anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor® 488 [CTK0101, CTK0102] (srbAF488-1). L: Prestained protein marker (Proteintech, PL00001), I: Input, FT: Flow-Through, B: Bound.

「アガロースビーズ標識DYKDDDDK抗体」と「バッファー類（Lysis buffer、RIPA buffer、Dilution buffer、Wash bufferを含む）」のセット商品です。

「アガロースビーズ標識DYKDDDDK抗体（品番：FFA-20）」「3xDYKDDDDKペプチド（品番：FP-1）」「検出用抗体（品番：20543-1-AP、包装：20UL）」のセット商品です。

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