お求めやすい価格&文献実績多数！GAPDH、βアクチン、αチューブリン等を検出 ウェスタンブロット（WB）ローディングコントロール抗体

ローディングコントロール抗体（Loading control antibody、Control antibody）は、ウェスタンブロット（WB：Western Blot）法を用いたタンパク質の比較定量／半定量実験において、組織／細胞内で定常的に発現する標準タンパク質の検出に適用されるコントロール抗体です。

プロテインテックは、文献使用実績が豊富な各種コントロール抗体（α/βチューブリン、βアクチン、GAPDH、Vinculin、Histone H3、ラミンB1、PCNA、TBP、COXIV、VDCA1/Porin、Transferrin）をお求めやすい価格帯で提供しています。

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ローディングコントロールとは?

• 内在性コントロール

ローディングコントロールとは、主にウェスタンブロット（WB：Western Blot/Western Blotting）法で用いられる内在性コントロール（内部標準）です。ローディングコントロールは、実験結果を適切に解釈するために必要とされ、有意義な研究を遂行するためには不可欠な存在です。ローディングコントロール実験およびその検出データは、異なる実験条件下の一連のタンパク質量を半定量（比較定量）する際に広く使用され、論文投稿用データの取得や作成時には必須とされます。また、ウェスタンブロット実験の最適化やトラブルシューティングを行う際にも重要な指標となります。

• コントロール抗体の利用方法

• コントロールタンパク質の選択

ウェスタンブロットのローディングコントロールの候補となり得るタンパク質は、高レベルで恒常的に発現しているタンパク質であり、使用する組織や細胞の種類、取り扱い方法に関わらず、実験全体を通じて発現量が一定である（変化しない）ことが求められます。そのため、代表的なコントロールタンパク質であるβアクチンやαチューブリンであっても、実験条件によっては影響を受ける可能性があり、慎重に選択する必要があります（計画している実験条件／実験方法がコントロールタンパク質に影響を与えないことを予め確認してください）。

• ［参考：プロテインテック社製品ページ］タグ抗体&ローディングコントロール抗体 
• ［参考：プロテインテック社ブログ記事］ウェスタンブロットにおけるローディングコントロール 

■ ターゲットタンパク質とコントロールタンパク質のウェスタンブロット（WB）検出

以下の実験データでは、遺伝子発現を欠損または抑制させた、ノックアウトサンプルまたはsiRNA処理サンプルを用いてウェスタンブロット（WB）検出を実施しています。実験的処理を施したサンプルではシグナルの欠損／減衰が観察されます。一方、コントロールタンパク質であるGAPDHまたはPCNAのバンドは、一定のシグナル強度で観察されます。したがって、ターゲットタンパク質の発現量の変化は、ゲルへのローディング時にサンプルのロスが生じた等の実験手技的要因ではなく、実験的処理による結果であることを確認できます。

化学発光法

THP-1細胞を用いたWB（ウェスタンブロット）：野生型（WT）サンプルまたはIBA1ノックアウト（KO）サンプルを用いた。ターゲット特異的抗体としてIBA1抗体（品番：10904-1-AP）を使用した。コントロール抗体としてGAPDH抗体（品番：10494-1-AP）を使用した。

蛍光法

A431細胞ライセートのWB（ウェスタンブロット）：コントロールsiRNAまたはP53特異的siRNAをトランスフェクションしたサンプルを使用した。ターゲット特異的抗体としてFlexAble CoraLite® Plus 555 Kit（品番：KFA002、緑）で標識したP53抗体（品番：80077-1-RR）を使用した。コントロール抗体としてFlexAble CoraLite® Plus 647 Kit（品番：KFA023、赤）で標識したPCNA抗体（品番：60097-1-Ig）を使用した。

ローディングコントロールの選び方

ローディングコントロール抗体を購入する際の目安として以下の表を参照してください。一般的に使用されるコントロールタンパク質の細胞内局在／発現サンプルおよび分子量を記載しています。ご自身が研究対象とするタンパク質（ターゲットタンパク質）とは異なる分子量のコントロールを選択してください。

1位 GAPDH

GAPDH（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ）は、解糖系の第6段階を触媒するタンパク質です。GAPDH遺伝子／タンパク質は、代表的なハウスキーピング遺伝子／タンパク質の1つであり、多くの組織や細胞において安定して高レベルに発現します。そのため、GAPDHはウェスタンブロットのローディングコントロールや、RT-PCRの内在性コントロールとして一般的に使用されています。

■ GAPDH 抗体

GAPDH	標識	抗体タイプ	品名	品番	文献実績数／レビュー
	非標識	マウスモノクローナル	GAPDH Monoclonal antibody	60004-1-Ig	9,500報以上 ★★★★
	非標識	ウサギポリクローナル	GAPDH Polyclonal antibody	10494-1-AP	5,700報以上 ★★★★
	HRP標識	マウスモノクローナル	HRP-conjugated GAPDH Monoclonal antibody	HRP-60004	500報以上 ★★★★

2位 β-actin

βアクチン（β-actin、ACTB）は、アクチンファミリーに属する種間で高度に保存されたタンパク質です。アクチンタンパク質は、細胞骨格を構成するタンパク質であり、様々なタイプの細胞の運動性に関与します。また全ての真核細胞において遍在的に発現することで知られます。そのため、βアクチンはRT-PCRの内在性コントロール、~42kDaタンパク質として検出されるウェスタンブロットのコントロールとして広く使用されています。

■ Beta Actin 抗体

Beta Actin	標識	抗体タイプ	品名	品番	文献実績数／レビュー
	非標識	マウスモノクローナル	Beta Actin Monoclonal antibody	66009-1-Ig	5,200報以上 ★★★★
	非標識	ウサギポリクローナル	Beta Actin Polyclonal antibody	20536-1-AP	3,200報以上 ★★★★
	非標識	マウスモノクローナル	Beta Actin Monoclonal antibody	60008-1-Ig	2,900報以上 ★★★★★

3位 α-tubulin

αチューブリン（α-tubulin）は、細胞骨格構造の微小管を構成するタンパク質です。種間で高く保存されており、ウェスタンブロットにおけるローディングコントロールとしても頻繁に使用されます。

■ Alpha Tubulin 抗体

Alpha Tubulin	標識	抗体タイプ	品名	品番	文献実績数／レビュー
	非標識	ウサギポリクローナル	Alpha Tubulin Polyclonal antibody	11224-1-AP	1,200報以上 ★★★★★
	非標識	マウスモノクローナル	Alpha Tubulin Monoclonal antibody	66031-1-Ig	800報以上 ★★★★

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• ［商品情報］Vinculin 抗体

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• ［商品情報］Beta Actin 抗体

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• ［商品情報］GAPDH 抗体

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• ［商品情報］TBP 抗体

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• ［商品情報］PCNA 抗体

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• ［商品情報］Histone-H3 抗体

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• ［商品情報］VDAC1/Porin 抗体

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• ［商品情報］Transferrin（トランスフェリン）抗体

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