高い特異性と親和性！Nano-Secondary® アルパカ抗ウサギ/ヒト免疫グロブリンG、30報以上の文献使用実績 Alpaca anti-rabbit/human IgG 抗体（Alexa Fluor® 488標識）

Alpaca anti rabbit/human IgG 抗体（Nano-Secondary® alpaca anti-rabbit/human IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor® 488）は、ウサギIgGおよびヒトIgG（rabbit/human IgG）を検出するAlexa Fluor® 488 標識済みの二次抗体です。

アルパカ（Alpaca）を宿主動物（免疫動物）として作製された「組換えVHHモノクローナル抗体」（VHH：ラクダ科動物の「重鎖抗体」由来の抗原結合ドメイン、Nanobody® としても知られます）であり、高い特異性と親和性を示します。抗体サイズが小さく、高浸透性および高解像度の免疫蛍光染色を可能にします。

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH

図. 従来の1/10ほどの分子量

■ Nano-Secondary®とは?

Nano-Secondary®（ナノ二次抗体）は、蛍光色素とアルパカ由来のVHH抗体からなる、動物種/抗体サブタイプ特異的な二次抗体です。従来のモノクローナル抗体やポリクローナル抗体とは異なり、無血清発現系を用いた組換え抗体として安定的に産生されます。また、開発過程で他種由来IgGや血清タンパク質との交差反応性を検証したクローンを選別しており、予備吸着不要で高い特異性と低バックグラウンドを示します。

図. Nano-Secondary® と従来のポリクローナル二次抗体の比較
（左）Nano-Secondary®（緑色）と一次抗体（灰色）の複合体形成（サイズが小さく、エピトープに対して標識物質がより近接した正確な複合体を形成）。
（右）従来のポリクローナル二次抗体（緑色）と一次抗体（灰色）の複合体形成（大規模であり、任意性のある複合体を形成）。

抗体サイズが小さいため、高浸透性かつ高解像なイメージングに寄与し、免疫蛍光染色（IF）を中心としたアプリケーションに利用できます。

また、Nano-Secondary®は、免疫蛍光染色（IF）やウェスタンブロット（WB）で『ワンステップ染色』（一次抗体と二次抗体（Nano-Secondary®）を同時にインキュベーションする方法）にも対応しています（参考プロトコール参照）。一価のVHH二次抗体は、小サイズでかつ高い特異性と親和性を示すため、従来の二価の二次抗体と異なり、一次抗体のエピトープに対するアクセス性や細胞内への浸透性を妨げる大きなクラスター（複合体）を形成しません。

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp ）が担当しています。

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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ サイトカイン・増殖因子 ChromoTek 試薬 

 

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■ 組換えVHHモノクローナル抗体の結合特性・特異性（クローン：CTK0101, CTK0102）

図. クローンCTK0101, CTK0102のウサギIgG結合部位
Well-defined and characterized immunostaining with Nano-Secondary alpaca anti-rabbit IgG: Primary anti-rabbit IgG antibody (grey) with 2 copies each of rabbit Fab- and Fc-specific monoclonal Nanobodies (green) bound. In total, 8 fluorophores (red stars) label the primary rabbit IgG antibody.

図. マウス、ラット、ウサギIgへの特異性（他社比較）
ChromoTek's Nano-Secondary alpaca anti-rabbit IgG is highly specific and binds only rabbit gamma immunoglobulins (IgG). In contrast, competitor A’s goat anti-rabbit IgG antibody shows unwanted cross-reactivity to mouse IgGs (red square) despite its pre-adsorption against mouse serum.

図. クローンCTK0101のヒトIgG結合部位
Well-defined and characterized immunostaining: Primary anti-human IgG antibody (grey) with 2 copies of human Fc-specific monoclonal Nanobodies (green), Nano-Secondary alpaca anti-human IgG, bound. In total, 4 fluorophores (red stars) label the primary human IgG antibody.

■Anti-rabbit/human IgG 抗体（Alexa Fluor® 488標識）（品番：srbAF488-1-10/-100）

図1
Immunostaining of nuclear lamina in HeLa cells with rabbit anti-Lamin B1 antibodiesand Nano-Secondary® alpaca anti-human IgG/anti-rabbit IgG, recombinant VHH, AlexaFluor® 488 [CTK0101, CTK0102] 1:1,000 (green). Scale bar, 20 µM.

図2
Western blot analysis of EGFP (EGFP-250, ChromoTek) added to HEK293T cell lysate.Detection with GFP antibody rabbit polyclonal [PABG1] (PABG1, ChromoTek) 1:1,000and Nano-Secondary® alpaca anti-human IgG/anti-rabbit IgG, recombinant VHH, AlexaFluor® 488 [CTK0101, CTK0102] 1:1,000.

図3
Multiple Nano-Secondaries can be applied for multiplex fluorescent Western blotting. This allows multiple targets to be analyzed simultaneously on the same blot at the same time. Multiplex fluorescent Western blot of GFP-TOM70, β-Tubulin, and GFP in HEK293T cell lysate. Western blot membrane was simultaneously incubated with primary antibodies and Nano-Secondaries. Green: rabbit anti-GFP (ChromoTek PABG1) + Nano-Secondary alpaca anti-rabbit IgG Alexa Fluor® 488. Magenta: mouse anti-β-Tubulin + Nano-Secondary alpaca anti-mouse IgG2b Alexa Fluor® 647.

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• ［参考アプリケーション］Maleimide chemistry を利用した標識プロトコール

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