商品情報

記事ID : 41434
研究用

免疫沈降(IP)で豊富な実績!高い特異性と親和性、Nano-Trap シリーズ Spot-Trap® Agarose(アガロースビーズ標識Spotタグ抗体)

このエントリーをはてなブックマークに追加

Spot-Trap® Agarose(Spotトラップ®アガロース)は、Spotタンパク質の免疫沈降(IP:Immunoprecipitation)実験に最適なアガロースビーズ担体結合済みのSpotタグ抗体です。

アガロースビーズ(agarose beads)には、アルパカ(Alpaca)を宿主動物(免疫動物)として作製された「抗Spot組換えモノクローナルVHH抗体」が結合しています。VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。

高親和性&高特異性アルパカ組換えVHH免疫沈降(IP)に最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. 従来の1/10ほどの分子量
図. 従来の1/10ほどの分子量
 

■ Nano-Trapとは?

ビーズに結合したVHH抗体Nano-Trap(ナノトラップ)は、迅速かつ効率的な免疫沈降(IP)に最適です。各種担体(アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ)に結合したVHH抗体で構成されます。

各種ビーズ上に結合したVHH抗体は、ビーズ上に残存し、SDSサンプルバッファー中で溶出されません。したがって、従来のIP解析でしばしば問題となるIP抗体由来の軽鎖または重鎖バンドの干渉が無く、シングルバンドの精製を可能とします。さらに、ウエスタンブロットに使用する一次抗体/二次抗体を自由に選択できます。

 

■ Nano-Trapのアプリケーション

  • IP(免疫沈降)/ CoIP(共免疫沈降)
  • ChIP(クロマチン免疫沈降)/ RIP(RNA免疫沈降)
  • 質量分析(Mass spectrometry)
  • On-bead enzyme assay
NanoTrap(左)と従来型であるProtein A/G結合IgG抗体(右)を用いた免疫沈降の概要。Nano-Trapでは、単一のバンドを得られ、従来型とは異なり軽鎖/重鎖由来のバンドは観察されません。
図. Nano-Trap(左)と従来型であるProtein A/G結合IgG抗体(右)を用いた免疫沈降の概要。Nano-Trapでは、単一のバンドを得られ、従来型とは異なり軽鎖/重鎖由来のバンドは観察されません。
 

■ Proteintech Group(プロテインテック)とは?

Proteintech Group, Inc.(プロテインテック)社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン(www.ptglab.co.jp 外部リンク)が担当しています。

  • 全てオリジナル商品:自社ラボで製造、検証済み(購入後1年間の交換保証付き)
  • 数多くの評判:国内・海外における累計64,900報以上の論文使用実績(2022年3月現在)
  • 迅速な納期:約12,500品目を当社倉庫に国内在庫!

プロテインテックグループにChromoTek®(クロモテック)が加わりました!

旧ChromoTek社製品はプロテインテックがお届けします

主に『アルパカ抗体(組換えVHH)』の製造を行う旧ChromoTek®(クロモテック、ドイツ)社(www.chromotek.com 外部リンク)は、2020年10月よりProteintech Group(プロテインテック 、米国)ブランドの一部になりました。緑色蛍光タンパク質(GFP)の免疫沈降(IP)実験で3,030報以上の文献実績を有する GFP-Trap® をはじめ、アルパカ由来の組換えVHH抗体は、高い親和性、特異性、および安定性を発揮します。

特長

■ Spot-Trap® Agarose(アガロースビーズ標識Spotタグ抗体)
商品名Spot-Trap® Agarose(Spotトラップ®アガロース)
(Nano-Trap alpaca anti-Spot, recombinant VHH, coupled to agarose beads)
(アガロースビーズ標識アルパカ由来抗Spotナノ抗体)
品番eta-10/eta-20/eta-100/eta-200/eta-400 外部リンク
免疫原Spot
交差種-
特異性Spot-Tag sequence motif PDRVRAVSHWSS
アプリケーションIP(免疫沈降)、CoIP(共免疫沈降)、ChIP(クロマチン免疫沈降)、RIP(RNA免疫沈降)
標識アガロースビーズ(Agarose Beads)
宿主動物/免疫動物アルパカ(組換えモノクローナルVHH抗体)
クローン番号-
抗体タイプアルパカ由来シングルドメイン一価抗体
(Alpaca single domain antibodies, monovalent)
抗体親和性(KD値)Dissociation constant KD of 6 nM
結合キャパシティ10 µL slurry bind about 7 µg of recombinant Spot-Tag fusion protein (30 kDa)
容量250 µL (10 reactions)/500 µL (20 reactions)/2.5 mL (100 reactions)/5 mL (200 reactions)/10 mL (400 reactions)
フォーマット液体(slurry)
ビーズ詳細Bead size: ~ 90 µm (cross-linked 4 % agarose beads)
洗浄バッファー適合性2 M urea, 2 M NaCl, 10 mM DTT, 2 % Nonidet P40 Substitute, 1 % Triton X-100, 0.1 % SDS
溶出方法- SDS sample buffer - 10 mM NaOH pH 12 Please consider whether elution is really needed. We recommend on-bead assays like on-bead digestion for MS analysis. For protein purification and efficient elution with Spot peptide at +4°C we recommend Spot-Cap™ affinity resin.
別名Recombinant, monoclonal anti-Spot-Tag single domain antibody (sdAb) fragment
バッファー・保存剤20 % EtOH
保存方法
  • 商品到着後は、4℃で保管してください。
  • 凍結はしないよう注意してください(凍結禁止)。

その他

■ Spot-Trap® Agarose アプリケーション参考資料

よくある質問 FAQ

【01】N末端とC末端融合タグはどちらで機能しますか? タンパク質内部にタグを配置することもできますか?

はい、N末端とC末端融合タグのどちらも機能します。
タンパク質内部にSpotタグを配置する場合は、その都度検証が必要です。Spotタグペプチドは、線形(Linear)な状態で、目的タンパク質の他の部位の影響・立体障害を受けずに、アクセスできる必要があります。Spotタグを目的タンパク質内部に配置する場合、高次構造を取らないループやもともと高次構造を取っていないドメイン、または長いドメインリンカーに挿入された場合にのみ、抗SpotタグVHH抗体(ナノボディ)によって認識される可能性があります。

【02】ウェスタンブロットでSpotタグ融合タンパク質を検出できますか?

はい、「Spot-Label®(蛍光標識Spotタグ抗体)」を蛍光ウェスタンブロット(WB)に使用できます。または、非標識の「Spot-Tagマウスモノクローナル抗体(クローン番号:28A5)」を利用できます。アルパカ由来の「Spotタグ組換えモノクローナルVHH抗体(品番:etb-250)」を使用して、抗ラマ二次抗体(例. Bethyl Laboratories社、品番:A160-100P)または抗6*Hisタグ抗体とインキュベートして検出することも可能です。

【03】Spot-Label®をウェスタンブロットや免疫蛍光染色で使用する場合の反応時間を教えてください。

一晩のインキュベーションで最適な結果を得ることができます。

【04】N末端とC末端融合タグはどちらも機能しますか?

はい、N末端とC末端融合タグのどちらも機能します。

【05】非特異的タンパク質の結合を回避する方法はありますか?

必要に応じて、サンプルの「プレクリア処理(Pre-clearing)」を実施してください。その際、コントロールアガロース(品番:bab-20)またはコントロール磁性アガロース(品番:bmab-20)を利用できます。詳細は以下のトラブルシューティングガイドをご覧ください。

【06】免疫沈降に必要な哺乳類細胞数を教えてください。

1回の免疫沈降反応で約10^6~10^7の哺乳類細胞の使用をおすすめします。収量は目的のタンパク質や相互作用因子の発現レベルに依存する場合があります。

【07】免疫沈降に必要な細胞抽出物量を教えてください。

哺乳類細胞以外の場合、0.5~1.0mgの細胞抽出物の使用をおすすめします。

【08】質量分析のために、結合タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

免疫沈降後にビーズ上で直接消化する方法も利用可能です。より迅速で効率的なサンプル前処理と高収率を実現します。詳細は以下の資料をご覧ください。

【09】酵素アッセイのために目的タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

いいえ、活性中心がブロックされていない限り、直接酵素アッセイが可能です。詳細は以下の資料をご覧ください。

【10】1回の免疫沈降に必要なNano-Trap量を教えてください。

親和性が非常に高いため、1回の反応あたり25 µL(Nano-Trap slurry量)で十分です。

【11】結合したタンパク質をどのように溶出しますか?

2xSDSサンプルバッファーで溶出できます。または、10 mM NaOH(pH12)で溶出できます(溶出直後にpH調整が必要です)。Spotペプチド(配列:PDRVRAVSHWSS)を用いて4℃条件で穏やかにかつ効率的な溶出を検討される際は、Spot-Trap®の代わりにSpot-Cap®(スポットキャップ)アフィニティレジンの使用をおすすめします。

【12】各Spot-Trap®(アガロース、磁性アガロース、磁性ビーズ)の違いを教えてください。

各ビーズの特性(表1)に基づいて以下のように推奨します。

  • アガロースビーズ(Agarose)非常に低いバックグラウンドおよび高い結合能を必要とするIPに最適
  • 磁性アガロースビーズ(Magnetic Agarose)磁気分離および高い結合能を必要とするIPに最適
  • 磁気ビーズ(Magnetic Particles M-270)磁気分離および非常に大きなタンパク質を対象とするIPに最適
表1. Spot-Trap® 各種ビーズの特性
Spot-Trap® 結合担体 アガロース 磁性アガロース 磁気ビーズ
ビーズ詳細 アガロース
(4% cross-linked)
磁性アガロース
(6% cross-linked)
磁気ビーズ M-270
ビーズ形状 多孔質 多孔質、鉄コア 固体
結合抗体 抗Spotタグ組換えモノクローナルVHH抗体
分離可能なタンパク質サイズ* 小〜大(<200 kDa) 小〜大(<200 kDa)
特大(>200 kDa)
ビーズ外観
ビーズサイズ 90 µm 40 µm 2.8 µm
結合能
(10 µLあたり)
7 µg 7 µg 0.9 µg
バックグラウンド 非常に低い 低い
磁気分離/自動化 No Yes
最大遠心力(x g) 2,500 x g 800 x g 8,000 x g

*タンパク質のサイズ、形状、多量体/複合体、相互作用因子に依存します。

使用例

■ Spot-Trap® Agarose(アガロースビーズ標識Spotタグ抗体)(品番:eta-10/-20/-100/-200/-400)

Immunoprecipitation of Spot-tagged protein.
図1
Immunoprecipitation of Spot-tagged protein.
Immunoprecipitation of Spot-tagged protein. Input (I), non-bound (FT) and bound (B), Coomassie staining and Western blotting. Western blot indicates high effectivity.
図2
Immunoprecipitation of Spot-tagged protein. Input (I), non-bound (FT) and bound (B), Coomassie staining and Western blotting. Western blot indicates high effectivity.
 

Spot-Trap® Agarose(アガロースビーズ標識Spotタグ抗体)

■アガロースビーズ標識モノクローナル抗体(組換えVHH抗体)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti Spot, Spot-Trap(R), recombinant VHH (Alpaca) Agarose詳細データ PGI ETA-10 10 RXN
¥51,000
Anti Spot, Spot-Trap(R), recombinant VHH (Alpaca) Agarose詳細データ PGI ETA-20 20 RXN
¥84,000
Anti Spot, Spot-Trap(R), recombinant VHH (Alpaca) Agarose詳細データ PGI ETA-100 100 RXN
[5 x 20 rxns]
¥381,000
Anti Spot, Spot-Trap(R), recombinant VHH (Alpaca) Agarose詳細データ PGI ETA-200 200 RXN
[10 x 20 rxns]
お問い合わせ
Anti Spot, Spot-Trap(R), recombinant VHH (Alpaca) Agarose詳細データ PGI ETA-400 400 RXN
[20 x 20 rxns]
お問い合わせ

[関連]Spot-Trap® Agarose(アガロースビーズ標識Spotタグ抗体)キット

■ 「推奨バッファー」も入ってお得な免疫沈降(IP)キットです。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Spot-Trap(R) Agarose, kit (Alpaca) 詳細データ PGI ETAK-20 20 RXN
¥106,000

「アガロースビーズ標識Spotタグ抗体」と「バッファー類(Lysis buffer、RIPA buffer、Dilution buffer、Wash bufferを含む)」のセット商品です。

[関連]Binding Control Agarose(コントロールアガロース)

結合コントロール」または「プレクリア処理(Pre-clearing)」に利用できるアガロースビーズです。VHH抗体は結合していません。プレクリア処理に関しては、旧クロモテック社ブログ記事「免疫沈降(IP)で低バックグラウンドを実現するために 外部リンク」をご参照ください。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Blocked agarose beads (binding control), Agarose詳細データ PGI BAB-20 20 RXN
¥15,000

[関連]抗Spotタグ VHH抗体(未標識)

■ 未標識モノクローナル抗体(組換えVHH)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti Spot, recombinant VHH (Alpaca) 詳細データ PGI ETB-250 250 UL
[1 mg/ml]
¥84,000

[関連]Spot-Trap® 各種ラインアップ(磁性アガロース、磁気ビーズ)

[関連]再生可能・タンパク質精製に!Spot-Cap®(スポットキャップ)& 溶出用ペプチド

[関連]Spot-Label®(免疫細胞染色に最適!蛍光標識Spotタグ抗体)

[関連]Spot-tag 抗体(主にWB検出に!非標識製品)

[関連]Nano-Trap(ナノトラップ)一覧

◆◇ 国内在庫あります!最短翌日お届け、一次抗体通常サイズ ◇◆

プロテインテック社抗体全商品、国内在庫あります!

◆◇ お求めやすい¥29,000!タグ抗体・コントロール抗体 ◇◆

◆◇ ヒト細胞由来リコンビナントタンパク質 HumanKine® ◇◆

 HumanKine リコンビナントタンパク質

◆◇ 毒劇物非該当、冷蔵保管もできて便利!ELISAキットシリーズ ◇◆

Proteintech(プロテインテック)のELISAキット

◆◇ アルパカVHHの実績増えてます!ChromoTek®(クロモテック)製品 ◇◆

ChromoTek(クロモテック)抗体・関連製品

◆◇ 新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)研究用試薬も好評販売中! ◇◆

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

お問い合わせ


メーカー・代理店一覧

サポート情報

SNSアカウント

© COSMO BIO