血清、血漿中のコロナウイルスヌクレオカプシドタンパク質に対する総抗体を検出 ヒト Anti SARS-CoV-2 N protein トータル抗体（IgG and IgM）測定ELISAキット

ヒト血清、血漿中の ヒト Anti SARS-CoV-2 N protein トータル IgG+IgM 抗体（ヒトコロナウイルスNタンパク質 IgG+IgM 抗体）を半定量的に測定するELISAキット（IgG/IgMキャプチャーELISA法）です。

本キットは、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の原因となるSARSコロナウイルス2（SARS-CoV-2）における N protein（Nタンパク質/ヌクレオカプシドタンパク質）に対するヒト抗体（IgG+IgM）を測定します。抗ヒトIgGおよび抗ヒトIgM抗体コート済みの96ウェルプレート（ストリップウェルタイプ）、スタンダード、HRP標識Nタンパク質、バッファー類が付属します。

本商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

SARS-CoV-2 ヌクレオカプシド（N）タンパク質とは?

コロナウイルス（Coronaviruses）は、プラス鎖RNAゲノム（Positive-sense RNA genome）、らせん対称型のヌクレオカプシド（Nucleocapsid）を持つエンベロープウイルスです。コロナウイルスのNタンパク質/ヌクレオカプシドタンパク質（Nucleoproteins、Nucleocapsid protein、N protein）は、ウイルスに感染した初代培養細胞、およびNタンパク質を発現するプラスミドをトランスフェクトした細胞の両方おいて、細胞質および核小体（核内構造）に局在します。コロナウイルスのNタンパク質は、コロナウイルスのRNA合成に必要であり、鋳型スイッチ（template switch）に関与すると示唆されているRNAシャペロン活性を有します。Nタンパク質は、コロナウイルスで最も豊富なタンパク質です。ビリオン（ウイルス粒子）の形成過程で、Nタンパク質はウイルスRNAに結合し、らせん状ヌクレオカプシドを形成します。Nタンパク質は、免疫原性の高いリン酸化タンパク質であり、ウイルスゲノム複製や細胞内シグナル伝達経路の調節にも関与します。Nタンパク質は、配列保存性と免疫原性が高いため、コロナウイルスの診断ツールとして、Nタンパク質を選択して応用する研究が進められています。COVID-19抗体は、SARS-CoV-2への曝露後に宿主の免疫系によって産生されます。IgGおよびIgM抗体は、それぞれ免疫グロブリンG（イムノグロブリンG）および免疫グロブリンM（イムノグロブリンM）としても知られており、脊椎動物の免疫系によって産生される抗体アイソタイプの1つです。

■ 測定原理

本製品（品番：KE30005）は、ヒト血清および血漿中のヒト Anti SARS-CoV-2 N protein トータル IgG+IgM 抗体（ヒトコロナウイルスNタンパク質 IgG+IgM 抗体）を検出および測定するためのELISAキットです。キャプチャーELISA法を測定原理として利用しています。96ウェルプレートには、抗ヒトIgGおよび抗ヒトIgM抗体がコートされており、ヒト血清/血漿サンプルまたはスタンダード（標準液）をウェルに添加し、インキュベーションします。ウェルを洗浄後、HRP（ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ）で標識されたSARS-CoV-2 N protein 組換えタンパク質（リコンビナントタンパク質）を各ウェルに加えて『［抗ヒトIgGおよびIgM抗体］-［サンプル中のヒトIgGおよびIgM抗体］-［HRP標識SARS-CoV-2 N protein 組換えタンパク質］』複合体を形成させます。さらにウェルを洗浄後、TMB（テトラメチルベンジジン）試薬を加えて発色させます。硫酸を含む反応停止溶液を加えて発色を停止し、補正波長である630nm、および450nmのシグナルを測定します。抗ヒトIgGおよび抗ヒトIgM抗体によってキャプチャーされたヒト IgG+IgM 抗体の内、ヒト Anti-SARS-CoV-2 N protein IgG+IgM 抗体の総量に比例した色の強度を得ることができます。

図1　ヒト Anti SARS-CoV-2 N protein トータル抗体（IgG and IgM）測定ELISAキット（品番：KE30005）の原理

• ［関連］COVID-19（SARS-CoV-2）研究関連キット
  - 『Proteintech（プロテインテック）社 ELISAキットのご紹介』ページ内表へリンク

• 抗ヒトIgGおよび抗ヒトIgM抗体コート済み 96 well マイクロプレート（8 wells x 12 ストリップ）：1 plate
• 凍結乾燥スタンダード：1 bottle
• HRP標識SARS-CoV-2 N protein 組換えタンパク質（100X）- 120 µL/vial：1 vial
• サンプル希釈液 - 30 mL/bottle：2 bottles
• 検出抗体希釈液 - 30 mL/bottle：1 bottle
• 濃縮洗浄バッファー（20X）- 30 mL/bottle：1 bottle
• TMB 基質 - 12 mL/bottle：1 bottle
• 反応停止液 - 12 mL/bottle：1 bottle
• プレートカバーシール：2 pieces

［保存温度］：当社からは冷凍品（-20℃）としてお届けします。到着後は冷凍（-20℃）または冷蔵（4℃）で保管してください。
［有効期間］：キット有効期間（保証期間）は、商品到着後、冷凍（-20℃）条件下で12か月間、冷蔵（4℃）条件下で6か月間です。
［その他］：毒物及び劇物取締法、化管法に該当する危険有害成分は含まれておりません。なお、安衛法「表示、通知すべき有害物」に該当する9.8%硫酸を反応停止液（Stop Solution）中に含みます。

■ 測定手順

1. スタンダードまたはサンプルを100µL添加し、ウェルをカバーして、室温（25℃）で30分間インキュベーションします。
2. 洗浄を4回行います。
3. HRP標識SARS-CoV-2 N protein 組換えタンパク質（1x希釈）を100µL添加し、ウェルをカバーして、室温（25℃）で30分間インキュベーションします。
4. 洗浄を4回行います。
5. TMB基質を100µL添加し、ウェルをカバーして、室温（25℃）で10-15分間インキュベーションします。
6. 洗浄は行わず、反応停止液を100µL添加します。
7. 直ちに、プレートリーダーで450nmおよび630nmのシグナルを検出します。

図2　スタンダードカーブ

• ヒト Anti SARS-CoV-2 S-RBD protein トータル抗体（IgG and IgM）測定ELISAキット

• ヒト Anti-SARS-CoV-2 N protein IgG 抗体測定ELISAキット
• ヒト Anti-SARS-CoV-2 S-RBD protein IgG 抗体測定ELISAキット

• ヒト Anti-SARS-CoV-2 N protein IgM 抗体測定ELISAキット
• ヒト Anti-SARS-CoV-2 S-RBD protein IgM 抗体測定ELISAキット

• SARS-CoV-2 N protein 測定ELISAキット

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