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記事ID : 39406
研究用

免疫蛍光染色(IF)に最適!色素標識VHH抗体Nano-Booster®/Nano-Label®(ナノブースター&ナノラベル)

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Nano-Booster®(ナノブースター)またはNano-Label®(ナノラベル)は、免疫蛍光染色(IF:Immunofluorescence)実験に最適な蛍光色素標識済みのアルパカ由来VHH抗体です。

高浸透性&高親和性アルパカ組換えVHH免疫蛍光染色(IF)に最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図1. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図1. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図2. 従来の1/10ほどの分子量
図2. 従来の1/10ほどの分子量
 

■ Nano-Booster®/Nano-Label®とは?

Nano-Booster®(ナノブースター)およびNano-Label®(ナノラベル)は、蛍光タンパク質や細胞内タンパク質を標識する蛍光プローブです。蛍光色素(Alexa Fluor®またはAtto色素)に共有結合したVHH抗体で構成されます。

■ Nano-Booster®/Nano-Label®のアプリケーション

  • IF(免疫蛍光染色)/ ICC(免疫細胞化学)
  • IHC(免疫組織化学)
  • 超解像顕微鏡観察(SRM:Super-resolution microscopy)

■ Nano-Booster®/Nano-Label®の標的タンパク質

  • GFP-Booster®およびRFP-Booster®は、蛍光タンパク質のシグナルを増強します。
  • Histone-Label®およびVimentin-Label®は、ヒストンおよびビメンチンタンパク質を蛍光標識します。
  • Spot-Label®は、12アミノ酸からなるペプチドタグであるSpot-Tagを蛍光標識します。
図3. Nano-Booster®の概要。GFP/RFP融合タンパク質の蛍光シグナルは、細胞固定後に減少します。GFP/RFP-Booster®は、蛍光シグナルの増幅に利用できます
図3. Nano-Booster®の概要。GFP/RFP融合タンパク質の蛍光シグナルは、細胞固定後に減少します。GFP/RFP-Booster®は、蛍光シグナルの増幅に利用できます。

特長

  • 高い解像度、高い標識率
  • 高い浸透性、エピトープへの優れたアクセス性能
  • 小サイズ(2nm)であり、従来の抗体よりもエピトープの近位を蛍光標識
  • 蛍光シグナルの安定化、増強、再活性化
図4. Nano-Booster/Nano-Label(蛍光標識ナノ抗体)と一次抗体/二次抗体(一般的なIgG)複合体のサイズ比較
図4. Nano-Booster/Nano-Label(蛍光標識ナノ抗体)と一次抗体/二次抗体(一般的なIgG)複合体のサイズ比較

よくある質問 FAQ

【01】超解像顕微鏡法に使用できますか?

はい、Nano-BoosterおよびNano-Labelは超解像顕微鏡法に最適です。小サイズ(2~3 nm)であるため、結合誤差が最小限に抑えられ、従来の抗体(直線寸法:15 nm)よりも正確で高密度の染色が可能です。Nano-BoosterまたはNano-Labelの蛍光色素の選択は、顕微鏡のセットアップとレーザーによって異なります。以下をおすすめします。

  • STED:ATTO647N、Abberior STAR 635P
  • STORM:Alexa Fluor® 647、ATTO488
  • SIM:ATTO488/594

【02】生細胞イメージングに使用できますか?

はい、細胞表面に融合タンパク質が発現している場合に使用可能です。
Nano-BoosterとNano-Labelはタンパク質であり、透過処理されていない細胞膜は透過しません。したがって、融合タンパク質が細胞内にある場合は、エレクトロポレーション等のタンパク質導入法やタンパク質導入試薬の使用が必要です。旧クロモテック社の経験上、最も効率的な方法はマイクロインジェクション法です。

【03】2つ以上のターゲットを同時染色できますか?

はい、Nano-BoosterまたはNano-Labelを2つ以上組み合わせて使用できます。
例えば、通常1:200希釈でNano-Boosterを使用する場合、200 µLのブロッキング溶液に、ATTO488標識GFPモノクローナル抗体(品番:gba488-10/-100)とATTO594標識RFPモノクローナル抗体(品番:rba594-10/-100)をそれぞれ1 µLずつ添加します。

【04】いくつの蛍光色素分子が結合していますか?

各Nano-BoosterまたはNano-Label分子は、平均して1~2個の蛍光色素分子を有します。Alexa Fluor®蛍光色素標識Nano-Boosterは、部位特異的方法によって、VHHあたり合計2つの蛍光色素が標識されています。Atto647N蛍光色素標識Nano-Boosterは、VHHあたり最大1つの蛍光色素がC末端に標識されています。

【05】GFP-BoosterとRFP-Boosterを組み合わせて2色超解像顕微鏡法に利用できますか?

はい、dual-color STORMによる使用報告があります[PMID: 25099357 外部リンク25806422 外部リンク]。

【06】メタノール固定サンプルで使用できますか?

はい、Nano-Boosterを用いた染色は、一般的なパラホルムアルデヒド(PFA)、グルタルアルデヒド、メタノール固定後も良好に機能します[PMID: 26068895 外部リンク22543348 外部リンク]。

【07】細胞外融合タンパク質の生細胞染色プロトコールを教えてください。

増殖培地中で1:25希釈のNano-Booster/Nano-Labelを細胞と4℃、15分間インキュベートして、洗浄後、画像化します。

【08】生細胞の細胞膜を透過しますか?

いいえ、透過処理されていない細胞膜は透過しません。

【09】他の蛍光色素に結合させることは可能ですか?

はい、未標識VHH抗体(抗GFP組換えVHH/品番:gt-250、抗RFP組換えVHH/品番:rt-250、抗Spot-tag組換えVHH/品番:etb-250)を利用できます。NHS活性化蛍光色素を選択して、色素メーカーのマニュアルに従って標識してください。
(注:抗Spot-tag組換えVHHは、C末端にSortase-tag(sortase認識モチーフ:LPETG)が付加されており、標識に使用できます。)

【10】酵母サンプルの免疫蛍光染色(IF)に使用できますか?

はい、Nano-BoosterまたはNano-Labelは小サイズであるため、酵母の細胞壁に浸透しやすく、従来型抗体(IgG)を利用した場合よりも容易です。Nano-Booster(GFP VHH)を用いて最適化された酵母染色プロトコールは文献を参照してください[PMID: 26068895 外部リンク]。

製品一覧

■ Nano-Booster®/Nano-Label®(ナノブースター&ナノラベル)
品名 標識 免疫動物 アプリケーション 特異性・交差性
(クリックで詳細ページへ)
品番
GFP-Booster
(蛍光GFP抗体)
  Alexa Fluor® 488 Alpaca IF, ICC, IHC AcGFP, Citrine, CFP, eGFP, eYFP, GFP S65T,pHluorin, sfGFP, mClover (Clover A206K),TagGFP, tagGFP2, Venus, wtGFP, YFP gb2AF488-10/-50
  Alexa Fluor® 568 gb2AF568-10/-50
  Alexa Fluor® 647 gb2AF647-10/-50
  ATTO 488 gba488-10/-100
  ATTO 594 gba594-10/-100
  ATTO 647N gba647n-10/-100
RFP-Booster
(蛍光RFP抗体)
  Alexa Fluor® 568 Alpaca IF, ICC, IHC mCherry, mPlum, mRFP, mRFPruby rb2AF568-10/-50
  Alexa Fluor® 647 rb2AF647-10/-50
  ATTO 594 rba594-10/-100
  ATTO 647N rba647n-10/-100
Histone-Label
(蛍光ヒストン抗体)
  ATTO 488 Alpaca IF, ICC ヒストンH2A-H2Bヘテロダイマー tba488-10/-100
Vimentin-Label
(蛍光ビメンチン抗体)
  ATTO 488 Alpaca IF, ICC ビメンチン vba488-10/-100
Spot-Label
(蛍光Spot抗体)
  Alexa Fluor® 488 Alpaca IF, WB Spot-Tag(配列:PDRVRAVSHWSS) ebAF488-10/-50
  Alexa Fluor® 568 ebAF568-10/-50
  Alexa Fluor® 647 ebAF647-10/-50
  ATTO 488 eba488-10/-100
  ATTO 594 eba594-10/-100

Nano-Booster®/Nano-Label®

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 488詳細データ PGI GB2AF488-10 10 UL
¥32,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 488詳細データ PGI GB2AF488-50 50 UL
¥71,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI GB2AF568-10 10 UL
¥32,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI GB2AF568-50 50 UL
¥71,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI GB2AF647-10 10 UL
¥32,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI GB2AF647-50 50 UL
¥71,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI GBA488-10 10 UL
¥18,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI GBA488-100 100 UL
¥65,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI GBA594-10 10 UL
¥18,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI GBA594-100 100 UL
¥65,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI GBA647N-10 10 UL
¥21,000
Anti GFP, GFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI GBA647N-100 100 UL
¥71,000
Anti Histone, Histone-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI TBA488-10 10 UL
¥18,000
Anti Histone, Histone-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI TBA488-100 100 UL
¥65,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI RB2AF568-10 10 UL
¥32,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI RB2AF568-50 50 UL
¥71,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI RB2AF647-10 10 UL
¥32,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI RB2AF647-50 50 UL
¥71,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI RBA594-10 10 UL
¥18,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI RBA594-100 100 UL
¥65,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI RBA647N-10 10 UL
¥21,000
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI RBA647N-100 100 UL
¥71,000
Anti Vimentin, Vimentin-Label (formerly Vimentin-Booster), recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI VBA488-10 10 UL
¥18,000
Anti Vimentin, Vimentin-Label (formerly Vimentin-Booster), recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI VBA488-100 100 UL
¥65,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 488詳細データ PGI EBAF488-10 10 UL
¥32,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 488詳細データ PGI EBAF488-50 50 UL
¥71,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI EBAF568-10 10 UL
¥32,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI EBAF568-50 50 UL
¥71,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI EBAF647-10 10 UL
¥32,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI EBAF647-50 50 UL
¥71,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI EBA488-10 10 UL
¥18,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 488詳細データ PGI EBA488-50 50 UL
¥71,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI EBA594-10 10 UL
¥18,000
Anti Spot, Spot-Label, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI EBA594-50 50 UL
¥71,000

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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