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記事ID : 41834
研究用

シグナル増幅に!免疫細胞染色に最適、Nano-Booster® シリーズRFP-Booster®(蛍光標識RFP抗体)

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RFP-Booster®(RFPブースター®)は、RFPタンパク質の免疫蛍光染色(IF:Immunofluorescence)実験に最適な蛍光色素標識済みのアルパカ由来RFP抗体です。

蛍光色素には、アルパカ(Alpaca)を宿主動物(免疫動物)として作製された「抗RFP組換えモノクローナルVHH抗体」が結合しています。VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。VHH抗体は、一般的の抗体よりもサイズが小さく浸透性が高いため、細胞染色に最適です。

高浸透性&高親和性アルパカ組換えVHH免疫蛍光染色(IF)に最適

背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体(Heavy chain-only antibody)」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH
図. 従来の1/10ほどの分子量
図. 従来の1/10ほどの分子量
 

■ NanoBooster®/NanoLabel®とは?

Nano-Booster®(ナノブースター)およびNano-Label®(ナノラベル)は、蛍光タンパク質や細胞内タンパク質を標識する蛍光プローブです。蛍光色素(Alexa Fluor®またはAtto色素)に共有結合したVHH抗体で構成されます。抗体サイズが小さいため、高浸透性かつ高解像なイメージングに寄与し、免疫蛍光染色(IF)を中心としたアプリケーションに利用できます。

  • IF(免疫蛍光染色)/ ICC(免疫細胞化学)
  • IHC(免疫組織化学)
  • 超解像顕微鏡観察(SRM:Super-resolution microscopy)
図. Nano-Booster®の概要。GFP/RFP融合タンパク質の蛍光シグナルは、細胞固定後に減少します。GFP/RFP-Booster®は、蛍光シグナルの増幅に利用できます
図. Nano-Booster®の概要。
GFP/RFP融合タンパク質の蛍光シグナルは、細胞固定後に減少します。蛍光シグナルの増幅にGFP/RFP-Booster®を利用できます。

■ Proteintech Group(プロテインテック)とは?

Proteintech Group, Inc.(プロテインテック)社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン(www.ptglab.co.jp 外部リンク)が担当しています。

  • 全てオリジナル商品:自社ラボで製造、検証済み(購入後1年間の交換保証付き)
  • 数多くの評判:国内・海外における累計50,000報以上の論文使用実績(2021年7月現在)
  • 迅速な納期:約12,000品目を当社倉庫に国内在庫!

プロテインテックグループにChromoTek(クロモテック)が加わりました!

主に『アルパカ抗体(組換えVHH)』の製造を行う旧ChromoTek (クロモテック、ドイツ)社は、2020年10月よりProteintech Group(プロテインテック 、米国)ブランドの一部になりました。緑色蛍光タンパク質(GFP)の免疫沈降(IP)実験で1,700報以上の文献実績を有する GFP-Trap® をはじめ、アルパカ由来の組換えVHH抗体は、高い親和性、特異性、および安定性を発揮します。

旧ChromoTek社製品はプロテインテックがお届けします
旧ChromoTek社製品の価格は、プロテインテック社ホームページ(https://www.ptglab.co.jp/products/chromotek-nanobody-based-reagents/ 外部リンク)をご覧ください。

特長

■ RFP-Booster®(蛍光標識RFP抗体)
商品名RFP-Booster®(RFPブースター®)
(Nano-Booster® alpaca anti-RFP, recombinant VHH, coupled to ATTO488)
(蛍光標識アルパカ由来抗RFPナノ抗体)
品番rb2AF568-10/-50, rb2AF647-10/-50, rba594-10/-100, rba647n-10/-100 外部リンク
免疫原RFP
交差種-
特異性
mCherry, mPlum, mRFP, mRFPruby
アプリケーションIF(免疫蛍光染色)、ICC(免疫細胞化学)、IHC(免疫組織化学)
標識ATTO488
宿主動物/免疫動物アルパカ(組換えモノクローナルVHH抗体)
クローン番号-
抗体タイプアルパカ由来シングルドメイン一価抗体
(Alpaca single domain antibodies, monovalent)
検証済みサンプルValidated in cell culture & cell lines, tissue sections, yeast, fly, zebrafish, mouse, in germline of Caenorhabditis elegans, in Drosophila melanogaster embryos and cleared whole mouse Fixed cultured cells: formaldehyde, methanol or glutaraldehyde fixation Tissue sections:cryosections, FFPE paraffin sections Whole specimen: cleared mouse
適合顕微鏡例Wide-field or epifluorescence microscopy; confocal microscopy; super-resolution microscopy e.g. 3D-SIM, PALM, STED, STORM, light sheet microscopy
抗体親和性(KD値)Dissociation constant KD of 5 nM
フォーマット液体
容量10µL/100µL(for Atto)
(Because of the small size of the VHH these volumes correspond to about 10 times the volume of conventional IgG antibodies.)
タンパク質濃度0.5 - 1 mg/mL (conjugates)
参考希釈倍率IF/ICC/IHC: 1:200 Optimal working concentration is application-dependent and should be determined by testing a range of dilutions from 1:50 to 1:1,600
別名Recombinant, monoclonal anti-Red Fluorescent Protein (RFP) single domain antibody (sdAb) fragment
バッファー・保存剤Purified recombinant protein in PBS supplemented with preservative 0.09 % sodium azide
保存方法
  • ATTO蛍光色素標識抗体は4℃、Alexa Fluor蛍光色素標識抗体は-20℃で遮光して保管してください。
  • ATTO蛍光色素標識抗体は凍結しないよう注意してください。

その他

■ RFP-Booster® アプリケーション参考資料

よくある質問 FAQ

【01】超解像顕微鏡法に使用できますか?

はい、Nano-BoosterおよびNano-Labelは超解像顕微鏡法に最適です。小サイズ(2~3 nm)であるため、結合誤差が最小限に抑えられ、従来の抗体(直線寸法:15 nm)よりも正確で高密度の染色が可能です。Nano-BoosterまたはNano-Labelの蛍光色素の選択は、顕微鏡のセットアップとレーザーによって異なります。以下をおすすめします。

  • STED:ATTO647N、Abberior STAR 635P
  • STORM:Alexa Fluor® 647、ATTO488
  • SIM:ATTO488/594

【02】生細胞イメージングに使用できますか?

はい、細胞表面に融合タンパク質が発現している場合に使用可能です。
Nano-BoosterとNano-Labelはタンパク質であり、透過処理されていない細胞膜は透過しません。したがって、融合タンパク質が細胞内にある場合は、エレクトロポレーション等のタンパク質導入法やタンパク質導入試薬の使用が必要です。旧クロモテック社の経験上、最も効率的な方法はマイクロインジェクション法です。

【03】2つ以上のターゲットを同時染色できますか?

はい、Nano-BoosterまたはNano-Labelを2つ以上組み合わせて使用できます。
例えば、通常1:200希釈でNano-Boosterを使用する場合、200 µLのブロッキング溶液に、ATTO488標識GFPモノクローナル抗体(品番:gba488-10/-100)とATTO594標識RFPモノクローナル抗体(品番:rba594-10/-100)をそれぞれ1 µLずつ添加します。

【04】いくつの蛍光色素分子が結合していますか?

各Nano-BoosterまたはNano-Label分子は、平均して1~2個の蛍光色素分子を有します。Alexa Fluor®蛍光色素標識Nano-Boosterは、部位特異的方法によって、VHHあたり合計2つの蛍光色素が標識されています。Atto647N蛍光色素標識Nano-Boosterは、VHHあたり最大1つの蛍光色素がC末端に標識されています。

【05】GFP-BoosterとRFP-Boosterを組み合わせて2色超解像顕微鏡法に利用できますか?

はい、dual-color STORMによる使用報告があります[PMID: 25099357 外部リンク25806422 外部リンク]。

【06】細胞外融合タンパク質の生細胞染色プロトコールを教えてください。

増殖培地中で1:25希釈のNano-Booster/Nano-Labelを細胞と4℃、15分間インキュベートして、洗浄後、画像化します。

【07】生細胞の細胞膜を透過しますか?

いいえ、透過処理されていない細胞膜は透過しません。

【08】他の蛍光色素に結合させることは可能ですか?

はい、未標識VHH抗体(抗GFP組換えVHH/品番:gt-250、抗RFP組換えVHH/品番:rt-250、抗Spot-tag組換えVHH/品番:etb-250)を利用できます。NHS活性化蛍光色素を選択して、色素メーカーのマニュアルに従って標識してください。
(注:抗Spot-tag組換えVHHは、C末端にSortase-tag(sortase認識モチーフ:LPETG)が付加されており、標識に使用できます。)

【09】酵母サンプルの免疫蛍光染色(IF)に使用できますか?

はい、Nano-BoosterまたはNano-Labelは小サイズであるため、酵母の細胞壁に浸透しやすく、従来型抗体(IgG)を利用した場合よりも容易です。Nano-Booster(GFP VHH)を用いて最適化された酵母染色プロトコールは文献を参照してください[PMID: 26068895 外部リンク]。

【10】赤色蛍光タンパク質 tdTomato を認識しますか?

いいえ、認識しません。RFP-Boosterは、mCherry、mPlum、mRFP、mRFPrubyを認識します。
以下の資料を参照してください。

使用例

■ RFP-Booster®(蛍光標識RFP抗体)

HeLa cells transiently transfected with PCNA-mRFP and Tom70-eGFP were subjected to one-step immunostaining with RFP-Booster Alexa Fluor 568 (red) and GFP-Booster Alexa Fluor 488 (green). Scale bar, 10 µm. Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.
図1
HeLa cells transiently transfected with PCNA-mRFP and Tom70-eGFP were subjected to one-step immunostaining with RFP-Booster Alexa Fluor 568 (red) and GFP-Booster Alexa Fluor 488 (green). Scale bar, 10 µm. Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.
Confocal images of HeLa cells transiently transfected with LC3B-mCherry (red) and immunostained with RFP-Booster Alexa Fluor647 (magenta). Nuclei were stained with DAPI (blue). Scale bar, 10 µm. Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.
図2
Confocal images of HeLa cells transiently transfected with LC3B-mCherry (red) and immunostained with RFP-Booster Alexa Fluor647 (magenta). Nuclei were stained with DAPI (blue). Scale bar, 10 µm. Images were recorded at the Core Facility Bioimaging at the Biomedical Center, LMU Munich.
 
Immunostaining of HeLa cells stably expressing H2B-RFP (red) with RFP-Booster (lilac). Nuclei are stained with DAPI (blue). Scale bar 10µm.
図3
Immunostaining of HeLa cells stably expressing H2B-RFP (red) with RFP-Booster (lilac). Nuclei are stained with DAPI (blue). Scale bar 10µm.
Enhancement of RFP signal with RFP-Booster_Atto594. Comparison of signal intensity of a cell line stably expressing a nuclear RFP-fusion protein before and after RFP-Booster treatment. Microscope: InCell1000
図4
Enhancement of RFP signal with RFP-Booster_Atto594. Comparison of signal intensity of a cell line stably expressing a nuclear RFP-fusion protein before and after RFP-Booster treatment. Microscope: InCell1000
 
RFP-Booster specifically labels RFP-fusion proteins. HeLa cells expressing mRFP-PCNA, fixed and permeablilized. Specific staining of mid replication foci with RFP-Booster.
図5
RFP-Booster specifically labels RFP-fusion proteins. HeLa cells expressing mRFP-PCNA, fixed and permeablilized. Specific staining of mid replication foci with RFP-Booster.
 

RFP-Booster®(蛍光標識RFP抗体)

• Alexa Fluor® 568標識モノクローナル抗体(組換えVHH抗体)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI RB2AF568-10 10 UL
¥25,600(キャンペーン中)
¥32,000(通常希望販売価格)
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 568詳細データ PGI RB2AF568-50 50 UL
¥56,800(キャンペーン中)
¥71,000(通常希望販売価格)

• Alexa Fluor® 647標識モノクローナル抗体(組換えVHH抗体)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI RB2AF647-10 10 UL
¥25,600(キャンペーン中)
¥32,000(通常希望販売価格)
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) Alexa FluorTM 647詳細データ PGI RB2AF647-50 50 UL
¥56,800(キャンペーン中)
¥71,000(通常希望販売価格)

• ATTO594標識モノクローナル抗体(組換えVHH抗体)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI RBA594-10 10 UL
¥14,400(キャンペーン中)
¥18,000(通常希望販売価格)
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 594詳細データ PGI RBA594-100 100 UL
¥52,000(キャンペーン中)
¥65,000(通常希望販売価格)

• ATTO647N標識モノクローナル抗体(組換えVHH抗体)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI RBA647N-10 10 UL
¥16,800(キャンペーン中)
¥21,000(通常希望販売価格)
Anti RFP, RFP-Booster, recombinant VHH (Alpaca) ATTO 647N詳細データ PGI RBA647N-100 100 UL
¥56,800(キャンペーン中)
¥71,000(通常希望販売価格)

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