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GFP-Trap® Multiwell Plate（GFPトラップ®マルチウェルプレート）は、GFPタンパク質のハイスループットな免疫沈降実験（IP：Immunoprecipitation）およびサンドイッチELISA検出に最適なGFP抗体コーティングプレートです。
96ウェルプレートには、アルパカ（Alpaca）を宿主動物（免疫動物）として作製された「抗GFP組換えモノクローナルVHH抗体」がビオチン-ストレプトアビジンを介して固相化されています。VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。
GFPとは、緑色蛍光タンパク質（Green Fluorescent Protein）を表す略語であり、1962年に下村脩（しもむら おさむ）博士によって初めて単離された「蛍光タンパク質（Fluorescent Protein）」です。蛍光タンパク質とは、特定の波長の光に暴露して励起すると、蛍光を発するタンパク質のことを指します。GFPは、緑色の蛍光を発するという特性を示し、in vitroおよびin vivoで発現させることでほぼ全てのタンパク質のイメージングを実現し、遺伝子の転写研究におけるレポーター遺伝子や生化学的アプリケーションに利用されています。例えば、その蛍光特性を利用して「蛍光タンパク質タグ」として応用することで、GFPを発現させた細胞や、目的タンパク質に融合して発現させたGFPを検出および追跡することが可能になります。また、GFPタグは、生化学的アプリケーション（免疫沈降（IP）、タンパク質精製）における抗体認識部位としても利用されます。
VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。
Nano-Trap（ナノトラップ）は、迅速かつ効率的な免疫沈降（IP）に最適です。各種担体（アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ）に結合したVHH抗体で構成されます。
各種ビーズ上に結合したVHH抗体は、ビーズ上に残存し、SDSサンプルバッファー中で溶出されません。したがって、従来のIP解析でしばしば問題となるIP抗体由来の軽鎖または重鎖バンドの干渉が無く、シングルバンドの精製を可能とします。さらに、ウエスタンブロットに使用する一次抗体/二次抗体を自由に選択できます。
Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp 
）が担当しています。
プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。
また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。
GFP-Trap®Multiwell Plateは、「抗GFP組換えモノクローナルVHH抗体」を固定化した96ウェルプレートです。
「抗GFP組換えモノクローナルVHH抗体」は、予めビオチン標識され、ストレプトアビジン（ビオチン結合タンパク質）コートプレートにコーティングされています。GFPタンパク質のハイスループットな免疫沈降（IP）およびサンドイッチELISA検出に利用できます。
| 商品名 | GFP-Trap® Multiwell Plate |
|---|---|
| 品番 | gtp-96 |
| 免疫原 | GFP |
| 交差種 | - |
| 特異性 | - AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy, GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP A206K- CFP- YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet- BFP
|
| アプリケーション | IP（免疫沈降）、CoIP（共免疫沈降）、ELISA |
| 標識 | - |
| 宿主動物/免疫動物 | アルパカ（組換えモノクローナルVHH抗体） |
| クローン番号 | - |
| 抗体タイプ | アルパカ由来シングルドメイン一価抗体 （Alpaca single domain antibodies, monovalent） |
| 抗体親和性（KD値） | Dissociation constant KD of 1 pM |
| 結合キャパシティ | 200-500 ng of recombinant GFP per well |
| プレートタイプ | 96 multiwell plate, polystyrene, transparent, solid F-bottom (flat) |
| フォーマット | Immobilized in 96 multiwell plate (polystyrene, transparent), pre-blocked with BSA and Casein hydrolysate, lyophilized, Volume per well: 200 µL |
| 洗浄バッファー適合性 | 10 mM DTT, 10 mM β-mercaptoethanol, 10 mM TCEP, 4 M Urea, 2 M NaCl, 2 % Nonidet P40 Substitute, 0.2 % SDS, 2 % Triton X-100 |
| 溶出方法 | SDS sample buffer, - 0.2 M glycine pH 2.5, Instead of elution, we recommend on-bead assays like on-bead digestion for MS analysis. |
| 別名 | Anti-GFP single domain antibody （VHH, Nanobody） |
| バッファー・保存剤 | - |
| 保存方法 |
|
アルパカ由来の組換えVHH抗体は、高い親和性、特異性、安定性を発揮します。実績多数のGFP-Trap®（IP用）やGFP-Booster®（IF用）に使用されているVHH抗体は、ピコモラー（pM）レベルのKD値であり、特に高い親和性を示します。
はい、GFP-Trap®は、目的タンパク質のC末端に融合したGFPタグに対してわずかに高い親和性を示します。なお、この違いはインキュベーション時間を延長することで補うことができます（15~30分から1~2時間に延長）。
溶出可能な場合もありますが、お試しいただくしかありません。なお、この方法では目的のGFP融合タンパク質を定量的に溶出できないと考えられます。
いいえ、GFP-Trap®はTurboGFPに結合しません。TurboGFPの免疫沈降にはTurboGFP-Trap®を使用してください。TurboGFP は、カイアシ類（Pontellina plumata）のCopGFP（ppluGFP2） に由来する緑色蛍光タンパク質です。一方、1992年に初めてクローニングされたGFP（avGFP） は、オワンクラゲ（Aequorea Victoria）に由来します。オワンクラゲに由来する一般的なGFPバリアントとTurbo-GFP間では約20％程度の相同性しか示しません。
はい、原理的にGFP-Trap®は、過酷な緩衝液条件（0.1％SDSや1M 尿素を含有する緩衝液、例. RIPAバッファー）で非常に安定です。
いいえ、GFP-Trap®で使用されているVHH抗体は、ヤギ、マウス、ラットまたはヒト抗体と相同性が異なるため、二次抗体との非特異的な交差反応を生じません。
GFP-Trap® AgaroseおよびGFP-Trap® Magnetic Agaroseは、10 µL（Nano-Trap slurry量）あたり約10~12 µgのGFPに結合します。GFP-Trap® Magnetic Particles M-270は、10 µL（Nano-Trap slurry量）あたり約1 µgのGFPに結合します。
分子量：13.9 kDa、吸光係数：27055 M-1 cm-1です。
必要に応じて、サンプルの「プレクリア処理（Pre-clearing）」を実施してください。その際、コントロールアガロース（品番：bab-20）またはコントロール磁性アガロース（品番：bmab-20）を利用できます。詳細は以下のトラブルシューティングガイドをご覧ください。
0.2 M glycine（pH 2.5）を利用して室温条件で溶出できます。ビーズを60~120秒間ピペッティングし、この手順を繰り返します。1 M Tris base（pH 10.4）を直後に添加して上清を中和してください。
1回の免疫沈降反応で約10^6~10^7の哺乳類細胞の使用をおすすめします。収量は目的のタンパク質や相互作用因子の発現レベルに依存する場合があります。
哺乳類細胞以外の場合、0.5~1.0mgの細胞抽出物の使用をおすすめします。
免疫沈降後にビーズ上で直接消化する方法も利用可能です。より迅速で効率的なサンプル前処理と高収率を実現します。詳細は以下の資料をご覧ください。
いいえ、活性中心がブロックされていない限り、直接酵素アッセイが可能です。詳細は以下の資料をご覧ください。
一般的に重鎖抗体は高い親和性を有します。解離定数（Kd値）は、低ナノモラー（nM）からピコモラー（pM）レベルの範囲です。旧クロモテック社は以下のKd値を決定しました。
* Kinetic parameterは、Dynamic Biosensors社（www.dynamic-biosensors.com ）の独自技術であるswitchSENSE®法を利用して測定しました。
親和性が非常に高いため、1回の反応あたり25 µL（Nano-Trap slurry量）で十分です。
各ビーズの特性（表1）に基づいて以下のように推奨します。
| GFP-Trap® 結合担体 | アガロース | 磁性アガロース | 磁気ビーズ |
|---|---|---|---|
| ビーズ詳細 | アガロース （4% cross-linked） |
磁性アガロース （6% cross-linked） |
磁気ビーズ M-270 |
| ビーズ形状 | 多孔質 | 多孔質、鉄コア | 固体 |
| 結合抗体 | 抗GFP組換えモノクローナルVHH抗体 | ||
| 分離可能なタンパク質サイズ* | 小〜大（<200 kDa） | 小〜大（<200 kDa） 特大（>200 kDa） |
|
| ビーズ外観 | 白 | 黒 | 茶 |
| ビーズサイズ | 90 µm | 40 µm | 2.8 µm |
| 結合能 （10 µLあたり） |
12 µg | 8 µg | 1 µg |
| バックグラウンド | 非常に低い | 低い | |
| 磁気分離/自動化 | No | Yes | |
| 最大遠心力（x g） | 2,500 x g | 800 x g | 8,000 x g |
*タンパク質のサイズ、形状、多量体/複合体、相互作用因子に依存します。
いいえ、使用している磁気ビーズ（Magnetic Particles M-270）はバックグラウンドタンパク質に対する非特異的結合が極めて低い、不活性な磁気ビーズです。したがって、VHH抗体が結合していない磁気ビーズを用いた「プレクリア処理」は必要ありません。GFP-Trap® Magnetic Particles M-270（磁気ビーズ標識GFP抗体）への非特異的結合を検証する場合には、GFP融合タンパク質を含まない細胞溶解物をコントロールに用意して、同様に免疫沈降（IP）を行ってください。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
Anti GFP, GFP-Trap(R) Multiwell Plate, recombinant VHH (Alpaca)  |
PGI | GTP-96 | 96 RXN [1 plate] |
￥60,000 |
■ 組換えタンパク質（各アプリケーションのコントロール等に使用できます。）
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| Enhanced Green Fluorescent Protein EGFP, purified protein |
PGI | EGFP-250 | 250 UG [1mg/ml] |
￥59,000 |
好評
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
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