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免疫沈降（IP）で豊富な実績！高い特異性と親和性、Nano-Trap シリーズ Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）

メーカー名：Proteintech Group, Inc.

Halo-Trap® Agarose beads（Haloトラップ®アガロース）は、Halo-Tag（Haloタグ、HaloTag®）タンパク質の免疫沈降（IP：Immunoprecipitation）実験に最適なアガロースビーズ担体結合済みのHalo抗体です。

アガロースビーズ（agarose beads）には、アルパカ（Alpaca）を宿主動物（免疫動物）として作製された「抗Halo組換えモノクローナルVHH抗体」が結合しています。VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。

高親和性&高特異性アルパカ組換えVHH免疫沈降（IP）に最適

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背景

Haloタグ（HaloTag®）とは?

Haloタグ（HaloTag®）とは、Rhodococcus rhodochrous（ロドコッカス・ロドクラウス）のハロアルカンデハロゲナーゼ（haloalkane dehalogenase）をコードするDhaA遺伝子に由来する、297アミノ酸残基（約33kDa）からなるタンパク質タグです。Haloタグは、外因的に添加される合成リガンド（基質）と共有結合を触媒する「自己標識化タンパク質タグ（self-labeling protein tag）」として知られており、蛍光色素等で標識された「クロロアルカン（chloroalkane）」基質を含むリンカーをリガンドに利用して、不可逆的に結合させることができます。Haloタグは、研究対象とするタンパク質と融合させることで、融合タンパク質の細胞内解析や生化学的解析に利用できます。また、Haloタグは生細胞イメージングでも有用であることが報告されています［PMID：30745239 外部リンク］。Haloタグは、一度リガンドと複合体を形成すると、触媒中心が塞がれるため、それ以降に他のリガンドは結合することができなくなります。したがって、リガンド結合後のHaloタグ融合タンパク質の検出や免疫沈降（IP）を実施する場合は、リガンドの代わりに、塞がれた触媒中心の外部領域に結合する抗体やVHH抗体（別名：Nanobody®）が使用されます。

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH

図. 従来の1/10ほどの分子量

ChromoTek（クロモテック）抗体・関連製品

■ Nano-Trapとは?

Nano-Trap（ナノトラップ）は、迅速かつ効率的な免疫沈降（IP）に最適です。各種担体（アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ）に結合したVHH抗体で構成されます。

各種ビーズ上に結合したVHH抗体は、ビーズ上に残存し、SDSサンプルバッファー中で溶出されません。したがって、従来のIP解析でしばしば問題となるIP抗体由来の軽鎖または重鎖バンドの干渉が無く、シングルバンドの精製を可能とします。さらに、ウエスタンブロットに使用する一次抗体/二次抗体を自由に選択できます。

Nano-Trap（ナノトラップ）

■ Nano-Trapのアプリケーション

IP（免疫沈降）/ CoIP（共免疫沈降）
ChIP（クロマチン免疫沈降）/ RIP（RNA免疫沈降）
質量分析（Mass spectrometry）
On-bead enzyme assay

［参考資料］免疫沈降（IP）と共免疫沈降（Co-IP）のトラブルシューティングガイド

図. Nano-Trap（左）と従来型であるProtein A/G結合IgG抗体（右）を用いた免疫沈降の概要。Nano-Trapでは、単一のバンドを得られ、従来型とは異なり軽鎖/重鎖由来のバンドは観察されません。

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp 外部リンク）が担当しています。

全てオリジナル商品：自社ラボで製造、検証済み（購入後1年間の交換保証付き）
数多くの評判：国内・海外における累計104,300報以上の論文使用実績（2024年4月現在）
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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

ProteintechとChromoTekは2022 CiteAb Awardsで表彰されました

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 外部リンク」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）外部リンク」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ

サイトカイン・増殖因子外部リンク

ChromoTek 試薬外部リンク

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特長

■ Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）
商品名	Halo-Trap® Agarose beads（Haloトラップ®アガロース）（Nano-Trap alpaca anti-Halo, recombinant VHH, coupled to agarose beads）（アガロースビーズ標識アルパカ由来抗Haloナノ抗体）
品番	ota-10/ota-20/ota-100/ota-200/ota-400
免疫原	Halo
交差種	-
特異性	Halo-tag
アプリケーション	IP（免疫沈降）、CoIP（共免疫沈降）、ChIP（クロマチン免疫沈降）、RIP（RNA免疫沈降）
標識	アガロースビーズ（Agarose Beads）
宿主動物/免疫動物	アルパカ（組換えモノクローナルVHH抗体）
クローン番号	-
抗体タイプ	アルパカ由来シングルドメイン一価抗体（Alpaca single domain antibodies, monovalent）
抗体親和性（KD値）	Dissociation constant KD of 2 nM
結合キャパシティ	7.5-10 µg of recombinant Halo-tag per 25 µL bead slurry
容量	250 µL (10 reactions)/500 µL (20 reactions)/2.5 mL (100 reactions)/5 mL (200 reactions)/10 mL (400 reactions)
フォーマット	液体（slurry）
ビーズ詳細	Bead size: ~ 90 µm (cross-linked 4 % agarose beads)
洗浄バッファー適合性	4 M urea, 1 M NaCl, 10 mM DTT, 2 % Nonidet P40 Substitute, 1 % Triton X-100
溶出方法	- SDS sample buffer - 0.1 mM citric acid pH 3.0 Instead of elution, we recommend on-bead assays like on-bead digestion for MS analysis.
別名	Recombinant, monoclonal anti-Halo single domain antibody (sdAb) fragment
バッファー・保存剤	20 % EtOH
保存方法	商品到着後は、4℃で保管してください。凍結はしないよう注意してください（凍結禁止）。

その他

■ Halo-Trap® Agarose アプリケーション参考資料

［プロトコール］Halo-Trap® Agarose
［プロトコール］Halo-Trap® Agarose Kit

よくある質問 FAQ

【01】N末端とC末端融合タグはどちらも機能しますか?

はい、N末端とC末端融合タグのどちらも機能します。

【02】非特異的タンパク質の結合を回避する方法はありますか?

必要に応じて、サンプルの「プレクリア処理（Pre-clearing）」を実施してください。その際、コントロールアガロース（品番：bab-20）またはコントロール磁性アガロース（品番：bmab-20）を利用できます。詳細は以下のトラブルシューティングガイドをご覧ください。

［参考資料］免疫沈降（IP）と共免疫沈降（Co-IP）のトラブルシューティングガイド

【03】結合タンパク質をネイティブ状態で溶出できますか?

0.2 M glycine（pH 2.5）を利用して室温条件で溶出できます。ビーズを60~120秒間ピペッティングし、この手順を繰り返します。1 M Tris base（pH 10.4）を直後に添加して上清を中和してください。

［プロトコール］Halo-Trap® Agarose
［プロトコール］Halo-Trap® Agarose Kit

【04】免疫沈降に必要な哺乳類細胞数を教えてください。

1回の免疫沈降反応で約10^6~10^7の哺乳類細胞の使用をおすすめします。収量は目的のタンパク質や相互作用因子の発現レベルに依存する場合があります。

【05】免疫沈降に必要な細胞抽出物量を教えてください。

哺乳類細胞以外の場合、0.5~1.0mgの細胞抽出物の使用をおすすめします。

【06】質量分析のために、結合タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

免疫沈降後にビーズ上で直接消化する方法も利用可能です。より迅速で効率的なサンプル前処理と高収率を実現します。詳細は以下の資料をご覧ください。

［参考アプリケーション］MS解析用On-bead digestプロトコール

【07】酵素アッセイのために目的タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

いいえ、活性中心がブロックされていない限り、直接酵素アッセイが可能です。詳細は以下の資料をご覧ください。

［参考アプリケーション］ワンステップ精製：GFPタグ融合タンパク質の酵素活性検出

【08】1回の免疫沈降に必要なNano-Trap量を教えてください。

親和性が非常に高いため、1回の反応あたり25 µL（Nano-Trap slurry量）で十分です。

【09】各Halo-Trap®（アガロース、磁性アガロース、磁性ビーズ）の違いを教えてください。

各ビーズの特性（表1）に基づいて以下のように推奨します。

アガロースビーズ（Agarose）：非常に低いバックグラウンドおよび高い結合能を必要とするIPに最適
磁性アガロースビーズ（Magnetic Agarose）：磁気分離および高い結合能を必要とするIPに最適
磁気ビーズ（Magnetic Particles M-270）：磁気分離および非常に大きなタンパク質を対象とするIPに最適

表1. Halo-Trap® 各種ビーズの特性
Halo-Trap® 結合担体	アガロース	磁性アガロース	磁気ビーズ
ビーズ詳細	アガロース（4% cross-linked）	磁性アガロース（6% cross-linked）	磁気ビーズ M-270
ビーズ形状	多孔質	多孔質、鉄コア	固体
結合抗体	抗Halo組換えモノクローナルVHH抗体
分離可能なタンパク質サイズ*	小～大（<200 kDa）		小～大（<200 kDa）特大（>200 kDa）
ビーズ外観	白	黒	茶
ビーズサイズ	90 µm	40 µm	2.8 µm
結合能（10 µLあたり）	9 µg	8 µg	0.5 µg
バックグラウンド	非常に低い	低い
磁気分離/自動化	No	Yes
最大遠心力（x g）	2,500 x g	800 x g	8,000 x g

*タンパク質のサイズ、形状、多量体/複合体、相互作用因子に依存します。

使用例

■ Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）（品番：ota-10/-20/-100/-200/-400）

図1
Immunoprecipitation of Halo-tag protein with Halo-Trap. I: Input, FT: Flow-through, B: Bound

■ 全ての評価データはこちらから閲覧できます

Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）（品番：ota-10/-20/-100/-200/-400）検証データ

Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）

■アガロースビーズ標識モノクローナル抗体（組換えVHH抗体）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Anti Halo, Halo-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	OTA-10	10 RXN	￥55,000
Anti Halo, Halo-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	OTA-20	20 RXN	￥92,000
Anti Halo, Halo-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	OTA-100	100 RXN [5 x 20 rxns]	￥415,000
Anti Halo, Halo-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	OTA-200	200 RXN [10 x 20 rxns]	お問い合わせ
Anti Halo, Halo-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	OTA-400	400 RXN [20 x 20 rxns]	お問い合わせ

［関連］Halo-Trap® Agarose beads（アガロースビーズ標識Halo抗体）キット

■ 「推奨バッファー」も入ってお得な免疫沈降（IP）キットです。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Halo-Trap Agarose beads, kit (Alpaca)	PGI	OTAK-20	20 RXN	￥115,000

「アガロースビーズ標識Halo抗体」と「バッファー類（Lysis buffer、RIPA buffer、Dilution buffer、Wash bufferを含む）」のセット商品です。

［関連］Binding Control Agarose（コントロールアガロース）

「結合コントロール」または「プレクリア処理（Pre-clearing）」に利用できるアガロースビーズです。VHH抗体は結合していません。プレクリア処理に関しては、プロテインテック社ブログ記事「ヒントとコツ | 免疫沈降（IP）でバックグラウンドを低減するための最適化方法外部リンク」をご参照ください。