Proteintech(PGI)社商品 FAQ・トラブルシューティング
商品詳細 「プロテインテック(Proteintech)社抗体のご紹介」
1. 細胞ペレット(培養1Lから)をPBSTバッファー30-35mLに懸濁します。
2. 細胞をアイスバス中で6分間超音波処理(200W)します。
3. 細胞ライセートを、4℃、8000rpmで、約13分間遠心し、上清を捨てます。
4. ペレットをTNMFX-2M 尿素バッファー5mLに再懸濁し、10mLの遠心管に移します。
5. 溶液をアイスバス中で1分間超音波処理(200W)します。
6. さらにTNMFX-2M 尿素バッファー5mLを遠心管に加え、4℃で30分間ローター上で回転させます。
7. 4℃、4000rpmで20分間遠心し、上清を捨てます。
8. ステップ4-7を繰り返します。
9. ペレットをTNMFX-0.1% Triton-X100 5mLに再懸濁します。
10. 溶液をアイスバス中で1分間超音波処理(200W)します。
11. さらにTNMFX-0.1% Triton-X100 5mLを遠心管に加え、4℃で30分間ローター上で回転させます。
12. 4℃、4000rpmで20分間遠心し、上清を捨てます。
13. ステップ9-12を繰り返します。
14. ペレットに2倍容量のdH2Oを加え、ボルテックスして洗浄します。1000rpmで2分間遠心します。上清が澄明になるまで洗浄を繰り返します。ペレットを回収します。
15. 実施するアプリケーションに応じてタンパク質を希釈します。a)免疫化には、1.5倍容量の8M尿素(pH 8)、b)抗体精製には、2倍容量の2%サルコシル添加PBSを加え4℃でオーバーナイトインキュベートします。1000rpmで7分間遠心し、上清を回収します。
■ バッファー
TNMFX-2M 尿素バッファー |
1000mL |
50mM Tris-base |
6.06g |
150mM NaCl |
8.77g |
1mM EDTA |
0.37g |
2M Urea |
120.20g |
Add ddH2O to 1000 mL |
Adjust to pH 8.0 |
|
PBSTバッファー |
1000mL |
58mM Na2HPO4 |
8.24g |
17mM NaH2PO4 |
2.04g |
68mM NaCl |
3.98g |
1%Triton-X100 |
10mL |
Add ddH2O to 1000 mL |
Adjust to pH 7.4 |
|
TNMFX-0.1% Triton X100 |
1000mL |
50mM Tris |
6.06g |
150mM NaCl |
8.8g |
1mM EDTA |
0.4g |
0.1% Triton-X100 |
1mL |
Add ddH2O to 1000 mL |
Adjust to pH 8.0 |
|
2%サルコシル添加PBS |
200mL |
58mM Na2HPO4 |
1.65g |
17mM NaH2PO4 |
0.41g |
68mM NaCl |
0.80g |
2% Sarkosyl |
4.00g |
Add ddH2O to 200 mL |
Adjust to pH 8.0 |
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8M 尿素バッファー |
200mL |
Urea |
96.08g |
Add ddH2O to 200mL |
Adjust to pH 8.0 |
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