商品詳細 「OxiSelect™ HNE付加体測定 競合ELISAキット」
対象商品： STA-838
- 【01】 HNE付加物をテストする前に、私のサンプルはどの程度保存できますか?
- 【02】 EDTA血漿はこのキットに適合しますか?
- 【03】 HNE Adduct ELISAキットは、種特異性はありますか?
- 【04】 HNE Adduct Competitive ELISAキットは、組織ライセートに適合しますか?
- 【05】 このELISAにどれくらいの細胞数を用いればよいですか?
- 【06】 ライシスバッファーにPMSFやオルトバナジウム酸を加えても良いですか?
- 【07】 ストップソリューションはどのタイミングで入れればよいですか？
- 【08】 スタンダードカーブはどのように描けばよいですか?
- 【09】 96ウェルプレートは、複数回の実験に用いることができますか?
フリーのHNEはとても不安定ですが、HNE付加物はとても安定で-80℃で6ヶ月はHNEの分解がなく保存できます。凍結融解は避けてください。
組織サンプルは、このアッセイに適合します。ライセートの調製は、どんなライシスバッファーでも構いません。
残念ながら、サンプルのHNEレベルに依存するためライセート調製に用いる細胞数については言及できません。CBL社では、小スケールでスタンダードカーブに対するサンプルのタイトレーションを行い、その後に最も濃いサンプルから始め、段々希釈していくことをお奨めします。
PMSFはプロテアーゼインヒビターでオルトバナジウム酸ナトリウムは、チロシンホスファターゼのインヒビターですが、どちらもHNE Adduct ELISAキットの反応を干渉することはないでしょう。
飽和するまでにかかる時間は実験ごとに異なる可能性があるため、インキュベーション時間には広い範囲を指定しています。 ストップソリューションをいつ添加するかは主に経験に基づいており、長く待つとサンプルが飽和してしまいます。 スタンダードが飽和しないようにするには、標準曲線のあるウェルに着目ください。最高濃度では明るい青色が発色し、最低濃度では非常に薄い色が発色します。 濃度の増加で綺麗なグラデーションが確認できたら、ストップソリューションを追加してください。 予め設定された時間でストップソリューションを添加するのではなく、目視で標準曲線ウェルのグラデーションを確認してから添加することをお勧めします。
標準曲線から濃度を決定する最善の方法は、4パラメーターカーブフィッティングを使用することですが、このソフトウェアをお持ちでない場合は、Excelを使用して行うことができます。 ELISAで作成された標準曲線は通常線形ではありませんが、サンプル値がこの範囲内であれば、曲線の上限値と下限値を削除することで直線とすることができます。 それは y = mx + b で x を解くことによって（ (OD値-b)/m ）濃度を計算することができます。
